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SPOP在急性髓系白血病中的表达及其生物学功能研究
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作者 万雪莹 许晶 +1 位作者 刘晓丽 王宏伟 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第1期32-38,共7页
目的:研讨SPOP在急性髓系白血病(AML)患者中的表达情况及其对AML细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:采用荧光定量PCR法检测初发AML患者和正常对照者骨髓样本中SPOP mRNA的表达。通过脂质体转染法进行慢病毒包装构建SPOP稳定过表达的AML... 目的:研讨SPOP在急性髓系白血病(AML)患者中的表达情况及其对AML细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:采用荧光定量PCR法检测初发AML患者和正常对照者骨髓样本中SPOP mRNA的表达。通过脂质体转染法进行慢病毒包装构建SPOP稳定过表达的AML细胞系THP-1和U937,应用CCK-8法检测SPOP对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对凋亡和周期的作用。Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Bax、Caspase3的表达。结果:正常对照组SPOP mRNA表达水平的中位数为0.9931(0.6303,1.433),AML组为0.5221(0.2422,0.7237),AML组SPOP表达水平显著低于正常对照组(P<0.001)。将SPOP过表达后,U937过表达组凋亡细胞比例为10.9%±0.3%,明显高于空载组的8.9%±0.3%(P<0.05);THP-1过表达组凋亡细胞比例为4.6%±0.15%,明显高于空载组的3.0%±0.30%(P<0.05)。U937过表达组和THP-1过表达组Caspase3表达量分别为1.154±0.086、1.2±0.077,均高于空载组(空载组为1)(均P<0.05);U937过表达组和THP-1过表达组Bax/Bcl-2比值分别为1.328±0.057、1.669±0.15,亦高于空载组(空载组为1)(均P<0.05)。在细胞增殖实验中,U937过表达组和THP-1过表达组细胞数量均略微低于空载组,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。在细胞周期实验中,U937过表达组和THP-1过表达组处于G1期细胞比例均略微高于空载组,但比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:SPOP可以促进白血病细胞的凋亡,其机制可能与Bcl-2下调,Bax、Caspase3上调有关。 展开更多
关键词 SPOP 急性髓系白血病 细胞增殖 凋亡 细胞周期
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正常人骨髓不同细胞群中WT1基因表达及其异构体比例研究 被引量:5
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作者 徐菁 王宏伟 +5 位作者 李晓红 朱镭 张丽 张帆 覃艳红 杨涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期603-606,共4页
本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT... 本研究探讨WT1基因在正常人骨髓不同分化阶段造血细胞中的表达程度及异构体间比例关系。采用实时荧光定量RT-PCR方法检测18例正常人骨髓标本中CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+、CD33+CD14+、CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中总WT1、WT1(+17AA)及WT1(+KTS)的表达。结果表明:与K562细胞相比,CD34+CD38-、CD34+CD38+、CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中均存在WT1基因的低表达,且依次逐渐降低;在CD20+CD5-和CD20-CD5+细胞群中未检测到WT1基因表达。在分化程度较低的CD34+CD38-和CD34+CD38+细胞群中以+17AA,+KTS及WT1(+/+)异构体为主,而较成熟的CD15+CD11b+和CD33+CD14+细胞群中以-17AA、-KTS及WT1(-/-)异构体为主。结论:在正常人骨髓细胞中WT1基因的表达随着细胞分化程度提高而降低,造血细胞可能通过其4种异构体比例的调整而发挥抑制或促进分化的作用。 展开更多
关键词 骨髓 WT1基因 WT1基因异构体 基因表达
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功能化氧化石墨烯载带荧光探针检测白血病细胞(英文) 被引量:1
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作者 李然 覃艳红 +4 位作者 陈秀花 任方刚 张耀方 徐智芳 王宏伟 《新型炭材料》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期438-443,共6页
分别以细胞外实验和和细胞内实验来观察功能化氧化石墨烯(GO)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的检测情况。通过比较不同探针浓度、温度、孵育时间等因素,探索最佳条件。结果表明,在室温下,GO吸附200 nmol/L单链DNA荧光探针,并淬灭... 分别以细胞外实验和和细胞内实验来观察功能化氧化石墨烯(GO)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的检测情况。通过比较不同探针浓度、温度、孵育时间等因素,探索最佳条件。结果表明,在室温下,GO吸附200 nmol/L单链DNA荧光探针,并淬灭其荧光;当与含靶分子(PM L/RARα融合基因)的NB4细胞共孵育1小时后,探针便脱离GO,荧光得以恢复,从而准确检测出NB4细胞。 展开更多
关键词 氧化石墨烯 荧光探针 检测 功能化
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WT1异构体比例转变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 徐菁 覃艳红 +3 位作者 张翠明 乔爱秀 李灵敏 王宏伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期923-927,共5页
目的:探讨WT1异构体比例改变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响。方法:逆转录获得人WT1(17AA-/KTS-)异构体全长cDNA序列,连接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒质粒载体上,酶切和测序证实正确构建重组质粒,建立WT1异构体表达比例改变... 目的:探讨WT1异构体比例改变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响。方法:逆转录获得人WT1(17AA-/KTS-)异构体全长cDNA序列,连接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒质粒载体上,酶切和测序证实正确构建重组质粒,建立WT1异构体表达比例改变的单克隆细胞株。MTT法检测细胞增殖活性,形态学观察及Annexin V检测细胞凋亡。结果:成功构建了真核表达载体PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),转染HL-60细胞后,实时荧光定量RT-PCR和Western blotting显示重组质粒转染细胞中WT1(17AA-/KTS-)mR-NA和蛋白水平明显高于空质粒转染组和正常对照组。重组质粒转染细胞的生长抑制率高于空质粒转染组和正常对照组,差异显著(P<0.05)。加2μmol/L三氧化二砷(As2O3)培养48 h后,形态学观察发现3组细胞都出现了凋亡形态,但重组质粒转染细胞更为明显。流式细胞术结果显示,As2O3作用24 h后,重组质粒转染细胞凋亡率较空质粒转染组和正常对照组细胞升高,差异显著(P<0.05)。结论:增加外源性WT1(17AA-/KTS-)异构体的表达能抑制HL-60细胞增殖,促进As2O3诱导的细胞凋亡。 展开更多
关键词 WT1蛋白 蛋白异构体 白血病 细胞凋亡
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FBL3细胞在小鼠体内外诱导CD4^+CD25^+调节性T细胞增殖的实验研究
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作者 张帆 史红鱼 +3 位作者 樊卫平 朱镭 程育胜 王宏伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期518-520,525,共4页
目的:通过小鼠体内外实验观察肿瘤细胞是否可以诱导CD4+CD25+Treg的分化增殖。方法:将小鼠的红白血病瘤细胞系FBL3接种于C57BL/6小鼠腹壁皮下,流式细胞仪检测小鼠外周血、脾脏及瘤组织CD4+CD25+Treg细胞含量,RT-PCR检测小鼠脾脏及瘤组织... 目的:通过小鼠体内外实验观察肿瘤细胞是否可以诱导CD4+CD25+Treg的分化增殖。方法:将小鼠的红白血病瘤细胞系FBL3接种于C57BL/6小鼠腹壁皮下,流式细胞仪检测小鼠外周血、脾脏及瘤组织CD4+CD25+Treg细胞含量,RT-PCR检测小鼠脾脏及瘤组织Foxp3 mRNA的表达;体外实验检测FBL3细胞培养上清液对小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞的作用。结果:荷瘤鼠外周血CD4+CD25+Treg比例与正常鼠比较无统计学差异(P>0.05),但荷瘤鼠脾脏CD4+CD25+Treg比例显著高于正常对照(P<0.01),荷瘤小鼠脾脏组织Foxp3 mRNA的表达量明显增加;体外实验表明FBL3培养上清液促使CD4+CD25+Treg细胞比例增高,并诱导Foxp3 mRNA表达增加。结论:FBL3细胞及其分泌的可溶性物质能诱导CD4+CD25+Treg细胞的增殖,说明是肿瘤的发生促进了CD4+CD25+Treg增高。 展开更多
关键词 CD4阳性T淋巴细胞 肿瘤 FOXP3 MRNA
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