目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Ea...目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。展开更多
文摘目的探讨丹酚酸A(Sal A)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法用含Na_(2)S_(2)O_(4)10 mmol·L^(-1)的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型,加入Na_(2)S_(2)O_(4)无糖Earle′s平衡盐缓冲液,置培养箱(37℃,5%CO_(2))中培养1.5 h(氧糖剥夺)后换为正常培养基培养24 h(再灌注)。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组及OGD/R+依达拉奉(Eda,50μmol·L^(-1))组,继续培养24 h。(1)CCK8法测定细胞存活率。(2)ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL^(-1)β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL^(-1)0、IL-4、转化生长因子β(TGF-β)含量;化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量;比色法测定细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性。(3)Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红系2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、前醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果(1)与细胞对照组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05,P<0.01)。(2)与细胞对照组相比,OGD/R组IL^(-1)β,IL-6和TNF-α含量显著升高,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著降低,ROS和MDA含量显著升高,SOD,CAT和GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低,IL^(-1)0,IL-4和TGF-β含量显著增加,ROS和MDA含量显著降低,SOD,CAT和GSH-Px活性显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与细胞对照组相比,OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组相比,OGD/R+Sal A 5和10μmol·L^(-1)和OGD/R+Eda组Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低,胞核Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达显著升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比,OGD/R+ML385+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组分别与OGD/R+Sal A 1,5和10μmol·L^(-1)组相比,Keap1蛋白表达显著升高,Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激,其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。
