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猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
4
1
作者
曹丙蕾
张群
+2 位作者
凌宗帅
邱洪凯
杨超然
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第4期1772-1776,共5页
采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His...
采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。
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关键词
PRRSV
单克隆抗体
抗原位点
WESTERN-BLOT
IFA
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职称材料
LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用
被引量:
1
2
作者
曹丙蕾
凌宗帅
邱洪凯
《中国动物检疫》
CAS
2014年第8期73-76,共4页
根据GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列,设计了3对特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,以CAV-I DNA为模板,通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法,该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增,在可见光下...
根据GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列,设计了3对特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,以CAV-I DNA为模板,通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法,该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增,在可见光下即可直接观察扩增产物荧光颜色变化来判定结果。特异性和灵敏度试验表明,该LAMP检测方法只对CAV-I有特异性扩增,对其他无关核酸无扩增。与常规PCR检测相比,LAMP的检测灵敏度较好,最低检出限为10-7TCID50,是PCR检测方法的100倍。临床样品检测结果表明,LAMP阳性检出率为36%,与病毒分离鉴定的结果符合率达96.8%,与PCR检测的结果符合率达100%,且快速简便,成本低,适用于基层实验室的快速疾病诊断。
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关键词
LAMP
犬传染性肝炎
犬腺病毒I型
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职称材料
后备猪的饲养管理要点总结
被引量:
1
3
作者
刘纪玉
《今日养猪业》
2014年第6期21-22,共2页
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发...
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发情管理。笔者通过自己的亲身实践以及查阅资料后认为后备猪饲养管理不到位不仅影响下一步的发情、配种和产仔率,而且还会影响到母猪的产后哺乳、断奶后发情以及种猪的利用年限等。
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关键词
后备猪
饲养管理
断奶后发情
利用年限
产仔率
产后哺乳
初情期
繁殖性能
有效乳头
限饲
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职称材料
后备猪的饲养管理要点
4
作者
刘纪玉
《北方牧业》
2015年第4期22-23,共2页
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发...
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发情管理。笔者认为后备猪饲养管理不到位不仅影响下一步的发情、配种和产仔率,而且会影响到母猪的产后哺乳、断奶后发情以及种猪的利用年限等。但是如何进行后备猪的饲养管理?笔者就个人经验进行了总结,希望能对养猪人有所帮助。
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关键词
饲养管理
管理要点
后备猪
利用年限
个人经验
养猪
育肥猪
发情
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
4
1
作者
曹丙蕾
张群
凌宗帅
邱洪凯
杨超然
机构
济南出入境检验检疫局
山东正邦养殖有限公司
山东
省实验中学
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第4期1772-1776,共5页
基金
山东出入境检验检疫局科研项目(SK201401)
文摘
采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。
关键词
PRRSV
单克隆抗体
抗原位点
WESTERN-BLOT
IFA
Keywords
PRRSV
Monoclonal antibody
Antigenic sites
Western-blot
IFA
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用
被引量:
1
2
作者
曹丙蕾
凌宗帅
邱洪凯
机构
济南出入境检验检疫局
山东正邦养殖有限公司
出处
《中国动物检疫》
CAS
2014年第8期73-76,共4页
基金
国家质检总局项目科技计划项目(2012IK015)
文摘
根据GenBank上公布的犬腺病毒I型(CAV-I)E3基因序列,设计了3对特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,以CAV-I DNA为模板,通过条件优化建立了犬传染性肝炎LAMP快速检测方法,该方法能够在63℃恒温下30min内实现目的核酸的大量扩增,在可见光下即可直接观察扩增产物荧光颜色变化来判定结果。特异性和灵敏度试验表明,该LAMP检测方法只对CAV-I有特异性扩增,对其他无关核酸无扩增。与常规PCR检测相比,LAMP的检测灵敏度较好,最低检出限为10-7TCID50,是PCR检测方法的100倍。临床样品检测结果表明,LAMP阳性检出率为36%,与病毒分离鉴定的结果符合率达96.8%,与PCR检测的结果符合率达100%,且快速简便,成本低,适用于基层实验室的快速疾病诊断。
关键词
LAMP
犬传染性肝炎
犬腺病毒I型
Keywords
LAMP
infectious canine hepatitis
canine adenovirus I
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
后备猪的饲养管理要点总结
被引量:
1
3
作者
刘纪玉
机构
山东正邦养殖有限公司
出处
《今日养猪业》
2014年第6期21-22,共2页
文摘
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发情管理。笔者通过自己的亲身实践以及查阅资料后认为后备猪饲养管理不到位不仅影响下一步的发情、配种和产仔率,而且还会影响到母猪的产后哺乳、断奶后发情以及种猪的利用年限等。
关键词
后备猪
饲养管理
断奶后发情
利用年限
产仔率
产后哺乳
初情期
繁殖性能
有效乳头
限饲
分类号
S831.4 [农业科学—畜牧学]
在线阅读
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职称材料
题名
后备猪的饲养管理要点
4
作者
刘纪玉
机构
山东正邦养殖有限公司
出处
《北方牧业》
2015年第4期22-23,共2页
文摘
一部分养猪者认为"后备猪是猪场的命根子",他们对后备猪加大投入,加强饲养管理,但是对于应在哪些方面重点投入和管理却有些界定不清;也有一部分养猪者把后备猪和育肥猪放在一起饲养,认为后备猪只要长好身体就行,根本不重视后备猪的发情管理。笔者认为后备猪饲养管理不到位不仅影响下一步的发情、配种和产仔率,而且会影响到母猪的产后哺乳、断奶后发情以及种猪的利用年限等。但是如何进行后备猪的饲养管理?笔者就个人经验进行了总结,希望能对养猪人有所帮助。
关键词
饲养管理
管理要点
后备猪
利用年限
个人经验
养猪
育肥猪
发情
分类号
S831.4 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
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发文年
被引量
操作
1
猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定
曹丙蕾
张群
凌宗帅
邱洪凯
杨超然
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2014
4
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下载PDF
职称材料
2
LAMP快速检测犬传染性肝炎方法的建立及应用
曹丙蕾
凌宗帅
邱洪凯
《中国动物检疫》
CAS
2014
1
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下载PDF
职称材料
3
后备猪的饲养管理要点总结
刘纪玉
《今日养猪业》
2014
1
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职称材料
4
后备猪的饲养管理要点
刘纪玉
《北方牧业》
2015
0
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