文摘目的:探讨基于外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的DNA差异甲基化修饰位点在肺良恶性结节临床鉴别诊断中的价值。方法:采用850k甲基化芯片检测20例良性肺结节和34例恶性肺结节患者PBMCs的全基因组甲基化状态,初步构建PBMCs来源的良恶性肺结节特异性甲基化图谱并获得差异甲基化位点(differentially methylated positions,DMPs),对DMPs所在的基因进行基因本体(gene ontology,GO)分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。利用LASSO回归分析方法对DMPs进行统计筛选。将36例良性肺结节患者和84例恶性肺结节患者随机分成2组队列(测试队列和验证队列),通过焦磷酸测序方法对所选的位点进行分析验证,并采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线进行分析,计算ROC曲线下面积(area under the curve,AUC),评估其对肺良恶性结节的预测效能。结果:发现队列的良恶性肺结节患者PBMCs差异甲基化图谱具有明显差异。以Δβ>0.06,adjust P<0.01作为预筛选条件共得到421个DPMs。使用LASSO回归分析进一步筛选得到6个CpG位点。根据Pearson相关分析,以及进一步去除具有引物错配风险及引物合成困难的位点,得到cg05460181(AUC=0.793,P<0.0001)和cg08721802(AUC=0.893,P<0.0001)2个位点。测试阶段,通过焦磷酸测序测试2个位点在16例良性肺结节患者及34例恶性肺结节患者中的甲基化水平,发现cg08721802位点对肺良恶性结节具有较高的诊断价值(AUC=0.778,敏感度=85.29%,特异度=56.25%,P<0.01)。验证阶段,在另一个包含20例良性肺结节患者及50例恶性肺结节患者的独立样本集中对cg08721802的甲基化水平进行检测,发现其对区分良恶性肺结节仍具有临床价值(AUC=0.768,敏感度=84%,特异度=50%,P<0.01),cg08721802位点诊断效能明显高于传统肿瘤标志物,cg08721802位点与CEA结合明显提高了对大小为6~20 mm的结节诊断价值。结论:cg08721802甲基化水平在良恶性结节患者中具有明显差异,可以作为良恶性肺结节鉴别诊断的新型分子标志物。
