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氨氯地平通过抑制足细胞的Ca^(2+)内流促进细胞自噬
1
作者 赵韦 徐德苹 +3 位作者 廖开楠 蔡春林 臧丹丹 周海胜 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第7期1179-1186,共8页
目的探究降血压药物氨氯地平对足细胞内Ca^(2+)内流及其自噬的影响。方法体外常规培养永生化的人足细胞(HPC),使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及L型Ca^(2+)阻断剂氨氯地平单独或者联合处理HPC细胞,Ca^(2+)成像系统实时检测药物处理后HPC细胞... 目的探究降血压药物氨氯地平对足细胞内Ca^(2+)内流及其自噬的影响。方法体外常规培养永生化的人足细胞(HPC),使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及L型Ca^(2+)阻断剂氨氯地平单独或者联合处理HPC细胞,Ca^(2+)成像系统实时检测药物处理后HPC细胞内Ca^(2+)通量的瞬时变化;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值变化、Beclin-1、P62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平;流式细胞术检测488 nm处Fluo-4AM的阳性细胞数以分析HPC细胞内Ca^(2+)内流水平;Lyso-Tracker Green活细胞染色分析溶酶体荧光强度;流式细胞术检测HPC细胞凋亡率。结果与对照组比较,AngⅡ组Ca^(2+)瞬时通量和Fluo-4AM阳性细胞数显著增加(P<0.001)、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(P<0.001)和Beclin-1的蛋白表达(P<0.01)均降低、P62的表达升高(P<0.01)、溶酶体荧光强度减弱(P<0.05)、细胞凋亡率升高(P<0.0001)、凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01)、Bax蛋白升高(P<0.001)。与对照组比较,氨氯地平组Fluo-4AM阳性细胞数显著降低(P<0.001)、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(P<0.001)和Beclin-1的蛋白表达(P<0.001)均升高、P62蛋白表达降低(P<0.05)、溶酶体荧光强度增强(P<0.01)、细胞凋亡率降低(P<0.01)、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.001)、Bax蛋白降低(P<0.001)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+氨氯地平组Fluo-4AM阳性细胞数显著降低(P<0.001)、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(P<0.01)以及Beclin-1的蛋白表达升高(P<0.05)、P62蛋白降低(P<0.01)、溶酶体荧光强度增加(P<0.05)、细胞凋亡率降低(P<0.001)、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.001)、Bax蛋白表达降低(P<0.001)。结论氨氯地平抑制足细胞内Ca^(2+)内流,促进足细胞自噬、抑制凋亡,对于预防高血压肾病发生具有一定的作用。 展开更多
关键词 足细胞 氨氯地平 血管紧张素Ⅱ 自噬 CA^(2+) 细胞凋亡
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噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选 被引量：10
2
作者 徐容 沈毅臖 +6 位作者 邓松华 蔡春晓 陈秋莉 贾建安 王锦红 潘欣 潘卫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期535-543,共9页
ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础. 展开更多
关键词 噬菌体展示 分子进化 结构域 组合文库 PROTEIN A PROTEIN L
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康莱特注射液对肿瘤恶病质实验模型的细胞免疫功能影响 被引量：18
3
作者 邓松华 徐振山 +1 位作者 刘爱国 张宝霆 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期445-447,共3页
目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可... 目的探讨癌症恶病质时机体细胞免疫功能变化及康莱特（kanglaite，KLT）对癌症恶病质的治疗作用。方法建立T739小鼠癌症恶病质模型，观察KLT对模型鼠细胞免疫功能的作用。结果KLT可明显降低小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，并可提高NK细胞活性和促进小鼠脾淋巴细胞增殖。结论康莱特对小鼠癌症恶病质时受损的细胞免疫功能有较好的恢复作用。 展开更多
关键词 肿瘤恶病质 药物疗法 康莱特 细胞免疫功能
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新型噬菌体展示载体pCANTAB5S的构建 被引量：14
4
作者 徐容 潘卫 +6 位作者 沈毅 陈秋莉 潘欣 冯春芝 戚中田 刘彦君 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第2期83-86,共4页
目的　进一步改造噬菌体展示载体 ,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库。方法　以 pCANTAB5X IFN α2b重组质粒为模板 ,在上游引物中引入XbaⅠ、SacⅠ酶切位点 ,在下游引物中引入SacⅠ、StuⅠ、SalⅠ酶切位点 ,将用该引物扩增的IFN... 目的　进一步改造噬菌体展示载体 ,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库。方法　以 pCANTAB5X IFN α2b重组质粒为模板 ,在上游引物中引入XbaⅠ、SacⅠ酶切位点 ,在下游引物中引入SacⅠ、StuⅠ、SalⅠ酶切位点 ,将用该引物扩增的IFN α2b衔接片段PCR产物克隆到pMD18 T中 ,再将该片段用XbaⅠ和SalⅠ酶切并将之插入pCANTAB5L的XbaⅠ和SalⅠ位点中 ,经SacⅠ酶切 ,线性载体片段自连 ,构成新型噬菌体展示载体 pCANTAB5S。 结果　限制酶切位点SacⅠ被引入到噬菌体展示载体 ,并校正了pCANTAB5L载体StuⅠ、SalⅠ等位点的读框。结论　成功构建了含读框正确的SacⅠ等多个克隆位点的新型噬菌体展示载体pCANTAB5S ,可用于各种外源随机多肽文库的有效展示。 展开更多
关键词 噬菌体 pCANTAB5S 遗传学 质粒 遗传载体 肽库
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小鼠感染日本血吸虫肝脏损害的动态观察 被引量：8
5
作者 张玉侠 黄大可 +4 位作者 马盼盼 陈柳茜 刘淼 任翠平 沈际佳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期725-729,共5页
目的动态观察和探讨小鼠感染日本血吸虫肝脏虫卵肉芽肿病变及纤维化与血清学改变的相关性。方法小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,定期剖杀小鼠,观察肝脏大体变化并测定肝脏系数;HE染色及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤... 目的动态观察和探讨小鼠感染日本血吸虫肝脏虫卵肉芽肿病变及纤维化与血清学改变的相关性。方法小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,定期剖杀小鼠,观察肝脏大体变化并测定肝脏系数;HE染色及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度;ELISA检测血清谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)含量。放免法检测血清透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量。结果肉眼观察感染后24d肝脏表面开始出现出血点,29d开始出现粟白色肉芽肿;HE染色发现感染后21d肝脏可见灶性炎症,28d始见虫卵,但无肉芽肿反应,29d可见肉芽肿反应并于42d达到高峰;血清ALT/AST在28d明显升高,39d达到高峰,42d开始下降,70d接近正常水平;统计学分析血清转氨酶水平与肉芽肿面积具有相关性。Masson染色表明肝脏纤维化42d开始出现,以后逐渐加重;血清HA、LN随着纤维化的出现而升高,Ⅳ-C水平无明显改变,但统计分析胶原染色面积与血清纤维化指标无相关性。结论肝脏虫卵肉芽肿和纤维化均是导致小鼠血吸虫病肝脏损害的主要原因,血清转氨酶变化与肝脏的肉芽肿病变动态相一致,并呈显著正相关;血清纤维化指标与肝脏早期纤维化病变无相关性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 肉芽肿 纤维化 血清学指标
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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建 被引量：7
6
作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 易进华 徐容 陈秋莉 潘欣 冯春芝 邓松华 戚中田 刘彦君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期298-302,共5页
目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。 展开更多
关键词 噬菌体展示 噬菌粒载体 多克隆位点 多肽接头
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结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值 被引量：7
7
作者 周鹏 丁莹莹 +7 位作者 林子玉 冯娇娇 高彩霞 王锦红 杨华 温宗梅 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1404-1409,共6页
目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病... 目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637-731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Rv3388 特异性 敏感性
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雌性激素对雌性荷瘤小鼠免疫功能及实验性肺转移的影响 被引量：4
8
作者 汪思应 姚立人 +1 位作者 张宝霆 程洁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期459-460,共2页
己烯雌酚（ＤＥＳ）皮下注射于荷瘤（Ｌｅｗｉｓ肺癌，ＬＬＣ）小鼠１５ｄ或２５ｄ，其巨噬细胞（ＭＯ）吞噬功能明显增强；脾细胞对ＣｏｎＡ刺激转化能力提高；脾脏重量增加；抗体产生能力增强。与对照组比较差异均有显著性（Ｐ＜０．... 己烯雌酚（ＤＥＳ）皮下注射于荷瘤（Ｌｅｗｉｓ肺癌，ＬＬＣ）小鼠１５ｄ或２５ｄ，其巨噬细胞（ＭＯ）吞噬功能明显增强；脾细胞对ＣｏｎＡ刺激转化能力提高；脾脏重量增加；抗体产生能力增强。与对照组比较差异均有显著性（Ｐ＜０．０５）。进一步研究发现ＤＥＳ处理后，ＬＬＣ实验性肺转移结节明显减少。 展开更多
关键词 雌激素 淋巴细胞 转化率 转移 肺癌 巨噬细胞
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人巨细胞病毒先天性感染实验室诊断的研究进展 被引量：22
9
作者 金艳 邓松华 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期282-285,共4页
人巨细胞病毒(HCMV)是引起先天性及围生期感染的重要病原微生物之一,HCMV活动性感染的孕妇可通过胎盘或产道感染胎儿和新生儿,导致胎儿宫内发育迟缓及新生儿小头畸形、智力低下、黄疸、肝脾肿大、听力或视力丧失等多脏器、多系统不可逆... 人巨细胞病毒(HCMV)是引起先天性及围生期感染的重要病原微生物之一,HCMV活动性感染的孕妇可通过胎盘或产道感染胎儿和新生儿,导致胎儿宫内发育迟缓及新生儿小头畸形、智力低下、黄疸、肝脾肿大、听力或视力丧失等多脏器、多系统不可逆性损害。由于HCMV感染缺乏特异的临床症状和体征,且大多数呈隐性感染,故确诊HCMV感染主要依靠实验室检测。现对HCMV感染主要的实验室诊断方法予以综述,分析其优缺点,试图寻找更适合于临床上HCMV先天性感染的快速特异性检测方法,提高新生儿HC-MV先天性感染的诊断率。 展开更多
关键词 巨细胞病毒感染/先天性 巨细胞病毒感染/诊断 婴儿 新生 疾病
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全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变 被引量：6
10
作者 汪思应 郑红 +4 位作者 程洁 余科科 许望翔 杨晓明 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第2期88-91,共4页
目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株 (HL60细胞 )凋亡及其分子机制。方法　HL60细胞经ATRA诱导不同时间 ,用活细胞记数法检测细胞增殖情况 ;用流式细胞术 (FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变 ;用核酸提取及... 目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株 (HL60细胞 )凋亡及其分子机制。方法　HL60细胞经ATRA诱导不同时间 ,用活细胞记数法检测细胞增殖情况 ;用流式细胞术 (FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变 ;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化 ;用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变 ;用Westernblot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果　ATRA诱导HL60细胞第 3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞 ,开始出现凋亡 ,第 5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例 ,核酸电泳发现DNA“梯带”现象 ;对照组细胞在透射电镜下核大而圆 ,折光性低 ,染色质均匀 ;而ATRA处理 5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第 3天开始表达增加 ,相应地与细胞凋亡相关的酶———半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)也表达增加 ,而磷酸化的Erk/STAT水平明显下调。结论　ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡 ,其机制可能为 :ATRA诱导细胞后 ,RAR信号途径被激活 ,导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase 3表达上调 ) ,而与细胞增殖相关的信号途径被阻断 (p Erk/p STAT水平下降 ) ,引起细胞增殖阻滞 ,发生凋亡。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 HL60细胞 细胞凋亡 信号途径 早幼粒细胞白血病
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中药川芎嗪对烫伤豚鼠肾脏保护作用的实验研究 被引量：7
11
作者 郑红 徐庆连 +3 位作者 韩之勋 蔡晨 汪思应 陈志武 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第1期13-16,共4页
目的探讨中药川芎嗪对烫伤豚鼠肾脏的保护作用.方法复制30% TBSAⅢ°烫伤豚鼠78只,并随机分成川芎嗪+复苏(治疗组)和复苏(对照组),每组均在烫伤后2、4、8、12、24、48 h 6个时相点,分别采血2～3 ml,用放免法测血浆肾上腺髓质素(ADM... 目的探讨中药川芎嗪对烫伤豚鼠肾脏的保护作用.方法复制30% TBSAⅢ°烫伤豚鼠78只,并随机分成川芎嗪+复苏(治疗组)和复苏(对照组),每组均在烫伤后2、4、8、12、24、48 h 6个时相点,分别采血2～3 ml,用放免法测血浆肾上腺髓质素(ADM)、内皮素(ET)数值;同时在伤后4、12、24、48 h 4个时相点切取肾脏标本,用电镜观察肾脏超微结构改变;另设正常组.结果①血浆ADM:伤后两组各时相点差异均有显著性(P<0.05),8 h达峰值,两组比较对照组低于治疗组,在8、12、48 h各时相点差异有显著性(P<0.05或P<0.01).②血浆ET:两组各时相点均显著升高(P<0.01),治疗组升高明显低于对照组,在8 h内差异有显著性(P<0.05).③肾脏电镜观察:两组伤后4 h即出现明显病理改变,12 h最严重,48 h后减轻.治疗组损害明显轻于对照组.结论 ADM与ET含量变化参与了烧伤休克的发病过程,中药川芎嗪可减轻严重烫伤后肾脏的损害,提高ADM与ET的比值,对烫伤动物豚鼠肾脏有保护作用,ADM有协同作用. 展开更多
关键词 肾/药物作用 川芎嗪/药理学 烧伤/药物疗法
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SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变导致小鼠髓系异常增殖 被引量：5
12
作者 张薇 杨金莲 +5 位作者 胡中倩 卢艳敏 储著朗 余科科 瞿成奎 汪思应 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期682-687,共6页
目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),... 目的:观察激活突变SHP-2酪氨酸磷酸酶是否参与髓系异常增殖的发生。方法:以野生型(WT)和SHP-2^(D61G/+)突变型C57BL/6小鼠为研究对象,计数外周血白细胞,比较脾大小,流式细胞术检测外周血及骨髓髓系来源细胞表面标志分子(Mac-1、Gr-1),并统计外周血Mac-1和Gr-1阳性细胞率及骨髓细胞中红系(Ter119)、髓系(Mac-1、Gr-1)、T(CD3)、B(B220)淋巴细胞系的阳性细胞率,观察骨髓造血干/祖细胞的集落形成(CFU)能力,Western blotting检测外周血白细胞经白细胞介素3(IL-3)和5μg/L,刺激后磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达水平。结果:SHP-2^(D61G/+)突变16周龄组小鼠较WT组外周血白细胞数增多(P<0.05),脾明显增大,同时外周血白细胞的Mac-1和Gr-1阳性细胞率增加(P<0.05),骨髓细胞中Mac-1和Gr-1的阳性细胞率也增多,但红系、淋巴细胞系的变化不明显。同时骨髓中粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)较正常对照组明显增加,白细胞经IL-3刺激后Akt和ERK蛋白磷酸化水平升高。结论:SHP-2D61G突变可能通过MAPK及PI3K的活化而导致小鼠髓系异常增殖。 展开更多
关键词 SHP-2酪氨酸磷酸酶 激活突变 小鼠 髓系增殖
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腺病毒介导mIFN-β基因转染的小鼠黑色素瘤细胞体内致瘤性及抗肿瘤作用的实验研究 被引量：4
13
作者 吴云 徐容 +6 位作者 曹广文 潘卫 陈秋莉 沈毅君 卢海妹 蔡春晓 邓松华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期677-680,共4页
目的　研究腺病毒 (adenovirus,Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体内致瘤性及抗肿瘤作用。方法　用携带mIFN β基因的重组腺病毒载体体外转染B16细胞 ,将该细胞接种于小鼠 ,观察其在小鼠体内的致瘤性及对野生型B16细胞... 目的　研究腺病毒 (adenovirus,Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体内致瘤性及抗肿瘤作用。方法　用携带mIFN β基因的重组腺病毒载体体外转染B16细胞 ,将该细胞接种于小鼠 ,观察其在小鼠体内的致瘤性及对野生型B16细胞的致瘤性有无影响。结果　经腺病毒介导 ,mIFN β基因成功地导入B16细胞并获得有效表达 ;转mIFN β基因的B16细胞的体内致瘤性明显降低 ,并能抑制对侧野生型B16细胞的致瘤性。结论　该研究结果提示利用腺病毒载体携带IFN β基因来开发瘤苗治疗肿瘤具有良好的应用前景。目的　研究腺病毒 (adenovirus,Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体内致瘤性及抗肿瘤作用。方法　用携带mIFN β基因的重组腺病毒载体体外转染B16细胞 ,将该细胞接种于小鼠 ,观察其在小鼠体内的致瘤性及对野生型B16细胞的致瘤性有无影响。结果　经腺病毒介导 ,mIFN β基因成功地导入B16细胞并获得有效表达 ;转mIFN β基因的B16细胞的体内致瘤性明显降低 ,并能抑制对侧野生型B16细胞的致瘤性。结论　该研究结果提示利用腺病毒载体携带IFN β基因来开发瘤苗治疗肿瘤具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 干扰素-Β 瘤苗 腺病毒 黑色素瘤
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部分省市流行病学专家队伍专业水平的调查分析 被引量：3
14
作者 刘世建 张宏伟 +7 位作者 顾春英 杨一风 谭晓洁 常文军 张玉侠 叶冬青 邓松华 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期261-264,共4页
目的 :调查现场流行病学专家的专业水平情况 ,为建立全国性公共卫生突发事件应急体系提供科学依据。 方法 :应用调查表收集部分省市流行病学专业人员的有关资料 ,包括科研学术情况、日常工作、参加现场流行病学培训和实践情况、对当前... 目的 :调查现场流行病学专家的专业水平情况 ,为建立全国性公共卫生突发事件应急体系提供科学依据。 方法 :应用调查表收集部分省市流行病学专业人员的有关资料 ,包括科研学术情况、日常工作、参加现场流行病学培训和实践情况、对当前公共卫生体系的评价 4部分内容。结果 :共随机调查了中国现场流行病学培训项目 (CFETP)成员 1 3人和部分省市各级疾病预防和控制中心 (CDC)人员 (省级 1 6人 ,市级 4 4人 ,区级 33人 ) ,共计 1 0 6人。CFETP成员平均年龄 35 .9岁 ,省级、市级和区级 CDC人员的平均年龄分别为 4 5 .8岁、4 4岁和 5 0岁。男女比例省级 CDC为 1∶ 1 .1 4 ,市级 CDC为 1∶ 1 .2 ,区级 CDC为 1∶ 1 .0 6。CFETP成员、省级、市级和区级 CDC的高级职称比例依次为 6 1 .5 %、5 0 .0 %、2 7.9%和 1 5 .2 %。CFETP成员、省级、市级和区级 CDC的硕士学历比例分别为 2 3.1 %、1 8.8%、9.1 %和 0 ,本科学历比例依次为 76 .9%、6 2 .5 %、5 4 .5 %和2 1 .9% ,而大专以下学历所占的比例依次升高。 CFETP成员、省级、市级和区级 CDC参加现场流行病学培训的人员比例分别为 1 0 0 %、87.5 %、81 .8%、6 6 .7%。在主持设计和参加现场流行病学调查方面 ,CFETP显著高于市级和区级 CDC人员(P<0 .0 1 )。结论 展开更多
关键词 流行病学 专家队伍 专业水平 调查分析 人力资源 现场流行病学调查
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胃癌相关基因Serpine1的RT-LAMP快速检测法 被引量：7
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作者 徐凌 殷建华 +3 位作者 朱秀 唐毕锋 曹广文 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第6期695-697,共3页
目的建立逆转录-环介导的等温扩增快速检测高侵袭型胃癌转移相关基因。方法快速抽提肝转移胃癌患者标本的RNA用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增转移相关基因Serpine1,扩增条件为63℃保温30min,扩增后产物通过特异性内切酶进行鉴定。结果... 目的建立逆转录-环介导的等温扩增快速检测高侵袭型胃癌转移相关基因。方法快速抽提肝转移胃癌患者标本的RNA用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增转移相关基因Serpine1,扩增条件为63℃保温30min,扩增后产物通过特异性内切酶进行鉴定。结果RT-LAMP能特异性快速的扩增目的基因。结论RT-LAMP能因其特异,快速,高效的优点可以广泛运用于肿瘤转移相关基因的检测,对临床早期诊断提供标准。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤 转移
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荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较 被引量：6
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作者 金艳 王明丽 +3 位作者 赵俊 甘霖 刘辉 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第2期193-196,共4页
目的比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HC-MV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据。方法随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测。结果巢式... 目的比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HC-MV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据。方法随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测。结果巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB)DNA的阳性率为22.2%(7/36),荧光定量PCR法检测HCMV DNA的阳性率为30.6%(11/36),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。两种检测方法的一致率为88.9%。结论荧光定量PCR法检测脐血HCMVDNA的灵敏性高于巢式PCR法,更适用于临床新生儿HC-MV先天性感染的检测。 展开更多
关键词 巨细胞病毒感染/先天性 婴儿 新生 疾病 脐血
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内质网在纳米材料毒性效应形成中的作用及机制 被引量：3
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作者 王娟 徐文娟 +3 位作者 王信文 王晶晶 王妹梅 许安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第1期20-31,共12页
随着纳米材料在食品、药物、生物医学等多领域的应用,其在生产使用过程中对人类健康的影响引起了广泛关注.内质网是蛋白质折叠与加工修饰、脂质合成以及Ca^(2+)储存的主要场所,是维护细胞内稳态的重要细胞器.内质网作为纳米材料的主要... 随着纳米材料在食品、药物、生物医学等多领域的应用,其在生产使用过程中对人类健康的影响引起了广泛关注.内质网是蛋白质折叠与加工修饰、脂质合成以及Ca^(2+)储存的主要场所,是维护细胞内稳态的重要细胞器.内质网作为纳米材料的主要靶细胞器之一,在纳米材料引起的毒性效应中起重要作用.本文结合近年来国内外相关研究进展,阐述了纳米银(Ag-NPs)、纳米金(Au-NPs)、纳米二氧化钛(TiO_2-NPs)、纳米氧化锌(ZnO-NPs)、纳米二氧化硅(SiO_2-NPs)、富勒烯(C_(60))、单壁与多壁碳纳米管(SWCNTs/MWCNTs)以及石墨烯与氧化石墨烯(GO)等典型纳米材料对内质网结构与功能的影响,并归纳总结了内质网在不同纳米材料诱导的毒性效应中的作用及其异同点.纳米材料可通过引起内质网应激诱导细胞凋亡、炎症反应以及细胞自噬,还可通过激活IP_3信号通路诱导内质网Ca^(2+)释放激活钙依赖的细胞凋亡.纳米材料可在内质网中积累造成结构损伤及功能障碍,还可诱导内质网自噬. 展开更多
关键词 内质网 纳米材料 细胞凋亡 炎症反应 细胞自噬 毒性效应
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SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测 被引量：3
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作者 胡中倩 汪心怡 +6 位作者 李菲菲 储著朗 邢小翠 李娟 查欣 瞿成奎 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第7期767-771,共5页
目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,... 目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。 展开更多
关键词 SHP-2 蛋白酪氨酸磷酸酶 真核表达 突变
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基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达 被引量：3
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作者 章萍萍 潘卫 +7 位作者 曹洁 陈秋莉 王锦红 张华群 葛宜兵 祁培培 刘超 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第6期617-622,共6页
目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析... 目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1～404 aa)及其跨膜疏水区(351～378 aa)缺失突变体E2(1～350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1～404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1～404)和pET21b-E2(1～350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1～350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1～404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351～378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。 展开更多
关键词 CHIKV-E2 跨膜疏水性蛋白 全基因合成 缺失突变体 原核表达
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TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响 被引量：3
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作者 王敏 王晓辉 +6 位作者 唐刘君 李长燕 董晓明 周扬帆 杨晓扬 杨晓明 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第11期1113-1116,共4页
目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方... 目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。 展开更多
关键词 NF-ΚB TRAF6 荧光素酶报告基因
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