肺纤维化微环境中肺泡巨噬细胞的蛋白质组学分析 被引量：1

1

作者 伍霞艳 柳迪 +4 位作者 刘禹辰 汲淑慧 付斌 刘莹 唐丽 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2757-2772,共16页

目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子... 目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子,招募更多免疫细胞到受损区域,维持并加剧炎症,从而发挥负面作用。目前,大多数研究聚焦于肺纤维化微环境AMs的基因表达水平,而在蛋白质功能和调控方面的报道较少。本研究旨在探讨正常生理条件下与肺纤维化后AMs的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),以便更全面地理解AMs在肺纤维化发展过程中的作用。方法本研究建立博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型,利用流式细胞分选技术收集来自生理盐水对照组和肺纤维化模型的AMs(每个样本2.5×105个细胞),通过无标记蛋白质组学方法获得蛋白质表达谱。结果通过将生理盐水组与已公开的生理AMs蛋白质组数据比对发现,本研究产出的蛋白质组数据质量较高,能够满足研究需求。综合分析结果显示,与对照组相比,博来霉素组AMs有778种蛋白质表达上调。此外,上调的DEPs中富集通路包括I-κB/NF-κB通路、炎症反应调节通路、吞噬调节通路、TGF-β通路和HIF-1通路,表明肺纤维化微环境中的AMs具有促炎和促纤维化功能。对DEPs的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析表明,Tlr2和Pycard之间的相互作用是AMs促炎表型的控制节点,从而导致肺纤维化进展。结论本研究探讨了AMs在肺纤维化微环境中蛋白质表达谱的变化。结果发现,AMs显著上调多条与炎症和纤维化关联的通路蛋白,并提示Tlr2和Pycard的相互作用是AMs表现出高度促炎活性的控制节点。 展开更多

关键词 蛋白质组学 肺泡巨噬细胞 博来霉素诱导肺纤维化

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲状腺乳头状癌患者外周血Treg细胞和NK细胞检测及其临床意义

2

作者 孙鑫 刘业海 郑美娟 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第1期23-31,共9页

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)患者外周血免疫抑制性调节性T细胞(Treg细胞)和自然杀伤(natural killer, NK)细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法 对结节性甲状腺肿患者和PTC患者的病理组织切片进行HE染色,... 目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)患者外周血免疫抑制性调节性T细胞(Treg细胞)和自然杀伤(natural killer, NK)细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法 对结节性甲状腺肿患者和PTC患者的病理组织切片进行HE染色,评估免疫细胞的浸润情况;流式细胞术检测健康对照者(healthy control, HC)和PTC患者外周血Treg细胞和NK细胞的百分比和绝对计数,对比Treg细胞的表型(ICOS、PD-1、Lag3)和IL-10分泌能力;分析NK细胞效应功能(TNF-α、IFN-γ、Granzyme B、Perforin)的改变;流式微球阵列检测血清中细胞因子IL-10的浓度,分析Treg细胞和NK细胞变化及其相关性。结果 PTC组织中炎细胞浸润水平高于结节性甲状腺肿组织;与HC相比,PTC患者外周血中Treg细胞的百分比[(6.86±3.10)%]和绝对计数[(4.97±2.82)×10^(6)个/mL]明显增加,且分泌IL-10的能力[(7.18±3.57)%]增强,并与肿瘤的淋巴结转移和脉管侵犯有关;相反,PTC患者外周血中NK细胞百分比[(16.56±8.44)%]和绝对计数[(3.29±3.12)×10^(6)个/mL]降低,效应功能下降;PTC患者外周血中NK细胞与Treg细胞的比值(2.49±1.60)下降,且两者之间具有显著的负相关(P=0.04,r=-0.625);PTC患者血清中IL-10的浓度升高[(1.30±1.09) pg/mL],并与肿瘤的大小和淋巴结转移有关;PTC患者经1,25-(OH)_(2)-D_(3)治疗后,外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg细胞的百分比[(7.01±2.13)%]和绝对计数[(4.27±1.62)×10^(6)个/mL]及血清中细胞因子IL-10的浓度[(1.27±0.09) pg/mL]明显下降,而循环NK细胞的百分比[(20.6±6.72)%]和绝对计数[(5.63±2.93)×10^(6)个/mL]显著增加。结论 PTC患者呈明显的免疫抑制状态,Treg细胞与NK细胞数量和功能异常与PTC的发生发展及预后有关,提示其在肿瘤免疫治疗中的重要价值。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 TREG细胞 NK细胞 IL-10 1 25-(OH)_2-D_3

在线阅读 下载PDF 职称材料

血浆外泌体miRNA在肺癌组织学类型鉴别中的应用 被引量：4

3

作者 赵子悦 陈玲玉 +3 位作者 陶瑞 王琼 赵大海 徐结苟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期679-684,共6页

目的探讨血浆外泌体microRNA(miRNA)作为生物学标志物鉴别不同肺癌的组织学类型。方法分离慢性肺炎、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者血浆外泌体miRNA,进行高通量测序,... 目的探讨血浆外泌体microRNA(miRNA)作为生物学标志物鉴别不同肺癌的组织学类型。方法分离慢性肺炎、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者血浆外泌体miRNA,进行高通量测序,筛选出候选miRNA。采用qPCR技术检测38例肺腺癌(adenocarcinoma,AC)、20例肺鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)和22例SCLC患者血浆中候选miRNAs的水平。对候选miRNAs和血清学蛋白生物学标志物CEA、CYFRA21-1和NSE的诊断价值进行AUROC分析。结果选择了4个血浆外泌体miRNAs作为候选生物学标志物,其中包括2个新的miRNA(命名为miR-A和miR-B)及miR-1307-3p和miR-18a-5p。结果显示AC、SCC和SCLC患者间miR-A、miR-B和miR-18a-5p的差异有统计学意义(P<0.05)。每种miRNA具有不同的诊断价值,miR-A的诊断效果较好,当与CEA联合应用时,miR-A将诊断AC的特异性提高到95.2%,临界值为17.78 fmol/L;同样,miR-A联合NSE将诊断SCLC的特异性提高到89.7%,临界值为8.81 fmol/L。结论血浆miR-A水平联合CEA或NSE可作为AC或SCLC的潜在诊断指标。 展开更多

关键词 肺肿瘤 小细胞肺癌 腺癌 鳞状细胞癌 外泌体miRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

新生儿脐带血CD4^＋CD25^high调节性T细胞Foxp3的表达 被引量：8

4

作者 唐洁 李柏青 +1 位作者 阮洁 张林杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期365-367,共3页

目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作... 目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作表面和胞内染色后,在流式细胞仪上检测CD4+CD25high Treg细胞的数量及其胞内转录因子Foxp3的表达。结果:脐带血Treg细胞占CD3+CD4+T细胞的比例(3.86%±1.63%)明显高于成人外周血(0.87%±0.74%,P<0.01);而脐带血Treg细胞中表达Foxp3的比例明显低于外周血Treg细胞(23.21%±8.9%vs71.3%±11.6%,P<0.01)。结论:虽然新生儿脐带血CD4+CD25high Treg细胞数量明显高于成人外周血,但Foxp3+细胞数量明显低于成年人,提示在功能上可能尚未成熟。 展开更多

关键词 调节性T细胞 转录因子 新生儿脐带血

在线阅读 下载PDF 职称材料

CD19、CD56在急性髓系白血病RUNX1-RUNX1T1^+突变患者中的表达及其临床意义 被引量：8

5

作者 胡忠利 张凤 +1 位作者 黄保军 潘少君 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期727-732,共6页

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓RUNX1-RUNX1T1表达水平的临床意义,了解表达淋系抗原CD19、CD56的RUNX1-RUNX1T1^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR... 目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓RUNX1-RUNX1T1表达水平的临床意义,了解表达淋系抗原CD19、CD56的RUNX1-RUNX1T1^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测200例初诊AML(non-M3)患者骨髓RUNX1-RUNX1T1表达水平,用流式细胞术检测AML的淋系抗原表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)和总生存率(OS)的关系;对照分析RUNX1-RUNX1T1^+患者中CD56^+和CD56^-以及CD19^+和CD19^-患者在CR1和OS的区别。结果:在RUNX1-RUNX1T1^+的AML患者中,初诊时CD56^+患者具有较低的CR1(P<0.05)。CD19^+患者CR1较CD19^-患者高(P<0.05)。CD56^+患者的OS率显著低于CD56^-患者(P<0.05)。CD19^+患者的OS与CD19^-患者的OS率无显著差异。结论:RUNX1-RUNX1T1^+的AML患者中骨髓CD56^+提示预后不良,CD19^+仅与CR1相关,与OS无关。 展开更多

关键词 急性髓细胞性白血病 RUNX1-RUNX1T1 CD19 CD56 总生存率

在线阅读 下载PDF 职称材料

WT1高表达及CD34^+和Auer^+与急性髓细胞性白血病患者预后的关系 被引量：6

6

作者 胡忠利 黄保军 潘少君 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1670-1674,共5页

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34^+和Auer^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT... 目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34^+和Auer^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT1表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)与总生存率(OS)的关系。比较CD34^+和CD34^-以及Auer^+和Auer^-AM L患者在CR1和OS方面的区别。结果:初诊时WT1高表达的AML具有较低的CR1(P<0.05)。CD34^+患者的CR1较CD34^-者低(P<0.05),Auer^+的AML患者CR1较Auer^-AM L患者高(P<0.05)。WT1高表达组的OS低于低表达组,具有显著性差异(P<0.05)。CD34^+组的OS低于CD34^-组,且具有显著差异(P<0.05),Auer^+组与Auer^-组的OS没有明显差异。结论:AML患者骨髓WT1高表达及CD34^+提示患者的预后不良,Auer小体阳性仅与CR1相关,而与OS无关。 展开更多

关键词 急性髓细胞性白血病 AUER小体 WT1基因 CD34 总生存率

在线阅读 下载PDF 职称材料

Graves'病患者CD4^+CD25^+调节性T细胞功能初探 被引量：5

7

作者 孙伟莉 申勇 +2 位作者 李卫鹏 袁媛 张林杰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期202-205,共4页

目的探讨调节性T细胞(Treg)在Graves’病(GD)发生中所起的作用。方法流式细胞术检测20例GD患者(GD组)和10例健康对照者(健康对照组)外周血Treg数量。3H掺入试验测定Treg与效应T细胞(Teff)共培养环境中的Treg对其增殖抑制作用,ELISA法测... 目的探讨调节性T细胞(Treg)在Graves’病(GD)发生中所起的作用。方法流式细胞术检测20例GD患者(GD组)和10例健康对照者(健康对照组)外周血Treg数量。3H掺入试验测定Treg与效应T细胞(Teff)共培养环境中的Treg对其增殖抑制作用,ELISA法测定白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子的浓度。结果Treg所占CD4+细胞的比例在GD组与健康对照组中差异无统计学意义。GD组的Treg抑制功能与健康对照组相比显著降低。两组之间的细胞因子浓度有一定的差异,GD组IL-10水平显著低于健康对照组,IL-2和白细胞介素-17(IL-17)水平显著高于健康对照组。结论 GD患者的Treg有功能缺陷,与甲状腺自身免疫性疾病的发病有一定的关系。Treg在GD中的诊断价值以及病理生理机制值得进一步探讨。 展开更多

关键词 Graves’病 调节性T细胞 效应T细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成 被引量：4

8

作者 程艳伟 靳梦醒 +3 位作者 闫海 黄大可 黄保军 张林杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1457-1461,共5页

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Wes... 目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。 展开更多

关键词 巨噬细胞 脂多糖 线粒体自噬 PARKIN

在线阅读 下载PDF 职称材料

IL-2诱导外周血单个核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应 被引量：2

9

作者 杨明珍 夏瑞祥 +3 位作者 黄建尧 曾庆曙 程昌斌 谭锦泉 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第4期258-261,共4页

目的　了解白细胞介素 2 (IL 2 )诱导外周血单个核细胞 (PBMC)对肿瘤细胞的杀伤效应 ,探讨其作用机制。方法　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC 5d ,并与Raji细胞株共同培养 ,采用MTT法测定不同时间诱导后的PBMC对Raji细胞的杀伤效应 ;采用... 目的　了解白细胞介素 2 (IL 2 )诱导外周血单个核细胞 (PBMC)对肿瘤细胞的杀伤效应 ,探讨其作用机制。方法　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC 5d ,并与Raji细胞株共同培养 ,采用MTT法测定不同时间诱导后的PBMC对Raji细胞的杀伤效应 ;采用BAS ELISA法检测杀伤活性最大时的IFN γ、TNF α、sFasL的表达 ,采用流式细胞仪检测诱导后PBMC的FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达。结果　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC 5d时 ,都能明显增强对Raji细胞的杀伤活性 ,而且在培养的第 4天杀伤活性最高 (P <0 0 5 ) ,诱导PBMC 4d后 ,FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达与B组相比 ,明显增加 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC能明显增强对Raji细胞的杀伤活性 ,主要是通过诱导PBMC表达IFN γ、穿孔素。 展开更多

关键词 IL-2 外周血单个核细胞 肿瘤细胞 杀伤效应 免疫学

在线阅读 下载PDF 职称材料

辛伐他汀对oxLDL诱导的巨噬细胞活性氧及IL-1β分泌的影响 被引量：2

10

作者 靳梦醒 闫海 +4 位作者 程艳伟 桂丽 胡春松 张林杰 黄保军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期692-696,共5页

目的探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的巨噬细胞内活性氧(ROS)的水平及IL-1β分泌的影响。方法将oxLDL 0、50、100、200 mg·L-1作用于巨噬细胞J774A.1后,采用油红O染色观察脂滴在巨... 目的探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导的巨噬细胞内活性氧(ROS)的水平及IL-1β分泌的影响。方法将oxLDL 0、50、100、200 mg·L-1作用于巨噬细胞J774A.1后,采用油红O染色观察脂滴在巨噬细胞内的聚集情况;用辛伐他汀0.5、1.0μmol·L-1作用于oxLDL处理的巨噬细胞,流式细胞仪检测辛伐他汀作用前后细胞内ROS的水平;Western blot检测pro-caspase-1、cleaved caspase-1和成熟IL-1β的表达情况。结果油红O染色结果表明,oxLDL可导致巨噬细胞内明显的脂质聚集,并于100 mg·L-1作用剂量达到摄取脂质的饱和状态;流式细胞仪结果表明,oxLDL可以诱导脂质聚集巨噬细胞内ROS的水平增加,辛伐他汀作用后,ROS水平由(167±0.47)%下降到(139±0.97)%,并呈明显的剂量依赖;Western blot结果表明,辛伐他汀可抑制oxLDL诱导的caspase-1活化及IL-1β的分泌,辛伐他汀处理组与oxLDL实验组相比,cleaved caspase-1及成熟IL-1β的表达呈下降趋势,灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论在oxLDL诱导的巨噬细胞脂质聚集模型中,辛伐他汀可以抑制巨噬细胞内ROS的产生及caspase-1的活化,并减少IL-1β的分泌。 展开更多

关键词 辛伐他汀 巨噬细胞 活性氧 IL-1Β caspase-1 OX-LDL

在线阅读 下载PDF 职称材料

膝关节骨关节炎患者外周血NK细胞数量增加且表型异常 被引量：2

11

作者 彭志伟 徐斌 +4 位作者 王高远 徐洪港 张瀚元 朱云 徐龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1115-1121,共7页

目的探讨自然杀伤(NK)细胞在膝关节骨关节炎(KOA)外周血中的分布及表型特征。方法采用流式细胞术检测并分析对比无KOA的健康人群与KOA患者外周血中不同表型的NK细胞分布及其表面功能受体人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、自然胞毒受体3(NCR3/N... 目的探讨自然杀伤(NK)细胞在膝关节骨关节炎(KOA)外周血中的分布及表型特征。方法采用流式细胞术检测并分析对比无KOA的健康人群与KOA患者外周血中不同表型的NK细胞分布及其表面功能受体人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、自然胞毒受体3(NCR3/NKP30)的表达情况。结果NK细胞在KOA患者外周血比例明显上调,其中以CD16bright NK细胞升高为主。KOA的NK细胞表面HLA-DR分子表达上调,而NKP30表达明显降低。结论NK细胞在KOA患者外周血中的比例增加,CD16、HLA-DR表达上调、NKP30表达下调。 展开更多

关键词 膝关节 骨关节炎(OA) 自然杀伤细胞 流式细胞术

在线阅读 下载PDF 职称材料

SHIP2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性 被引量：2

12

作者 葛燕梅 叶艳 张林杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期701-706,共6页

目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定... 目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-SHIP2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-SHIP2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染SHIP2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-SHIP2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性SHIP2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。 展开更多

关键词 SHIP2 胃癌 BIM 紫杉醇 细胞凋亡 AKT

在线阅读 下载PDF 职称材料

结核杆菌耐热抗原对A549细胞分泌SP-B和凋亡的影响 被引量：2

13

作者 孙志晓 沙泉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第9期1270-1274,共5页

目的探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响。方法用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组... 目的探讨结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激诱导人肺腺癌细胞系(A549)细胞后对其肺泡表面活性物质相关蛋白B(SP-B)的分泌和凋亡的影响。方法用不同浓度的Mtb-HAg分别刺激诱导A549细胞,相同条件分别培养24、48 h,同时设置空白对照组(对照组1和对照组2)和阳性对照组[脂多糖(LPS)组和姜黄素组]。运用ELISA法检测对照组1、LPS组和实验组1(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h和48 h)培养上清液中的SP-B表达量;使用实时荧光定量PCR法检测对照组1、LPS组和实验组1中基因SFTPB的相对表达量;采用流式细胞技术检测对照组2、姜黄素组和实验组2(2、3μg/ml Mtb-HAg分别诱导A549细胞培养24 h)中A549细胞的凋亡率。结果刺激诱导相同时间,实验组1的SP-B表达量低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);相同浓度刺激诱导随时间的延长,实验组1中SP-B表达量降低的不显著。相同培养时间,随着Mtb-HAg浓度的增加实验组1表达SP-B的基因SFTPB的相对表达量显著低于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);而在相同有效刺激浓度下,其相对表达量随作用时间变化不显著。姜黄素组和实验组2中的A549细胞凋亡率显著高于对照组2(P<0.05)。结论 Mtb-HAg对A549细胞表达SP-B的抑制作用明显,并能诱导A549细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 结核杆菌耐热抗原 A549细胞 肺泡表面活性物质相关蛋白B 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

TRIM32在皮肤黑色素瘤中的表达及预后相关性分析 被引量：2

14

作者 赵丹阳 曹东升 +1 位作者 徐结苟 谢娟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第9期1551-1556,共6页

目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组... 目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组化方法检测TRIM32在CMM患者癌组织和癌旁组织中的表达,统计患者的临床资料,分析TRIM32表达与临床特征的相关性,采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型进行预后分析。结果与HACAT正常皮肤细胞相比,TRIM32 mRNA表达水平在A375黑色素瘤细胞中明显升高(P<0.001),在MV3黑色素瘤细胞中无明显差异(P>0.05)。CMM癌组织中TRIM32蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。CMM患者中TRIM32的表达水平与肿瘤Breslow厚度(r=0.771,P<0.001)、Clark分级呈显著的正相关(r=0.635,P<0.001),与患者的性别、有无溃疡、年龄、肿瘤原发部位均无明显相关性(P>0.05)。TRIM32表达水平、肿瘤Breslow厚度、Clark分级与CMM患者生存时间相关(P<0.01),建立COX回归模型,TRIM32表达水平与CMM患者预后关联显著(P<0.05)。结论TRIM32在A375黑色素瘤细胞和CMM患者癌组织中呈高表达。TRIM32表达水平是影响CMM患者预后的独立风险因素,TRIM32可作为CMM预后判断的参考指标。 展开更多

关键词 TRIM32 皮肤黑色素瘤 免疫组化 预后

在线阅读 下载PDF 职称材料

链脲佐菌素诱导小鼠B细胞可抑制MIN-6细胞分泌胰岛素并促进胰岛素自身抗体的产生 被引量：1

15

作者 秦嫚 徐琴 +4 位作者 汪平 唐倩 孙静茹 魏薇 黄保军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1593-1596,共4页

目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠后B淋巴细胞对自身免疫性糖尿病发展的作用。方法以低剂量STZ诱导ICR小鼠,建立小鼠自身免疫性糖尿病模型,采用放射免疫法和ELISA分别检测胰岛素和胰岛素自身抗体,判断模型的诱导情况;以CD19磁珠分选STZ... 目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠后B淋巴细胞对自身免疫性糖尿病发展的作用。方法以低剂量STZ诱导ICR小鼠,建立小鼠自身免疫性糖尿病模型,采用放射免疫法和ELISA分别检测胰岛素和胰岛素自身抗体,判断模型的诱导情况;以CD19磁珠分选STZ诱导的小鼠以及正常小鼠外周血B淋巴细胞,通过流式细胞术检测磁珠分选情况;以PBS处理的MIN-6细胞为空白对照组(A组),以正常小鼠B细胞和MIN-6细胞共培养为B组,以经20μg/m L脂多糖(LPS)预处理的正常小鼠B细胞和MIN-6细胞共培养为C组,以STZ诱导小鼠后的B细胞与MIN-6细胞共培养为D组,通过SYBRGreen染料实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、放射免疫法分别检测处理后的胰岛素mRNA及其蛋白表达情况,并通过ELISA检测胰岛素自身抗体水平以及转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与A组相比,STZ诱导组小鼠体质量减少、血糖升高、血清中胰岛素含量降低、胰岛素自身抗体升高;通过免疫磁珠分选,以流式细胞仪检测的结果显示,CD19+B细胞所占比例达到98%;与A组及B相比,C组和D组中MIN-6细胞胰岛素mRNA水平以及共培养上清中胰岛素水平均降低,并且胰岛素自身抗体和TGF-β的表达均增加。结论 STZ诱导的自身免疫性糖尿病小鼠模型的B淋巴细胞可能通过增加胰岛素自身抗体的产生来抑制胰岛MIN-6细胞产生胰岛素。 展开更多

关键词 链脲佐菌素 MIN-6细胞 B淋巴细胞 胰岛素 胰岛素自身抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响 被引量：3

16

作者 王鹏 陈曦 +5 位作者 徐恰 刘会 郭若文 刘芸 许尹 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第9期1315-1320,共6页

目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢... 目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢病毒载体质粒pGPU 6_GFP_Neo和敲除质粒PX 459载体连接产生重组载体。并将重组的质粒测序验证,将测序成功的重组质粒载体与包装质粒(psPAX 2、pMD 2.G)共转染293 T细胞进行病毒包装,收集病毒上清液并感染SKOV3细胞,获得稳定敲低和稳定敲除OPTN基因的SKOV3细胞株。RT-PCR检测敲低组OPTN基因的表达的变化,PCR检测敲除组的基因组DNA的变化,Western blot法分析检测OPTN蛋白的表达情况。MTT法检测DDP对卵巢癌细胞增殖的影响,qRT-PCR检测caspase3、Bax、Bcl-2的mRNA的表达情况,Western blot检测caspase3、Bax、和Bcl-2蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒载体和基因敲除载体,在SKOV3细胞中的OPTN蛋白表达降低(敲减细胞株)或完全敲除(敲除细胞株)。OPTN基因被敲减和敲除的卵巢癌细胞(SKOV3)对顺铂(DDP)的敏感性降低;与对照组相比,DDP对细胞抑制率降低(P<0.05,P<0.01),基因敲除的细胞效果更好。通过qRT-PCR和Western blot检测稳定敲减和敲除OPTN蛋白的SKOV3细胞其凋亡相关基因caspase3、Bax的mRNA和蛋白的表达量降低,而Bcl-2的表达量上升(P<0.05,P<0.01)。结论在卵巢癌中降低或去除OPTN基因表达,能够降低卵巢癌细胞对抗癌药物DDP的敏感性,OPTN可能通过影响凋亡相关途径实现的。 展开更多

关键词 卵巢癌 OPTN 基因敲减 基因敲除 细胞耐药性

在线阅读 下载PDF 职称材料

过表达OPTN和TAU-P301-L基因腺相关病毒构建与鉴定 被引量：1

17

作者 陈曦 王鹏 +5 位作者 徐恰 刘会 郭若文 刘芸 许尹 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第11期1649-1654,共6页

目的获得能够过表达OPTN和TAU-P301-L基因的重组腺相关病毒,检测其在体外对293T细胞的感染,并且为阿尔茨海默氏病(AD)研究提供新思路。方法从含有目的基因的大肠杆菌中提取包涵目的基因的质粒,利用PCR扩增获得目的基因,目的基因OPTN构建... 目的获得能够过表达OPTN和TAU-P301-L基因的重组腺相关病毒,检测其在体外对293T细胞的感染,并且为阿尔茨海默氏病(AD)研究提供新思路。方法从含有目的基因的大肠杆菌中提取包涵目的基因的质粒,利用PCR扩增获得目的基因,目的基因OPTN构建到pAAV-IRES-ZsGreen1载体,目的基因TAU-P301L-V5构建到pAAV-CMV-mkate-IRES载体。鉴定质粒阳性克隆并测序。重组质粒pAAV-IRES-ZsGreen1-AAV9-OPTN和pAAV-CMV-mkate-IRES-AAV9-TAU-P301L-V5分别与包装质粒pAAV-RC9、辅助质粒pHelper通过Lipofiter^(TM)2000共转染293T细胞,获得AAV9病毒。利用相同方法,不使用目的基因构建对应绿色和红色AAV9对照病毒。qPCR法测定重组腺相关病毒载体滴度,病毒载体感染293T细胞进行病毒有效性及安全性鉴定,Western blotting和RT-PCR进行蛋白表达的鉴定,MTT检测OPTN蛋白与TAU-P301-L蛋白对293T细胞活力的影响。结果测序结果显示成功构建pAAV-IRES-ZsGreen1-AAV9-OPTN和pAAV-CMV-mkate-IRES-AAV9-TAU-P301L-V5腺相关病毒载体,qPCR测得病毒滴度为1.0×10^(12) vg/ml,病毒载体感染293T细胞转染效率为33.6%和20.5%, Western blot和RT-PCR显示蛋白过量表达。MTT结果显示OPTN组挽救了TAU-P301-L组的细胞凋亡。结论成功构建过表达OPTN和TAU-P301-L基因的腺相关病毒。OPTN蛋白可以减弱TAU-P301-L蛋白的细胞毒性。 展开更多

关键词 OPTN TAU-P301-L 腺相关病毒 AAV9

在线阅读 下载PDF 职称材料

ABT-737增强Mcl-1小分子抑制剂UMI-77诱导的胃癌细胞凋亡 被引量：1

18

作者 吴萍 李佳佳 +2 位作者 裴新茹 陈坤 胡汪来 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期341-346,共6页

目的探讨在对Mcl-1小分子抑制剂UMI-77不敏感的胃癌细胞中,将Bcl-2/Bcl-xL抑制剂ABT-737与UMI-77联用,增加胃癌细胞凋亡的分子机制。方法 MTS法检测不同浓度UMI-77处理胃癌细胞MGC-803和HGC-27的细胞存活率。在对UMI-77抵抗的HGC-27细胞... 目的探讨在对Mcl-1小分子抑制剂UMI-77不敏感的胃癌细胞中,将Bcl-2/Bcl-xL抑制剂ABT-737与UMI-77联用,增加胃癌细胞凋亡的分子机制。方法 MTS法检测不同浓度UMI-77处理胃癌细胞MGC-803和HGC-27的细胞存活率。在对UMI-77抵抗的HGC-27细胞中,将UMI-77和ABT-737联用,MTS法检测细胞存活情况。Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术分析细胞凋亡情况;JC-1染色,流式细胞术分析线粒体膜电位的变化;Western blot检测caspase-9、caspase-3、PARP-1的裂解,以及Bcl-2家族和IAP家族的表达水平。结果与MGC-803相比,HGC-27细胞对UMI-77较为抵抗,同时它对ABT-737也不太敏感,但是当ABT-737与UMI-77联用后,能明显增加细胞死亡,表现为Annexin V(+)、线粒体膜电位下降、caspases裂解,说明两者联用是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。在此过程中,XIAP、cIAP1和cIAP2的表达水平下降,NOXA、Bcl-2升高及PUMA、Mcl-1降低可能参与了增敏作用。结论在对UMI-77不敏感的胃癌细胞中,将UMI-77和ABT-737联用能明显增加胃癌细胞凋亡。 展开更多

关键词 胃肿瘤 凋亡 BCL-2家族 BH3类似物 MCL-1 ABT-737 UMI-77

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织SHIP2的相互作用蛋白 被引量：1

19

作者 徐良 钱学艺 +3 位作者 任林 邵玉玲 李允允 叶艳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1000-1007,共8页

目的通过酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织标准均一化cDNA文库,寻找与含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2)相互作用的蛋白。方法利用酵母双杂交系统,以SHIP2的P1(SH2+5-Ptase)和P2(PRD+SAM)段作为诱饵蛋白,筛选出人胃黏膜上皮组织... 目的通过酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织标准均一化cDNA文库,寻找与含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2)相互作用的蛋白。方法利用酵母双杂交系统,以SHIP2的P1(SH2+5-Ptase)和P2(PRD+SAM)段作为诱饵蛋白,筛选出人胃黏膜上皮组织均一化cDNA文库中与SHIP2相互作用的蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证。结果挑选出39个阳性克隆,经测序比对分析,回复性杂交,免疫共沉淀试验验证,最终确定一个与SHIP2相互作用的蛋白抗增殖蛋白1(prohibitin1/PHB)。结论酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织SHIP2的相互作用蛋白PHB。 展开更多

关键词 酵母双杂交系统 胃癌 含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2) 抗增殖蛋白1(prohibitin1/PHB)

在线阅读 下载PDF 职称材料

sigma-1受体对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

20

作者 张红丽 徐小立 +2 位作者 戴永铮 应松成 蒋勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第12期1908-1913,1919,共7页

目的探究sigma-1受体在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞系中的表达,并通过特异性siRNA转染降低sigma-1受体在OSCC细胞中的表达,检测对其生物学行为的影响,并初步分析其可能的机制。方法免疫组化法检测人OSCC组织中sigma-1受体的表达。We... 目的探究sigma-1受体在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞系中的表达,并通过特异性siRNA转染降低sigma-1受体在OSCC细胞中的表达,检测对其生物学行为的影响,并初步分析其可能的机制。方法免疫组化法检测人OSCC组织中sigma-1受体的表达。Western blot和免疫荧光法检测人OSCC细胞系中sigma-1受体的表达。利用GEPIA数据库分析sigma-1受体表达水平与OSCC患者预后的相关性。通过转染特异性siRNA下调sigma-1受体表达,CCK-8和Transwell迁移侵袭实验检测转染后OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,qRT-PCR和Western blot检测转染后电压门控钠离子通道亚型Nav1.5在OSCC细胞中的表达水平。结果免疫组化分析结果显示sigma-1受体在OSCC组织中较正常组织为高表达。Western blot检测结果显示,sigma-1受体在4种OSCC细胞系中均有表达。GEPIA数据库分析结果显示,sigma-1受体的表达水平与OSCC患者的总体生存率呈负相关。通过细胞免疫荧光实验结果显示sigma-1受体在CAL-27细胞中主要定位在质膜上。CCK-8分析结果显示sigma-1受体通过siRNA下调表达后降低了CAL-27细胞的增殖。Transwell分析结果显示降低sigma-1受体表达可显著抑制CAL-27细胞的迁移和侵袭。此外,下调sigma-1受体表达后Nav1.5的表达水平被抑制。结论sigma-1受体参与OSCC的发生发展,促进了OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并可能通过调节Nav1.5离子通道参与OSCC的进展。 展开更多

关键词 口腔鳞状细胞癌 sigma-1受体 电压门控钠离子通道 NAV1.5

在线阅读 下载PDF 职称材料