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hnRNPK调控Wnt/β-catenin信号转导通路抑制乳腺癌细胞铁死亡 被引量:1
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作者 马小兰 王娟 +3 位作者 石斌 王南 田治翠 曹佳 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期931-943,共13页
背景与目的:核内不均一核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)是一种调控基因表达和蛋白翻译的RNA结合蛋白,已被发现与多种肿瘤恶性进展密切相关,但其在乳腺癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨hnRNPK对乳腺... 背景与目的:核内不均一核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)是一种调控基因表达和蛋白翻译的RNA结合蛋白,已被发现与多种肿瘤恶性进展密切相关,但其在乳腺癌中的作用尚未明确。本研究旨在探讨hnRNPK对乳腺癌细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,联合生信分析hnRNPK在乳腺癌组织及正常组织中的表达及与临床预后的关系;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组织化学法检测hnRNPK在乳腺癌细胞及组织中的表达;将乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞进行siRNA转染,设置分组为对照组(control)、空载体组(NC)、干扰载体组(si-hnRNPK),采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖能力;高通量RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析hnRNPK富集的生物学功能及信号转导通路,Western blot及活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Fe2+试剂盒检测hnRNPK对铁死亡表型的影响,并利用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)检测敲低hnRNPK对铁死亡的回复作用;通过Western blot检测hnRNPK对Wnt/β-catenin通路蛋白表达的影响。结果:数据库结合生物信息学分析结果显示,hnRNPK在乳腺癌组织中表达上调(P<0.01),hnRNPK高表达组患者总生存期OS低于hnRNPK低表达组(P<0.05);hnRNPK在乳腺癌组织及细胞中呈高表达,敲低hnRNPK后乳腺癌细胞增殖能力减弱(P<0.05);RNA-seq分析发现hnRNPK显著富集铁死亡、凋亡、Wnt/β-catenin信号转导通路;敲低hnRNPK通过促进脂质ROS和MDA产生、Fe2+富集促进乳腺癌细胞铁死亡(P<0.05),且联合Fer-1有效抑制敲低hnRNPK对铁死亡的促进作用(P<0.05);hnRNPK下调导致Wnt/β-catenin信号转导通路中β-catenin、c-Myc表达降低,CK1α、APC、GSK-3β复合物表达升高(P<0.05)。结论:hnRNPK在乳腺癌中呈高表达,敲低hnRNPK通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路促进乳腺癌细胞铁死亡,抑制乳腺癌恶性进展。 展开更多
关键词 hnRNPK 乳腺癌 铁死亡 WNT/Β-CATENIN信号转导通路
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敲低Aurora-A抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡 被引量:4
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作者 李忠贤 韩淑霞 +4 位作者 刘斌 卜稳平 刘迪 严慧 刘清 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期233-239,共7页
目的探讨敲低Aurora-A对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计Aurora-A短发夹RNA(shRNA)片段,构建和包装Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测Aurora-A mRNA表达,Westernblot法检测Aurora-A蛋白及磷酸化水平,... 目的探讨敲低Aurora-A对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计Aurora-A短发夹RNA(shRNA)片段,构建和包装Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测Aurora-A mRNA表达,Westernblot法检测Aurora-A蛋白及磷酸化水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染后的HepG2细胞Aurora-A蛋白磷酸化水平明显降低。敲低Aurora-A后,HepG2细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加。结论敲低Aurora-A的表达抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 AURORA-A 细胞增殖 细胞凋亡 HEPG2人肝癌细胞
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