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MicroRNA-21反义寡核苷酸可以抑制U373MG细胞对替尼泊苷VM-26的耐受性 被引量:6
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作者 王芳 孟颖 +3 位作者 刘民 李欣 刘悦 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期674-678,共5页
脑胶质瘤患者对化疗药物的耐受性是亟待解决的问题之一.microRNA参与了肿瘤发生发展的诸多过程.选取目前临床上常用的治疗脑恶性胶质瘤的化疗药物替尼泊苷(teniposide)VM-26和人恶性胶质瘤细胞系U373MG为研究对象,通过反义寡核苷酸技术... 脑胶质瘤患者对化疗药物的耐受性是亟待解决的问题之一.microRNA参与了肿瘤发生发展的诸多过程.选取目前临床上常用的治疗脑恶性胶质瘤的化疗药物替尼泊苷(teniposide)VM-26和人恶性胶质瘤细胞系U373MG为研究对象,通过反义寡核苷酸技术,应用MTT及细胞生长曲线等方法,发现抑制microRNA-21的功能后,细胞活性明显降低,且可以在一定程度上抑制U373MG细胞对VM-26作用的耐受性,而且这种耐受性的抑制与细胞生长速度关系不大,从而为指导临床用药,探索肿瘤细胞耐受化疗药物的机制提供新的线索. 展开更多
关键词 MICRORNA-21 恶性胶质瘤细胞系U373MG 替尼泊苷VM-26 药物耐受性
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PIWIL1在不同肿瘤细胞中的差异性表达 被引量:10
2
作者 田瑞卿 刘民 +1 位作者 李欣 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1072-1075,共4页
PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,PIWIL2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨PIWIL1的表达差异与肿瘤发... PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,PIWIL2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨PIWIL1的表达差异与肿瘤发生发展的关系.半定量RT-PCR和Western印迹检测多种肿瘤细胞中,PIWIL1在mRNA水平及蛋白水平的表达情况,进一步用免疫组化和免疫荧光检测PIWIL1在细胞中的表达及定位.PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达存在差异,其中一些肿瘤细胞中的表达水平较高,包括卵巢癌,前列腺癌,肝癌,胃癌等细胞.对于肿瘤细胞而言,PIWIL1定位于细胞浆中.因此,PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达差异性可能为肿瘤发生发展的研究提供新的线索. 展开更多
关键词 AGO蛋白 PIWIL1 肿瘤
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喉癌发生相关特异基因筛选与验证 被引量:3
3
作者 吴海东 汤华 +2 位作者 王晶 刘民 李欣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期245-248,共4页
为了检测喉鳞状细胞癌相关的基因表达变化特征,筛选与喉癌发生相关的特异基因.从3名患者体内分别取正常喉上皮组织和喉鳞状细胞癌组织.应用基因芯片技术进行基因表达差异分析及系统聚类分析,并进行半定量RT-PCR验证部分基因芯片结果.本... 为了检测喉鳞状细胞癌相关的基因表达变化特征,筛选与喉癌发生相关的特异基因.从3名患者体内分别取正常喉上皮组织和喉鳞状细胞癌组织.应用基因芯片技术进行基因表达差异分析及系统聚类分析,并进行半定量RT-PCR验证部分基因芯片结果.本实验基因芯片包括7267条探针,其中,在3对样本中,表达发生显著差异的基因共有94条,有31条上调,63条下调,并且系统聚类分析将正常和癌组织各分为一类,半定量RT-PCR结果与芯片结果一致.实验表明,细胞的代谢、生长、信号传递相关基因(如RAN、PDCD10、zyxin、TACSTD1等)参与了喉癌的发生、发展,并可能扮演了重要角色. 展开更多
关键词 喉癌 基因芯片 表达谱 PDCDIO
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筛选调节HBV增殖和HBsAg产生的宿主细胞的miRNA 被引量:2
4
作者 章广玲 王梅梅 +5 位作者 朱丽华 熊亚南 李怡璇 刘民 汤华 袁丽杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期44-48,共5页
目的筛选调节乙型肝炎病毒(HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA。方法用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其... 目的筛选调节乙型肝炎病毒(HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA。方法用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其中HBV DNA的拷贝数。构建筛选到的miRNA的过表达载体,转染HepG22.2.15细胞,也分别用MTS、ELISA和实时定量PCR进行检测。结果 miR-199a-3pASO、miR-210ASO和miR-185ASO促进了HBsAg产生和HBV增殖(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210、miR-185的过表达,分别抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的ASO转染组与对照组相比,分别降低了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P<0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的过表达载体转染组与对照组相比,分别增加了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P<0.05)。结论在没有对细胞的增殖活性产生影响的情况下,miR-199a-3p、miR-210和miR-185抑制了HBV表面抗原的产生和HBV的增殖,miRNA作为病毒与宿主细胞相互作用中的调节因子,在HBV的生命活动周期中具有重要作用。 展开更多
关键词 MIRNA 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒表面抗原
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人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用 被引量:1
5
作者 李海芳 浦永 +2 位作者 汤石明 强冉 汤华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期241-244,249,共5页
目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融... 目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。 展开更多
关键词 Argonaute2蛋白 多克隆抗体 RNA干扰 RNA诱导沉默复合体
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新型含悬挂羧基聚乳酸的制备及其血液相容性和细胞粘附性 被引量:1
6
作者 王蔚 贾小华 +5 位作者 刘媛 王亮 袁直 汤石明 刘民 汤华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期433-435,共3页
Biodegradable α-hydroxyl polyesters,such as poly(lactic acid)(PLA)and poly(lactic-co-glycolic acid)(PLGA)were investigated as scaffolds for tissue engineering.However,polymeric materials on the basis of lactide are l... Biodegradable α-hydroxyl polyesters,such as poly(lactic acid)(PLA)and poly(lactic-co-glycolic acid)(PLGA)were investigated as scaffolds for tissue engineering.However,polymeric materials on the basis of lactide are limited in blood vessel engineering due to their poor hydrophilicity and low affinity for the cells.In this study,the functional polylactide with pendant carboxyl(PLMACA)was synthesized,which was expected to improve the blood compatibility and cell adhesion of polyester based on PLA.The structure and composition of PLMACA were confirmed via {}1H NMR spectrum and the compatibilities for blood and cell were stu-{died.} The results show that the PLMACA is hopeful to be used as blood vessel substitute with good HUVEC adhesion and anti-platelet adhesion. 展开更多
关键词 聚乳酸 血液相容性 内皮细胞 粘附
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慢病毒介导的甲胎蛋白敲减表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖 被引量:1
7
作者 张艳 强冉 +4 位作者 唐晓燕 李怡璇 刘民 李欣 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期48-54,共7页
甲胎蛋白(AFP)是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Wester... 甲胎蛋白(AFP)是原发性肝癌的标志物.本实验室前期研究表明,AFP的表达与肝癌细胞的增殖及细胞周期相关.为了建立高效稳定的AFPsiRNA细胞导入方法,本研究构建了AFP慢病毒siRNA干涉载体pRNAT-U6.2/AFPsiRNA.并将其转入HEK293细胞后,Western印迹表明,pRNAT-U6.2/AFPsiRNA的干扰效率为88.7%(P<0.05).pRNAT-U6.2/AFPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞包装成慢病毒后感染HepG2细胞,感染3 d时GFP的表达量达95%,感染35 d的子代细胞中GFP的表达量仍稳定在85%.GFP表达量的观察显示,慢病毒载体可以高效并稳定表达外源基因.Western印迹结果也显示,HepG2细胞被病毒感染3 d和25 d后,AFP表达水平均有降低,抑制率分别为74.8%和63.4%(P<0.05).克隆形成实验表明,AFP沉默后,细胞克隆形成个数降低63%(P<0.01),表明HepG2细胞增殖能力受到抑制. 展开更多
关键词 HEPG2细胞 甲胎蛋白 RNA干扰 慢病毒
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miR-210靶基因HBVSP2的鉴定
8
作者 章广玲 熊亚南 +4 位作者 朱丽华 王梅梅 甄永占 袁丽杰 汤华 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期501-505,共5页
目的:构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2。方法:构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBV... 目的:构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2。方法:构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBVSP2上靶位点的一段特异性序列插入该质粒中,构建EGFP报告载体pcDNA3/EGFP-HBVSP2,并与miR-210ASO或者pcDNA3.1(+)/pri-miR-210及表达红色荧光蛋白质(RFP)的pDsRed2-N1共同转染HEK293以及HepG22215细胞,用荧光分光光度计定量检测转染后提取的蛋白样品的荧光值。结果:共同转染pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/EGFP-HBVSP2质粒后,EGFP/RFP的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组(P<0.05)。共转染miR-210ASO和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP的表达量高于共转染LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组,差异具有统计学意义(P<0.05)。LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于LacZ和pcDNA3/EGFP组(P<0.05)。结论:成功构建miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210和含有miR-210靶位点的pcDNA3/EGFP-HBVSP2,HBVSP2可能是miR-210的直接靶基因。 展开更多
关键词 质粒 MIR-210 基因 表达 转染
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PIWIL4在人卵巢癌中的表达及其功能研究 被引量:8
9
作者 郭利敏 刘民 +1 位作者 李欣 汤华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期353-357,共5页
采用半定量RT-PCR方法检测人卵巢透明细胞癌ES-2细胞中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4 mRNA表达水平,以及PIWIL4在卵巢癌组织和癌旁正常组织中的表达情况.设计并化学合成针对PIWIL4的siRNA,用脂质体转染法将其转入ES-2细胞内,通过MTT... 采用半定量RT-PCR方法检测人卵巢透明细胞癌ES-2细胞中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4 mRNA表达水平,以及PIWIL4在卵巢癌组织和癌旁正常组织中的表达情况.设计并化学合成针对PIWIL4的siRNA,用脂质体转染法将其转入ES-2细胞内,通过MTT和克隆形成实验,观察PIWIL4-siRNA对ES-2细胞生长活性和增殖能力的影响.半定量RT-PCR实验结果发现,ES-2细胞中,PIWIL4相对PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3,其表达水平最高(P<0.05),而且PIWIL4在卵巢癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01).MTT实验和克隆形成实验结果显示,转染PIWIL4-siRNA的ES-2细胞生长活性和克隆形成率明显低于对照组(P<0.05).由此得出结论:PIWIL4在卵巢癌细胞系ES-2细胞表达较高,且它在卵巢癌组织中的表达明显上调,同时PIWIL4-siRNA可有效抑制ES-2细胞的生长活性和增殖能力,提示PIWIL4可能与卵巢癌发生、发展相关. 展开更多
关键词 卵巢癌 PIWIL4 增殖 RNA干扰 SIRNA
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含悬挂羧基手臂聚乳酸材料的内皮细胞黏附及其细胞活性 被引量:3
10
作者 王珺 王蔚 +5 位作者 刘媛 朱晓翠 袁直 汤石明 刘民 汤华 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2317-2320,共4页
为了考察内皮化材料表面的细胞活性,在前期工作的基础上,分别在聚乳酸(PLA)、乳酸-苹果酸共聚物(PLMA),以及含悬挂羟基或羧基的乳酸-苹果酸共聚物膜(PLMAHE,PLMACA)表面种植人脐静脉内皮细胞(HUVEC),成功地制备了内皮化表面.通过测定内... 为了考察内皮化材料表面的细胞活性,在前期工作的基础上,分别在聚乳酸(PLA)、乳酸-苹果酸共聚物(PLMA),以及含悬挂羟基或羧基的乳酸-苹果酸共聚物膜(PLMAHE,PLMACA)表面种植人脐静脉内皮细胞(HUVEC),成功地制备了内皮化表面.通过测定内皮化材料表面内皮细胞释放的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及一氧化氮的释放量,间接考察了内皮细胞的抗凝血活性;另外,通过内皮化表面的血小板黏附实验,直接观察了血小板在内皮细胞上的黏附情况.实验结果表明,含羧基材料表面的内皮细胞活性比PLA和PLMAHE的高;相对其它材料PLMACA能更有效地保留黏附于其表面内皮细胞的活性,其单位内皮细胞的eNOS以及NO的释放量分别为(41.8±8.1)μmol/104cells和(0.76±0.16)U/104cells.电镜照片(SEM)显示,各种材料表面的内皮细胞均能有效地减少血小板的黏附与聚集;在内皮细胞脱落的区域,PLMACA仍能较好地实现其抑制血小板黏附的功能,有望成为新型血管修复(替代)材料. 展开更多
关键词 内皮细胞 细胞活性 细胞黏附 聚苹果酸
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细胞周期中MicroRNA的调控作用 被引量:9
11
作者 侯丽娟 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期403-407,共5页
MicroRNA是近年来发现并热点研究的一类重要的非编码RNA,在干细胞的更新与分化、体细胞性状与数量的维持、甚至肿瘤细胞的恶性增生等生物学过程中都具有重要的调控作用.microRNA通过与靶位点结合而快速有效地降解靶基因mRNA或抑制蛋白... MicroRNA是近年来发现并热点研究的一类重要的非编码RNA,在干细胞的更新与分化、体细胞性状与数量的维持、甚至肿瘤细胞的恶性增生等生物学过程中都具有重要的调控作用.microRNA通过与靶位点结合而快速有效地降解靶基因mRNA或抑制蛋白的翻译,下调E2F、CDK、cyclin、p21、p27、DNA多聚酶α等关键的细胞周期调控因子的表达,加速或减慢细胞增殖的速度.microRNA对细胞周期的调控还将涉及到微生物感染机体的过程、免疫系统的调控、妊娠期母体的变化、组织的修复、细胞的凋亡与衰老等诸多方面.随着对microRNA调控细胞周期机制的深入研究,microRNA及其靶基因不仅可以作为某些疾病的分子标记物,而且可以用于指导疾病的预防和治疗. 展开更多
关键词 MICRORNA 细胞周期 干细胞 组织分化 肿瘤发生
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RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响 被引量:1
12
作者 任超逸 吴海东 +4 位作者 浦永 汤石明 李欣 刘民 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期55-61,共7页
PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中m... PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用. 展开更多
关键词 结肠癌 SW620细胞 PIWIL1 RNA干扰
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MKI67-siRNA可抑制QGY-7703细胞的生长
13
作者 侯艳艳 刘涛 +2 位作者 李欣 刘民 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期480-485,共6页
为了探讨MKI67在肝癌细胞发生发展中的作用,采用实时定量PCR方法检测人肝细胞癌QGY-7703细胞中MKI67基因表达水平,以及MKI67在肝细胞癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,设计并合成针对MKI67的siRNA,利用脂质体转染法将其转入QGY-7703细... 为了探讨MKI67在肝癌细胞发生发展中的作用,采用实时定量PCR方法检测人肝细胞癌QGY-7703细胞中MKI67基因表达水平,以及MKI67在肝细胞癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,设计并合成针对MKI67的siRNA,利用脂质体转染法将其转入QGY-7703细胞内,通过MTT和细胞集落形成实验观察MKI67-siRNA对QGY-7703细胞生长活性和增殖能力的影响.实时定量PCR结果表明,MKI67在肝细胞癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01).MTT和细胞集落形成实验结果显示,转染MKI67-siRNA的QGY-7703细胞生长活性和集落形成率明显低于对照组(P<0.01).由此得出结论:MKI67在肝癌细胞系QGY-7703细胞中的表达水平较高,且它在肝癌组织中的表达水平明显上调.同时,MKI67-siRNA可以有效抑制QGY-7703细胞的生长活性和增殖能力,提示MKI67可能与肝细胞癌的发生、发展相关. 展开更多
关键词 肝细胞癌 MKI67 增殖 RNA干扰 小干扰RNA
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