环境内分泌干扰物双酚A对小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响 被引量：5

1

作者 刘泽兵 王丽 +2 位作者 叶宣光 于秀杰 张友元 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1076-1080,共5页

目的:探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法:取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Westernblotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴... 目的:探讨环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法:取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Westernblotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴定。采用不同浓度的BPA干预稳定培养48 h的小鼠甲状腺原代培养的滤泡上皮细胞,作用24 h后,光学显微镜观测干预前后细胞生长状态的变化,流式细胞术分析细胞增殖和凋亡,real-time PCR法和免疫细胞化学染色法测定干预前后肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(TRAIL-R1)mRNA和蛋白的表达变化。结果:原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞随BPA刺激浓度的增加,生长状态呈现先促进后抑制的趋势;0.01～0.1μmol/L BPA作用24 h后,细胞增殖呈剂量依赖性增长,0.1μmol/L BPA可显著刺激细胞增殖(P<0.05),而1μmol/L BPA刺激后则表现为细胞增殖水平显著下降(P<0.05);0.1μmol/L BPA刺激后凋亡指数减低(P<0.05);0.1μmol/L和1μmol/L BPA刺激后TRAIL-R1 mRNA表达均显著下调(均P<0.05),蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论:低、中浓度BPA可刺激原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡,而高浓度BPA对细胞主要表现为毒性损害作用。BPA对细胞凋亡的影响可能与TRAIL-R1相关途径有关。 展开更多

关键词 双酚A 细胞增殖 细胞凋亡 甲状腺

在线阅读 下载PDF 职称材料

TPO/TPO抗体与自身免疫性甲状腺疾病的研究进展 被引量：22

2

作者 赵树君 田恩江 陈祖培 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1165-1167,共3页

关键词 自身免疫性疾病 TPOAB 甲状腺疾病 自身抗体 甲状腺过氧化物酶 甲状腺功能异常 AITD 器官特异性

在线阅读 下载PDF 职称材料

中药大黄的综合研究 XXXI.大黄蒽醌衍生物系统分离的改进方法 被引量：27

3

作者 陈琼华 戴汉松 苏学良 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2001年第3期58-60,共3页

西宁大黄小碎片加到 2 0 %硫酸溶液和氯仿的混合液中 ,在水浴中回流以水解、提取。氯仿提取液相继以 5 %碳酸氢钾溶液 ,5 %氢氧化钾溶液振荡提取。提取液分别以盐酸酸化 ,即分离得大黄酸、大黄素、芦荟大黄素及大黄酚和大黄素甲醚混合... 西宁大黄小碎片加到 2 0 %硫酸溶液和氯仿的混合液中 ,在水浴中回流以水解、提取。氯仿提取液相继以 5 %碳酸氢钾溶液 ,5 %氢氧化钾溶液振荡提取。提取液分别以盐酸酸化 ,即分离得大黄酸、大黄素、芦荟大黄素及大黄酚和大黄素甲醚混合物等黄色沉淀物。后者再以硅胶柱层析分离 ,可得大黄酚和大黄素甲醚单体。上述五种蒽醌衍生物再经结晶即得纯品。 展开更多

关键词 大黄 蒽醌衍生物 系统分离 中药

在线阅读 下载PDF 职称材料

PCR-ELISA检测弓形虫实验研究 被引量：15

4

作者 李健 杨秀珍 +1 位作者 梁东春 刘佩梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期356-359,355,共5页

目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR-ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过酶免显色反应测出OD值,以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性... 目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR-ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过酶免显色反应测出OD值,以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性。再分别以104、103弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,取全血、肝组织用PCR-ELISA检测小鼠感染情况。结果本实验中,PCR-ELISA方法的检测阈值为20fg弓形虫DNA,其灵敏度是电泳法的10倍,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。同一样本重复测试5次,结果经统计学检验,一致性良好(Alpha=0.72)。检测感染动物肝组织及全血标本,104、103组分别在感染后第二d、第三d即可测出阳性,两种标本的阳性检出效率无统计学差异(P>0.05)。结论PCR-ELISA是一种快速、敏感、特异、稳定的检测方法,可试用于临床弓形虫病的诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 PCR—ELISA 弓形虫

在线阅读 下载PDF 职称材料

超热中子活化法研究补碘大鼠甲状腺碘水平 被引量：4

5

作者 王雪飞 张芳 +4 位作者 徐清 刘年庆 柴之芳 赵学勤 左爱军 《核化学与放射化学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-9,共4页

低碘饲料喂养的第二代Wistar母鼠,产子后根据其母鼠饮水中KIO3的质量浓度(3 0,0 4,0mg/L),将其分为高碘,适碘和缺碘三组,另用正常鼠饲以低碘饲料和0 4mg/LKIO3+超纯水作为对照组,用超热中子活化法测定第三代幼鼠甲状腺中的碘含量,并用... 低碘饲料喂养的第二代Wistar母鼠,产子后根据其母鼠饮水中KIO3的质量浓度(3 0,0 4,0mg/L),将其分为高碘,适碘和缺碘三组,另用正常鼠饲以低碘饲料和0 4mg/LKIO3+超纯水作为对照组,用超热中子活化法测定第三代幼鼠甲状腺中的碘含量,并用酶联免疫法测定血清中甲状腺激素水平。实验结果表明,与对照组相比,高碘组的总四碘甲状腺原氨酸(TT4)和游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)明显偏低(p<0.001),游离的三碘甲状腺原氨酸(FT3)明显偏高(p<0.001),其第三代幼鼠的体重也明显增高,并伴有甲肿,但甲状腺含碘量无显著差别;适碘组的甲状腺质量、总含碘量和血清激素水平均无显著差别。实验还表明,妊娠期缺碘母鼠产后及时补碘,仔鼠甲状腺中的碘含量和血清甲状腺激素持正常水平。但过量补碘反而引起TT4和FT4水平低下和甲肿。 展开更多

关键词 超热中子活化法 碘过量 甲状腺激素 中子活化分析 碘 血清 微量元素 碘缺乏症

在线阅读 下载PDF 职称材料

温度敏感葡聚糖凝胶的合成及其细胞相容性研究 被引量：4

6

作者 肖飞 邢蕊峰 +4 位作者 董晶 赵义平 陈莉 郭刚 张瑞 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第A05期1835-1838,共4页

合成了N-异丙基丙烯酰胺（NIPAAm）与葡聚糖的共聚水凝胶，利用红外光谱表征了单体和凝胶结构，研究了水凝胶在去离子水和细胞培养基中的温度响应性，并对凝胶进行了细胞培养和脱附研究．结果表明，共聚凝胶具有很好的温度敏感性和细胞... 合成了N-异丙基丙烯酰胺（NIPAAm）与葡聚糖的共聚水凝胶，利用红外光谱表征了单体和凝胶结构，研究了水凝胶在去离子水和细胞培养基中的温度响应性，并对凝胶进行了细胞培养和脱附研究．结果表明，共聚凝胶具有很好的温度敏感性和细胞相容性，可以通过控制温度变化，实现对细胞的无损伤脱附． 展开更多

关键词 水凝胶 N-异丙基丙烯酰胺 葡聚糖 温度敏感 细胞培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

成骨细胞特异性转录因子Osterix的研究进展 被引量：5

7

作者 徐鹏程 王宝利 邱明才 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第4期294-297,共4页

Osterix是目前所发现的调节成骨细胞分化的重要转录因子之一,在各种研究中其表达水平被作为成骨细胞分化程度的标志,其发现为人们进一步阐明骨代谢过程,特别是骨质疏松及其他骨病的机制提供了帮助,笔者将对近5年来关于此基因的研究作一... Osterix是目前所发现的调节成骨细胞分化的重要转录因子之一,在各种研究中其表达水平被作为成骨细胞分化程度的标志,其发现为人们进一步阐明骨代谢过程,特别是骨质疏松及其他骨病的机制提供了帮助,笔者将对近5年来关于此基因的研究作一综述。 展开更多

关键词 OSTERIX 转录因子 骨代谢

在线阅读 下载PDF 职称材料

细胞培养用温度敏感凝胶的合成与性能研究

8

作者 王金燕 贺晓凌 +4 位作者 李世赓 赵义平 陈莉 郭刚 张瑞 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第A05期1854-1857,共4页

用丙烯酸（ARc）对壳聚糖（CS）进行化学改性，合成反应中问体壳聚糖衍生物CS-ARc，进一步合成不同配比的CS-ARc与N-异丙基丙烯酰胺（NIPA）的共聚凝胶P（CS-AAc-NIPA），通过红外光谱和元素分析等表征了产物的结构和组成，并研究了P（C... 用丙烯酸（ARc）对壳聚糖（CS）进行化学改性，合成反应中问体壳聚糖衍生物CS-ARc，进一步合成不同配比的CS-ARc与N-异丙基丙烯酰胺（NIPA）的共聚凝胶P（CS-AAc-NIPA），通过红外光谱和元素分析等表征了产物的结构和组成，并研究了P（CS—ARc-NIPA）凝胶在水中和细胞培养基中的溶胀性能．结果表明共聚凝胶在水中和培养基中均显示较好的温度敏感性．对P（CS-ARc-NIPA）共聚凝胶进行细胞培养研究发现，其表面可成功种植成纤维细胞（L929），细胞贴附生长情况良好，表明材料具有很好的细胞相容性．当环境温度降低后，共聚凝胶发生疏水．亲水变化，导致其表面细胞自动脱附，从而避免了使用酶解法脱附细胞造成的细胞功能损伤．’ 展开更多

关键词 壳聚糖 N-异丙基丙烯酰胺 温度敏感 凝胶 细胞培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

32例新生儿窒息时促性腺及性激素分泌水平观察

9

作者 宋敏 朱文政 李君 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期371-372,共2页

本文用放躬免疫分析技术测定32名新生儿窒息患儿(观察组)和34名健康新生儿(对照组)生后24小时内及第4周血清促性腺及性激素分泌水平。两组在平均胎龄、体重、性别上无显著差异。结果显示:观察组比对照组生后24小时内血清促性腺及性激素... 本文用放躬免疫分析技术测定32名新生儿窒息患儿(观察组)和34名健康新生儿(对照组)生后24小时内及第4周血清促性腺及性激素分泌水平。两组在平均胎龄、体重、性别上无显著差异。结果显示:观察组比对照组生后24小时内血清促性腺及性激素分泌水平明显下降,而第4周则恢复正常。提示窒息-缺氧对新生儿下丘脑-垂体-性腺轴有抑制作用,这种影响是可逆的。 展开更多

关键词 新生儿窒息 促性腺激素 性激素

在线阅读 下载PDF 职称材料

低碘绒猴动物模型的复制及甲状腺形态结构变化的体视学研究 被引量：1

10

作者 杜红艳 阎玉芹 +2 位作者 陈祖培 包日新 费伟华 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1998年第2期43-47,共5页

本文以高级灵长类动物绒猴为研究对象，在国内首次成功地复制了低碘动物模型，对低碘喂养12个月的绒猴进行了血清激素测定，甲状腺重量及甲状腺形态学观察，并应用MIAS－300型图像分析系统测量甲状腺滤泡、滤泡腔的体视学指标。结果表... 本文以高级灵长类动物绒猴为研究对象，在国内首次成功地复制了低碘动物模型，对低碘喂养12个月的绒猴进行了血清激素测定，甲状腺重量及甲状腺形态学观察，并应用MIAS－300型图像分析系统测量甲状腺滤泡、滤泡腔的体视学指标。结果表明，低碘组绒猴血清FT3、FT4、TT3、TT4均低于对照组。甲状腺肿大，滤泡增生密集，滤泡腔变小，胶质减少，上皮细胞增生肥大呈高柱状。体视学指标测量结果表明，低碘组滤泡及滤泡腔的体密度（Vv）、表面积密度（Sv）、平均体积（VQ）、平均表面积（SQ）低于对照组，数密度（Nv）、比表面（S／V）高于对照组。而两组的形状因子（SF）无显著性差别。本研究表明绒猴是复制碘缺乏病动物模型的良好动物。 展开更多

关键词 低碘 对照组 动物模型 体视学 滤泡 甲状腺 SF 灵长类动物 表面积密度 复制

全文增补中

从矿化的骨组织中提取骨细胞的总RNA 被引量：10

11

作者 郭若霖 郭善一 +2 位作者 左爱军 梁东春 张镜宇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期584-586,共3页

描述了两个从以含大量羟基磷灰石 (钙 )和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织 (成年大鼠颅骨 )提取总RNA的改进方法 .紫外分光光度法 (A2 60 、A2 80 和A2 3 0 )和 1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定 .进而以其逆转录的cDNA为... 描述了两个从以含大量羟基磷灰石 (钙 )和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织 (成年大鼠颅骨 )提取总RNA的改进方法 .紫外分光光度法 (A2 60 、A2 80 和A2 3 0 )和 1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定 .进而以其逆转录的cDNA为模板扩增出 β actin和BMP 2基因 ,均表明所得总RNA完整和模板活性俱佳 .每克骨组织中总RNA产量为 5 6 0 展开更多

关键词 总RNA 骨组织 RT-PCR 基因表达 提取

在线阅读 下载PDF 职称材料

胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响 被引量：9

12

作者 梁东春 王宝利 +2 位作者 左爱军 郭刚 张镜宇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2004年第1期45-47,共3页

目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩... 目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩增管家基因β-actin作为内对照。扫描PCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin及BMP-7/β-actin的积分光密度比值,推算BMP-2及BMP-7基因的相对表达水平。结果 IGF-1可以在转录水平增加大鼠成骨细胞中BMP-2及BMP-7基因的表达,并呈明显的剂量依赖关系。结论IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的作用可能是通过增加BMP-2及BMP-7基因的表达来实现的。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1 成骨细胞 BMP-2 BMP-7 基因表达 细胞增殖 细胞分化 骨质疏松症

在线阅读 下载PDF 职称材料

竞争性RT-PCR测定法及BMP-2mRNA的定量检测 被引量：11

13

作者 郭若霖 郭善一 +1 位作者 鲍秋野 张镜宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第5期680-683,共4页

建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.... 建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.PCR反应结束后 ,电泳、拍照 ,扫描所扩增条带密度 ,作回归方程 .根据回归方程 ,计算出正常 7d Wistar大鼠颅骨总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量为 1 .1 2 5amol/μg RNA.结果显示 ,成功构建了大鼠 BMP- 2基因的竞争模板 ,建立了可以测定大鼠颅骨骨细胞总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量的竞争性 PCR方法 . 展开更多

关键词 竞争性PCR 基因表达调控 MRNA 定量检测 BMP-2

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达及意义 被引量：9

14

作者 刘泽兵 王丽 +2 位作者 叶宣光 于秀杰 张友元 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期146-149,共4页

目的探讨甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达对其发生、发展的影响。方法应用免疫组化EnVision法检测36例甲状腺乳头状癌组织、27例甲状腺腺瘤旁组织E-cadherin、β-catenin和cyclinD1的蛋白表达,同时分析... 目的探讨甲状腺乳头状癌组织中E-cadherin、β-catenin和cyclinD1蛋白表达对其发生、发展的影响。方法应用免疫组化EnVision法检测36例甲状腺乳头状癌组织、27例甲状腺腺瘤旁组织E-cadherin、β-catenin和cyclinD1的蛋白表达,同时分析三者表达水平的变化与其它病理参数的关系。结果 E-cadherin在甲状腺乳头状癌的表达下降,阳性率为30.56%(P<0.05),与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.01);β-catenin在癌组织中细胞核/核周区呈强阳性表达,且表达率明显升高为80.56%(P<0.01),其异常表达与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.01);cyclinD1在癌组织中的阳性表达率为72.22%(P<0.01),与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.05)。此外,E-cadherin的低表达与cyclinD1的过表达呈负相关(P<0.05),β-catenin的异位高表达与cyclinD1的过表达呈正相关(P<0.05)。结论 E-cadherin表达缺失和β-catenin异位高表达可能通过诱导cyclinD1的过表达,进而影响甲状腺乳头状癌的发生和发展。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 乳头状癌 E-CADHERIN Β-CATENIN CYCLIND1

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同碘摄入水平对小鼠甲状腺组织Ⅰ型脱碘酶基因表达及酶活性的影响 被引量：7

15

作者 王琨 孙毅娜 +2 位作者 刘嘉玉 阎玉芹 陈祖培 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期320-326,共7页

甲状腺功能与碘摄入水平有密切的关系,甲状腺功能主要是通过其合成的甲状腺激素来实现的.脱碘反应是调节甲状腺激素生物活性的重要方式,不同碘营养状态下甲状腺组织Ⅰ型脱碘酶(D1)基因表达及活性的变化是甲状腺功能调节的重要机制.在成... 甲状腺功能与碘摄入水平有密切的关系,甲状腺功能主要是通过其合成的甲状腺激素来实现的.脱碘反应是调节甲状腺激素生物活性的重要方式,不同碘营养状态下甲状腺组织Ⅰ型脱碘酶(D1)基因表达及活性的变化是甲状腺功能调节的重要机制.在成功建立碘缺乏与不同程度碘过量的Babl/c小鼠模型的基础上,采用实时荧光定量PCR法检测甲状腺组织D1mRNA表达水平,同时以125I-rT3作为底物,结合离子交换层析技术测定甲状腺D1活性,此外,应用竞争结合放射免疫分析方法对甲状腺组织激素进行了检测.结果显示:碘缺乏时,D1mRNA表达和D1活性均显著升高,甲状腺组织内T3与T4水平均显著降低,但T3/T4明显升高;碘过量可明显抑制D1mRNA表达,但对D1活性并无显著影响,甲状腺组织内T3/T4有所下降.上述结果提示,甲状腺Ⅰ型脱碘酶在甲状腺功能调节中具有重要的作用,碘缺乏时D1mRNA表达及活性的上调可促进T4向T3的转化,以满足机体代谢的需要,而过量碘对D1基因表达的抑制可防止过多的T3对机体的损伤,具有重要的生理意义. 展开更多

关键词 Ⅰ型脱碘酶 甲状腺激素 基因表达 甲状腺功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

纳洛酮对离体人脑神经元缺氧损伤干细胞因子和受体表达的影响 被引量：5

16

作者 朱波 李兰英 +2 位作者 吕国义 薛玉良 叶铁虎 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期215-221,246,共8页

目的通过检测神经元细胞内干细胞因子(SCF)及其受体c-kit(c-kitR)mRNA表达量的变化探讨纳洛酮对人胚胎大脑神经元缺氧损伤的影响。方法应用无血清方法原代培养人胚胎大脑神经元,于第10天对神经元进行缺氧结合无糖处理。将24孔培养板细... 目的通过检测神经元细胞内干细胞因子(SCF)及其受体c-kit(c-kitR)mRNA表达量的变化探讨纳洛酮对人胚胎大脑神经元缺氧损伤的影响。方法应用无血清方法原代培养人胚胎大脑神经元,于第10天对神经元进行缺氧结合无糖处理。将24孔培养板细胞随机分为4组:对照组(按照正常培养条件同期培养)、单纯缺氧组(缺氧无糖处理0.5h)、纳洛酮0.5组(纳洛酮0.5μg/ml+缺氧无糖处理0.5h)、纳洛酮10组(纳洛酮10μg/ml+缺氧无糖处理0.5h)。分别于复氧24h后测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)浓度,并应用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞存活情况。将25ml培养瓶按上述方法分组,分别于缺氧前、缺氧后即刻、复氧3、6、12和24h提取细胞内总RNA,应用逆转录聚合酶链反应扩增后,检测SCF和c-kitRmRNA表达量的变化。结果单纯缺氧组细胞MTT值显著低于对照组(P<0.01),纳洛酮0.5组MTT值显著低于对照组,与单纯缺氧组比较差异无显著性,络洛酮10组MTT升高至对照组水平(P>0.05);单纯缺氧组细胞外液LDH浓度显著高于对照组(P<0.05),纳洛酮0.5组与对照组和单纯缺氧组比较差异均无显著性(P>0.05),络洛酮10组细胞外液LDH浓度降至对照组水平(P>0.05);缺氧后即刻,可见SCF/c-kitRmRNA表达量显著升高(P<0.01),其中SCF表达量在24h内呈双峰分布;给予不同浓度纳洛酮后,随药物浓度的增加,各组表达量峰值降低,并且延迟出现,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论 SCF/c-kitRmRNA在神经元缺氧后早期即表达增高。纳洛酮可以减轻细胞损伤,并可调节SCF/c-kitR的表达。纳洛酮对细胞损伤的保护作用可能涉及对某些细胞因子表达的调控。 展开更多

关键词 神经元 缺氧 纳洛酮 干细胞因子 C-KIT受体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠脑cDNA文库的构建 被引量：4

17

作者 宋学文 赵崇 +2 位作者 周仁 郭善一 张镜宇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第2期169-172,共4页

采用简单高效的ｃＤＮＡ合成技术制备Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ｃＤＮＡ基因文库，以纯化的ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ。ｃｏｌｉ... 采用简单高效的ｃＤＮＡ合成技术制备Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ｃＤＮＡ基因文库，以纯化的ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ。ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ除去模板ＲＮＡ，并以Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ｉ，Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ连接酶和Ｔ４ＤＮＡ聚合酶催化合成ｃＤＮＡ第二条链，即成为双链ｃＤＮＡ；此双股ｃＤＮＡ除０．５μｇ用于插入ｐＳＰＯＲＴＩ载体，转入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，建成ｃＤＮＡ文库外，其余保存在－２０℃，以此ｃＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ方法，先后克隆了谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ，１８００ｂＰ）、神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ，１３４０ｂＰ），甲状腺激素受体（Ｔ３－ｒｅｃｅｐｔｏｒ，１２３０ｂｐ）、胆囊收缩素（ＣＣＫ，３４５ｂｐ）的全编码基因． 展开更多

关键词 CDNA文库 Wistar大鼠脑 分子克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

改进竞争性RT-PCR法测定缺碘大鼠颅骨中BMP-2基因表达变化 被引量：2

18

作者 郭若霖 郑红 +2 位作者 郭善一 郭刚 张镜宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期372-376,共5页

为更加精确地测定碘缺乏状态下大鼠颅骨组织中骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )mRNA表达水平 ,改进竞争性RT PCR方法 ,探讨碘缺乏对骨骼发育影响的分子机制 .将构建的DNA竞争模板克隆入pSportⅠ质粒中 ,利用pSportⅠ质粒中所含有的SP6RNA聚... 为更加精确地测定碘缺乏状态下大鼠颅骨组织中骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )mRNA表达水平 ,改进竞争性RT PCR方法 ,探讨碘缺乏对骨骼发育影响的分子机制 .将构建的DNA竞争模板克隆入pSportⅠ质粒中 ,利用pSportⅠ质粒中所含有的SP6RNA聚合酶启动子序列 ,将DNA竞争模板在体外转录成为RNA .以此RNA作为竞争性RT PCR中的竞争模板 ,与所提取的总RNA一同进行RT PCR ,消除逆转录效率对定量结果的影响 .定量检测碘缺乏和正常大鼠颅骨总RNA中BMP 2mRNA的水平 .碘缺乏大鼠 (1d～ 84d)颅骨中BMP 2表达含量明显降低 .1d时降低 6 4 3倍 ,以后差距逐渐缩小 ,至 84d相差 1 5 5倍 .结果提示 ,碘缺乏所致的骨骼发育不良与BMP 2表达不足有关 ,结果首次揭示微量元素碘和甲状腺激素与BMP 展开更多

关键词 RT-PCR 大鼠 颅骨 BMP-2基因 骨形态发生蛋白-2 碘缺乏 骨发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组人ω-干扰素的制备及活性分析 被引量：3

19

作者 左爱军 梁东春 +1 位作者 郭刚 张镜宇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期940-943,共4页

目的:建立人ω-干扰素(hIFN-ω)的大肠杆菌表达系统,为人ω-干扰素的生产及临床应用奠定基础。方法:自抗凝血中提取人基因组DNA,PCR扩增人ω-干扰素成熟肽编码序列克隆入pGEM-T-easy载体,进一步构建表达型重组质粒pBV-IFN-ω,温度诱导表... 目的:建立人ω-干扰素(hIFN-ω)的大肠杆菌表达系统,为人ω-干扰素的生产及临床应用奠定基础。方法:自抗凝血中提取人基因组DNA,PCR扩增人ω-干扰素成熟肽编码序列克隆入pGEM-T-easy载体,进一步构建表达型重组质粒pBV-IFN-ω,温度诱导表达,表达产物行SDS-PAGE及Western blot鉴定。溶解并复性包涵体,细胞病变抑制法测定表达产物的抗病毒活性。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IFN-ω含有开放读码框架正确的人ω-干扰素成熟肽编码序列。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有大小约为20kD的外源蛋白,Western blot证明此外源蛋白为重组人ω-干扰素,并经体外活性测定证实有良好的抗病毒活性。结论:成功地构建了人ω-干扰素(IFN-ω)的大肠杆菌表达系统,表达出具有抗病毒活性的重组人ω-干扰素。 展开更多

关键词 人ω-干扰素 大肠杆菌 表达 活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

碘缺乏所致甲状腺功能低下大鼠骨发育障碍的病理学观察 被引量：2

20

作者 郭刚 郭若霖 +2 位作者 左爱军 梁东春 张镜宇 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期191-191,共1页

目的　探讨发育期缺碘所致甲状腺功能低下造成的发育障碍及对骨发育的影响。方法　复制了第 1代和第 2代碘缺乏大鼠动物模型 ,测定血清中T3 、T4水平 ,拍摄X光片 ,并作股骨远端骨切片观察骨发育情况。结果　甲状腺病理学变化显示 ,从生... 目的　探讨发育期缺碘所致甲状腺功能低下造成的发育障碍及对骨发育的影响。方法　复制了第 1代和第 2代碘缺乏大鼠动物模型 ,测定血清中T3 、T4水平 ,拍摄X光片 ,并作股骨远端骨切片观察骨发育情况。结果　甲状腺病理学变化显示 ,从生后 1d开始 ,碘缺乏大鼠已经出现了甲状腺肿大的典型变化 ,包括 :滤泡体积变小、形状不规则、胶质明显减少或缺如。滤泡上皮细胞增大呈柱状 ,胞浆淡染 ,有空泡变性 ;滤泡间小血管增多 ,充血明显。碘缺乏大鼠的体重在整个发育过程中 ( 1～ 84d)始终低于正常组 ,平均降低了 5 6 %。X光片中可见 ,碘缺乏大鼠的长骨较同日龄正常大鼠短且细 ,骨间隙增大 ,钙化不良。股骨远端骨骺病理切片显示 ,碘缺乏大鼠次级骨化中心形成迟缓且小 ,骨骺生长板中几个软骨细胞区域层次混乱 ,储备细胞数目减少 ,增殖区宽度较正常大鼠者减少。生后补碘可以部分纠正上述改变。结论　碘缺乏导致大鼠发育迟缓 ,体重增长缓慢 ,同时亦引起骨骼发育障碍。生后补碘可以改善骨骼发育。 展开更多

关键词 碘缺乏 甲状腺功能低下 骨发育障碍 病理学 甲状腺激素

在线阅读 下载PDF 职称材料