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嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究
被引量：
7
1
作者
王涛
陈建平
+3 位作者
郅克谦
陶大昌
杨春蕾
张雷
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第9期818-823,共6页
PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和...
PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物,结果发现:重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达,稳定转染细胞分别在 2 4ku和 35ku处检测到阳性杂交信号.将pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN γ产生水平、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标,评价疫苗的免疫原性.结果发现:各实验组均检测到免疫原性,pcDNA3 1 mip/ctxB免疫组的免疫原性高于pcDNA3 1 mip免疫组,有显著性差异(P <0 0 1).
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关键词
嗜肺军团菌
霍乱弧菌
mip/ctxB融合基因
体外表达
免疫原性
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职称材料
幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究
被引量：
5
2
作者
吴利先
杨致邦
+1 位作者
林珊珊
刘淼
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期306-310,共5页
目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30...
目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。
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关键词
幽门螺杆菌
粘附素
霍乱毒素B亚单位
融合蛋白
口服疫苗
免疫应答
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职称材料
题名
嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究
被引量：
7
1
作者
王涛
陈建平
郅克谦
陶大昌
杨春蕾
张雷
机构
四川大学华西医学中心基础医学与法医
学院
寄生虫学
教研室
西安交通大学口腔医
学院
颌面外科
四川大学华西医院
四川大学生命科
学院
医学细胞
生物学
教研室
大理学院微生物学教研室
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第9期818-823,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(3 0 3 0 0 3 0 2)~~
文摘
PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物,结果发现:重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达,稳定转染细胞分别在 2 4ku和 35ku处检测到阳性杂交信号.将pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN γ产生水平、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标,评价疫苗的免疫原性.结果发现:各实验组均检测到免疫原性,pcDNA3 1 mip/ctxB免疫组的免疫原性高于pcDNA3 1 mip免疫组,有显著性差异(P <0 0 1).
关键词
嗜肺军团菌
霍乱弧菌
mip/ctxB融合基因
体外表达
免疫原性
Keywords
Legionella pneumophila
Vibrio cholerae
mip/ctxB fusion gene
expression in vitro
immunogenicity
分类号
R389 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究
被引量：
5
2
作者
吴利先
杨致邦
林珊珊
刘淼
机构
大理学院微生物学教研室
重庆医科大学
微生物学
教研室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期306-310,共5页
文摘
目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。
关键词
幽门螺杆菌
粘附素
霍乱毒素B亚单位
融合蛋白
口服疫苗
免疫应答
Keywords
Helicobacter pylori
Adhesion
CtxB
Fusion protein
Oral vaccine
Immune respones
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究
王涛
陈建平
郅克谦
陶大昌
杨春蕾
张雷
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究
吴利先
杨致邦
林珊珊
刘淼
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
5
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职称材料
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