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MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用 被引量：2
1
作者 刘新建 徐萍 +1 位作者 钱其军 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期386-391,共6页
目的:构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法:PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag(HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及... 目的:构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法:PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag(HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果:成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coliBL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1mg/mlMDA-7/IL-24-HT7融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96h后,细胞凋亡率分别为(34.7±1.3)%和(22.1±0.9)%,显著高于未处理的肿瘤细胞(P<0.01)。结论:带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 MDA-7/IL-24 HALOTAG 融合蛋白 肝肿瘤 大肠肿瘤 凋亡
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壁冠状动脉血流动力学体外模拟 被引量：2
2
作者 丁皓 杨琳 +6 位作者 兰海莲 尚昆 张书宁 孙爱军 王克强 沈力行 葛均波 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第5期432-439,共8页
目的研究心肌桥压迫对壁冠状动脉内血流、正压力、周向应力、切应力的影响。方法对原有的壁冠状动脉模拟装置进行较大改进,使其测量的血流动力学参数从单一应力(正应力)扩展到多种应力,以便更全面准确地模拟在正压力、周向应力、切应力... 目的研究心肌桥压迫对壁冠状动脉内血流、正压力、周向应力、切应力的影响。方法对原有的壁冠状动脉模拟装置进行较大改进,使其测量的血流动力学参数从单一应力(正应力)扩展到多种应力,以便更全面准确地模拟在正压力、周向应力、切应力共同作用下的真实血流动力学环境,从而综合考虑在多种应力共同作用下血流动力学规律与壁冠状动脉粥样硬化之间的关联。结果壁冠状动脉模拟装置实验结果表明,应力的异常主要位于壁冠状动脉近端,随着心肌桥压迫程度加剧,近端的应力平均值与波动值明显增大,正应力平均值升高27.8%,波动值升高139%。结论心肌桥压迫造成壁冠状动脉近端血流动力学发生异常,对认识冠脉粥样硬化发病的血流动力学机理具有重要意义,对于心肌桥的病理影响及治疗具有潜在的临床价值。 展开更多
关键词 心肌桥 壁冠状动脉 动脉粥样硬化 血流动力学 模拟装置
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缝隙连接蛋白connexin 26基因条件性敲除小鼠血管纹超微形态研究 被引量：1
3
作者 林岚 王纾宜 +4 位作者 王云峰 刘少锋 陈岩 林曦 李华伟 《中华耳科学杂志》 CSCD 2011年第1期62-65,共4页
目的观察不同年龄缝隙连接蛋白26(Connexin 26,Cx26)基因条件性敲除小鼠血管纹的超微病理形态学改变,探索Cx26突变的致聋机制。方法将Cx26 loxP/loxP与foxg1-cre转基因小鼠进行杂交,获得Cx26条件基因敲除小鼠模型(Foxg1-Cre cCx26ko条... 目的观察不同年龄缝隙连接蛋白26(Connexin 26,Cx26)基因条件性敲除小鼠血管纹的超微病理形态学改变,探索Cx26突变的致聋机制。方法将Cx26 loxP/loxP与foxg1-cre转基因小鼠进行杂交,获得Cx26条件基因敲除小鼠模型(Foxg1-Cre cCx26ko条件性敲除小鼠,简称为cCx26ko小鼠),与野生型小鼠(wild type,WT)进行对比。分离出小鼠耳蜗标本,先制作半薄切片定位,再行超薄切片,采用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察血管纹细胞的超微病理改变。结果血管纹各种细胞在早期未见异常;出生后120天(postnatal day 120,P120)起细胞内出现溶酶体增多,P180天见巨大吞噬细胞,P360天见色素颗粒。结论 Connexin 26基因条件性敲除小鼠出生后早期血管纹超微形态基本正常。成年转基因动物的血管纹出现超微病理学改变,推测其与细胞异常代谢和衰老有关,这可能是Cx26突变致聋的病理机制之一。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白26 基因敲除 超微形态 血管纹
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Mfn2在环孢素A诱导HeLa细胞生长停滞中的作用 被引量：1
4
作者 朱敏 张雯 +1 位作者 鲍旭霞 李文伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期95-100,共6页
目的:探讨环孢素A(TSA)对He La细胞中线粒体融合蛋白2(Mfn2)表达水平极其下游通路的影响。方法:运用不同浓度的TSA处理He La细胞,分别检测细胞增殖、细胞凋亡以及细胞的周期改变;Western blot检测Ras、p-Raf、Raf、p-ERK、ERK、p-Akt、... 目的:探讨环孢素A(TSA)对He La细胞中线粒体融合蛋白2(Mfn2)表达水平极其下游通路的影响。方法:运用不同浓度的TSA处理He La细胞,分别检测细胞增殖、细胞凋亡以及细胞的周期改变;Western blot检测Ras、p-Raf、Raf、p-ERK、ERK、p-Akt、Akt和Mfn2的蛋白水平;real-time PCR检测Mfn2 mRNA的表达水平;用免疫共沉淀法检测Mfn2与Ras结合的水平。将He La细胞过表达Mfn2后,观察上述指标的改变。结果:TSA对He La的抑制作用呈剂量依赖和时间依赖的特点。He La细胞经TSA处理后,Mfn2的mRNA和蛋白表达水平均显著增高,Mfn2与Ras的结合升高,Raf和ERK的磷酸化水平降低。过表达Mfn2抑制了Ras-Raf-ERK通路并诱导了He La细胞的生长阻滞,但对细胞的凋亡水平影响较小。结论:Mfn2参与了TSA诱导的He La细胞生长阻滞,其效应可能是通过抑制Ras-Raf-ERK通路实现的。 展开更多
关键词 环孢素A MFN2 He La细胞 细胞增殖 Ras-Raf-ERK通路
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在Sox2阳性细胞敲除β-catenin对小鼠内耳发育和极性的影响
5
作者 钱晓青 任冬冬 +2 位作者 丛宁 赵萌 迟放鲁 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期143-150,共8页
目的探究经典Wnt/β-catenin信号通路的核心蛋白β-catenin敲除对小鼠内耳发育和极性的影响。方法在胚胎小鼠内耳感觉上皮的前体细胞(Sox2阳性细胞)条件敲除β-catenin,观察内耳大体结构改变情况。对基底膜和椭圆囊斑、球囊斑行免疫荧... 目的探究经典Wnt/β-catenin信号通路的核心蛋白β-catenin敲除对小鼠内耳发育和极性的影响。方法在胚胎小鼠内耳感觉上皮的前体细胞(Sox2阳性细胞)条件敲除β-catenin,观察内耳大体结构改变情况。对基底膜和椭圆囊斑、球囊斑行免疫荧光染色,观察毛细胞数量、排列和极性的变化情况。结果与对照组比较,β-catenin条件敲除后,听泡体积变小,耳蜗和前庭器变小,前庭感觉上皮毛细胞减少(P<0.01)。耳蜗静纤毛方向紊乱,动纤毛在位置和数量上发生变化,前庭毛细胞方向也产生散在性紊乱。结论β-catenin调控小鼠内耳发育和毛细胞极性,经典Wnt/β-catenin信号通路可能与非经典Wnt/PCP通路共同调控耳蜗伸展和内耳平面细胞极性。 展开更多
关键词 Β-CATENIN 耳蜗 前庭 毛细胞 发育 平面细胞极性
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猪颈总动脉(CCA)有形成分与血管顺应性的关系
6
作者 李学敏 潘天岳 +4 位作者 王璐 关国平 王克强 杨琳 张红旗 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期413-418,共6页
目的探讨正常成年家猪颈总动脉(common carotid artery,CCA)近段、远段主要组织学成分与特定压力段(低压段:50～90mmHg,常压段:80～120mmHg,高压段:110～150mmHg,1mmHg=0.133kPa,下同)周向顺应性之间的关系。方法取正常成年家猪双侧CCA... 目的探讨正常成年家猪颈总动脉(common carotid artery,CCA)近段、远段主要组织学成分与特定压力段(低压段:50～90mmHg,常压段:80～120mmHg,高压段:110～150mmHg,1mmHg=0.133kPa,下同)周向顺应性之间的关系。方法取正常成年家猪双侧CCA,用特殊染色方法检测其左侧近段和远段胶原纤维、弹性纤维占血管中膜面积的百分比;HE染色检测中膜单位面积平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)的数目;Bose生物动态测试仪检测右侧颈总动脉周向顺应性。结果近段管腔面积、内中膜厚度明显大于远段,近段弹性纤维占中膜面积的百分比多于远段;近段和远段中膜内单位面积SMCs数目的差异无统计学意义;近段和远段胶原纤维含量的差异无统计学意义,近段Ⅰ型胶原纤维多于远段,而Ⅲ型胶原纤维则远段多于近段;血管顺应性在常压段获得最大值。结论血管顺应性在正常压力范围内最大,胶原纤维分型及弹性纤维沿CCA分布的变化对改变及维持血管顺应性有重要作用。 展开更多
关键词 颈总动脉(CCA) 弹性纤维 胶原纤维 顺应性 家猪
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吸烟相关性喉癌遗传易感基因的初步研究 被引量：12
7
作者 朱奕 郭荦 王胜资 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期11-21,共11页
背景与目的:烟草成分经吸烟在进入人体后造成机体基因异常从而导致肿瘤的发生,然而并非所有暴露于吸烟这一高危因素下的人群都会罹患恶性肿瘤,肿瘤除了有家族聚集现象外,不同个体或种系对促进肿瘤发生的环境因素也存在差异。该研究旨在... 背景与目的:烟草成分经吸烟在进入人体后造成机体基因异常从而导致肿瘤的发生,然而并非所有暴露于吸烟这一高危因素下的人群都会罹患恶性肿瘤,肿瘤除了有家族聚集现象外,不同个体或种系对促进肿瘤发生的环境因素也存在差异。该研究旨在通过对目标基因及其单核苷酸多态性(single nucletide polymorphism,SNP)片段的检测分析,了解其基因型及等位基因与吸烟相关性喉癌发生的相关性,寻找与喉癌发生相关的遗传易感基因,为喉癌的早期预防及检测起到预警作用。方法:分别采集经复旦大学附属眼耳鼻喉科医院治疗的喉癌患者94例及高危吸烟人群148例的外周血血样(所有入组者的吸烟指数均大于400/年支),对所有的外周血样进行DNA抽提。根据文献报道的前期研究结果选取与吸烟相关性肿瘤发生密切相关的候选基因,分别为ERCC5、CYP1A1、OGG1、RAD51、ERCC1、MMP2和MMP3;并进一步在基因库选取其SNP片段,采用Sequenom SNP检测技术完成对基因片段的检测。结果:N分期及临床分期与吸烟程度明显相关(P<0.05)。MMP2基因的rs243865片段及MMP3基因的rs522616片段分别得到了统计学阳性的结果(P<0.05)。根据吸烟指数分层分析后认为,重度吸烟人群中ERCC1的rs2298881位点GT基因型携带者,其罹患喉癌风险显著升高(P=0.025)。结论:吸烟促进喉癌进展;MMP2的rs243865片段及MMP3的rs522616片段可能是吸烟相关性喉癌的遗传易感基因的SNP;ERCC1的rs2298881片段在重度吸烟人群中具有一定的临床意义。 展开更多
关键词 喉癌 吸烟相关性 遗传易感性 单核苷酸多态性 MMP2 MMP3 ERCC1
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Atoh1过表达水平对异位耳蜗毛细胞样细胞的prestin表达及纤毛形态的影响
8
作者 郑宇 马锐 +1 位作者 迟放鲁 赵萌 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期197-204,共8页
目的探讨Atoh1过表达水平对体外培养的耳蜗小上皮嵴区域毛细胞样细胞数量、prestin表达情况及其表面纤毛形态的影响。方法取出生后第1天的大鼠耳蜗中圈进行体外培养,之后采用不同浓度的带有Atoh1基因的腺病毒(含报告基因EGFP)进行转染,... 目的探讨Atoh1过表达水平对体外培养的耳蜗小上皮嵴区域毛细胞样细胞数量、prestin表达情况及其表面纤毛形态的影响。方法取出生后第1天的大鼠耳蜗中圈进行体外培养,之后采用不同浓度的带有Atoh1基因的腺病毒(含报告基因EGFP)进行转染,检测腺病毒转染后不同时间点体外培养组织的Atoh1 mRNA相对表达量,同时观察小上皮嵴区域绿色荧光蛋白信号强度、毛细胞样细胞数量、毛细胞样细胞的prestin表达情况及其表面纤毛形态。结果带有Atoh1基因的腺病毒转染浓度越高,Atoh1的mRNA表达水平越高,小上皮嵴区域绿色荧光蛋白信号越强,同时该区域生成的毛细胞样细胞数量越多,表达prestin的毛细胞样细胞数量也越多(P<0.05),并且这些细胞表面静纤毛由低到高排列,形态更为规则。结论Atoh1过表达水平与诱导生成的能够表达prestin的异位耳蜗毛细胞样细胞数量正相关,并且Atoh1过表达水平越高,这些细胞的表面纤毛形态越规则。 展开更多
关键词 Atoh1 小上皮嵴 PRESTIN 纤毛 毛细胞样细胞
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