目的建立一种稳定的血浆γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)的液相色谱-串联质谱(liquid chromotography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并评估基于该法的GABA检测结果用于辅助诊断睡眠障碍的价值。方法使用UPLC ...目的建立一种稳定的血浆γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)的液相色谱-串联质谱(liquid chromotography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并评估基于该法的GABA检测结果用于辅助诊断睡眠障碍的价值。方法使用UPLC XevoTQs液质联用仪检测GABA,并进行预验证和性能验证,建立健康人群的参考范围。比较表观健康人群和睡眠障碍患者血浆中GABA含量是否存在差异。结果以氘代化合物作为同位素内标,采用Amide色谱柱进行分离。流动相为0.050%甲酸水溶液和含0.175%甲酸和5 mmol/L乙酸铵的90%乙腈水溶液,梯度洗脱,柱温35℃。LC-MS/MS检测GABA的线性范围为0.05~10.00μmol/L,定量下限为0.02μmol/L,批内变异系数(coefficient of variation,CV)<3.00%,批间CV<4.00%,回收率为101.06%~109.02%。将300例健康人按年龄把GABA参考范围分为3组:18~34岁为0.08~0.15μmol/L,35~49岁为0.10~0.20μmol/L,≥50岁为0.12~0.23μmol/L。以血浆GABA为标志物辅助诊断睡眠障碍,检测221例患者和300例健康人,结果显示18~34岁、35~49岁和≥50岁组的AUC分别为0.510(P=0.850)、0.686(P=0.002)和0.890(P<0.001),GABA的最佳截断值(cut-off)分别为0.09、0.10和0.11μmol/L。结论所建立的LC-MS/MS方法检测GABA的结果可靠,能够灵敏、准确地检测血浆GABA水平,可用于辅助诊断睡眠障碍。展开更多
目的建立毛细管电泳电化学技术(capillary electrophoresis with electrochemical detection,CE-ECD)检测人全血中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酸(cysteine,Cys)和还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)的方法。考察缓冲...目的建立毛细管电泳电化学技术(capillary electrophoresis with electrochemical detection,CE-ECD)检测人全血中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酸(cysteine,Cys)和还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)的方法。考察缓冲液的浓度、酸碱度、分离电压、进样时间和检测电压等参数对分离和检测的影响,确定最佳的实验条件。方法以直径为500μm的铂圆盘电极作为检测电极,用长度为50cm的熔融石英毛细管对一系列待检物标准溶液和人全血样本进行毛细管电泳电化学检测。结果在最优条件下,当电极电位为+1.05V(相对饱和甘汞电极)、分离电压为18kV时,Hcy、Cys和GSH于100mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.8)中在10min内获得理想分离。检测下限(S/N=3)在0.29～0.80μmol/L范围内,且在3倍数量级浓度范围内,3种组分的浓度与峰电流呈良好线性关系。对0.5mmol/L的混合标准溶液连续检测7次,Hcy、Cys和GSH峰高的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为3.7%、3.1%和2.9%。结论 CE-ECD方法可对Hcy、Cys和GSH等3种生物活性巯基化合物进行高效分离及检测,具有分析速度快、成本低、灵敏度高、试剂及样品用量小等优点,因此在生物医药领域具有广泛的应用前景。本实验采用的铂圆盘电极具有污染少、重复性好的特点。展开更多
文摘目的建立一种稳定的血浆γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)的液相色谱-串联质谱(liquid chromotography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并评估基于该法的GABA检测结果用于辅助诊断睡眠障碍的价值。方法使用UPLC XevoTQs液质联用仪检测GABA,并进行预验证和性能验证,建立健康人群的参考范围。比较表观健康人群和睡眠障碍患者血浆中GABA含量是否存在差异。结果以氘代化合物作为同位素内标,采用Amide色谱柱进行分离。流动相为0.050%甲酸水溶液和含0.175%甲酸和5 mmol/L乙酸铵的90%乙腈水溶液,梯度洗脱,柱温35℃。LC-MS/MS检测GABA的线性范围为0.05~10.00μmol/L,定量下限为0.02μmol/L,批内变异系数(coefficient of variation,CV)<3.00%,批间CV<4.00%,回收率为101.06%~109.02%。将300例健康人按年龄把GABA参考范围分为3组:18~34岁为0.08~0.15μmol/L,35~49岁为0.10~0.20μmol/L,≥50岁为0.12~0.23μmol/L。以血浆GABA为标志物辅助诊断睡眠障碍,检测221例患者和300例健康人,结果显示18~34岁、35~49岁和≥50岁组的AUC分别为0.510(P=0.850)、0.686(P=0.002)和0.890(P<0.001),GABA的最佳截断值(cut-off)分别为0.09、0.10和0.11μmol/L。结论所建立的LC-MS/MS方法检测GABA的结果可靠,能够灵敏、准确地检测血浆GABA水平,可用于辅助诊断睡眠障碍。
文摘目的建立毛细管电泳电化学技术(capillary electrophoresis with electrochemical detection,CE-ECD)检测人全血中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酸(cysteine,Cys)和还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)的方法。考察缓冲液的浓度、酸碱度、分离电压、进样时间和检测电压等参数对分离和检测的影响,确定最佳的实验条件。方法以直径为500μm的铂圆盘电极作为检测电极,用长度为50cm的熔融石英毛细管对一系列待检物标准溶液和人全血样本进行毛细管电泳电化学检测。结果在最优条件下,当电极电位为+1.05V(相对饱和甘汞电极)、分离电压为18kV时,Hcy、Cys和GSH于100mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.8)中在10min内获得理想分离。检测下限(S/N=3)在0.29～0.80μmol/L范围内,且在3倍数量级浓度范围内,3种组分的浓度与峰电流呈良好线性关系。对0.5mmol/L的混合标准溶液连续检测7次,Hcy、Cys和GSH峰高的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为3.7%、3.1%和2.9%。结论 CE-ECD方法可对Hcy、Cys和GSH等3种生物活性巯基化合物进行高效分离及检测,具有分析速度快、成本低、灵敏度高、试剂及样品用量小等优点,因此在生物医药领域具有广泛的应用前景。本实验采用的铂圆盘电极具有污染少、重复性好的特点。
