期刊文献+
共找到22篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
完全乙酰基化4-氨基-4-脱氧-D-甲基葡萄糖苷(S)-TBMB甲酸衍生物的合成
1
作者 白晨 梁波 +1 位作者 王淑珍 郑小讯 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1724-1726,共3页
Starting from \%D\%\|galactose, per\|\%O\|\%acetylated (\%S\%)\|TBMB carboxylic acid derivant of methyl\|4\|amino\|4\|deoxy\|\%D\%\|glucopyranoside was prepared. The mechanism of the possible side reactions of the cat... Starting from \%D\%\|galactose, per\|\%O\|\%acetylated (\%S\%)\|TBMB carboxylic acid derivant of methyl\|4\|amino\|4\|deoxy\|\%D\%\|glucopyranoside was prepared. The mechanism of the possible side reactions of the catalytic reduction from different types of azide sugar to the corresponding amino sugar was discussed. 1\|\%O\%\|Me\|protection was selected for preventing the intramolecular dehydration of the 4\|amino sugar, which was a key intermediate product in this synthetic process. The product was characterized by HRMS and \{\{\}\+1H NMR\} spectroscopy and will be used as a molecular model to develop a new identification method of the \%D, L\|\%configurations of amino sugar. 展开更多
关键词 TBMB 甲酸衍生物 合成 半乳糖 叠氮基糖 催化还原 4-氨基-4-脱氧-D-甲基葡萄糖苷 抗生素
在线阅读 下载PDF
人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价 被引量:3
2
作者 祝欣刚 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期68-73,共6页
目的利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial elect... 目的利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500Ω.cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)<5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。 展开更多
关键词 CACO-2 单细胞层 短期培养 丁酸 药物转运 分化
在线阅读 下载PDF
弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的细胞免疫反应及抗体生成的动态过程 被引量:8
3
作者 李文姝 陆惠民 +2 位作者 张惠琴 夏超明 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期82-84,共3页
目的 观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程。方法 口服免疫BALB/c小鼠 ,一个月后 ,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验 (MTT法 )及T细胞亚群的测定 ;不同免疫时间段内 ,收集实验鼠血清 ,ELIS... 目的 观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程。方法 口服免疫BALB/c小鼠 ,一个月后 ,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验 (MTT法 )及T细胞亚群的测定 ;不同免疫时间段内 ,收集实验鼠血清 ,ELISA法检测抗体水平的变化。结果 P30乳酸球菌口服免疫组脾淋巴细胞ConA刺激后增殖能力比两对照组显著提高 ,CD+ 4 和CD+ 8的百分数均明显升高 ;第 12周 (即最后一次免疫结束一个月 ) ,P30乳酸球菌口服免疫组检测到特异性抗体IgG。结论 P30乳酸球菌口服疫苗有效地激发了小鼠细胞免疫反应 ,特异性抗体IgG在免疫结束一个月后生成明显。 展开更多
关键词 弓形虫 P30乳酸球菌口服疫苗 诱导 小鼠 细胞免疫反应 抗体生成 动态过程
在线阅读 下载PDF
弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达 被引量:12
4
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 闵太善 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期27-29,共3页
目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ... 目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并以SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果  1、在我们比较的 783个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间只有两个碱基不同 ;2、得到一分子量为 5 4kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 38%。结论  1、弓形虫昆山分离株与RH株的P30基因没有大的差异 ;2、在大肠杆菌中得到了P30融合蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 P30 PCR 基因表达 克隆
在线阅读 下载PDF
弓形虫昆山分离株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定 被引量:12
5
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 邬敏辰 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期25-27,共3页
目的 构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法 用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形... 目的 构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法 用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫昆山分离株的表达型文库。结果 获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度为 1kb。 展开更多
关键词 弓形虫 CDNA文库 克隆 速殖子期
在线阅读 下载PDF
青岛海葵强心活性多肽在毕氏酵母中的分泌表达 被引量:5
6
作者 王维荣 刘爱民 +1 位作者 钱志康 黄伟达 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期407-411,共5页
青岛海葵中存在两种具有增强心肌收缩功能的多肽类毒素 (分别命名为Ap QD1和Ap QD2 ) .通过分析已经得到Ap QD2的氨基酸序列 ,按照毕氏酵母的偏爱密码子设计并合成了Ap QD2的cDNA .将合成cDNA序列通过PCR扩增及一系列分子克隆操作导入... 青岛海葵中存在两种具有增强心肌收缩功能的多肽类毒素 (分别命名为Ap QD1和Ap QD2 ) .通过分析已经得到Ap QD2的氨基酸序列 ,按照毕氏酵母的偏爱密码子设计并合成了Ap QD2的cDNA .将合成cDNA序列通过PCR扩增及一系列分子克隆操作导入毕氏酵母表达载体 pPICZαA中 ,以电穿孔方法转化毕氏酵母GS115和KM71,并进行转化子的表型及高拷贝化筛选 .其中的KM 71(Muts)的转化子经摇瓶发酵 ,每升发酵液可表达约 2 0mg的重组Ap QD2产物 ,通过纯化可得到 7mg纯的有天然生物学活性的Ap QD2基因工程产物 . 展开更多
关键词 毕氏酵母 分泌表达 海葵毒素
在线阅读 下载PDF
弓形虫GRA6抗原基因的克隆与表达 被引量:5
7
作者 朱翔 丁天 +2 位作者 陆惠民 张惠琴 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期50-54,共5页
目的 在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表... 目的 在大肠杆菌中高效表达弓形虫抗原GRA6。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株和RH株总DNA中分别扩增到编码GRA6的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体PGEX - 5X - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1 -CodonPlus(DE3) -RP中进行表达 ,以SDS -PAGE和Westenblotting进行鉴定 ,用GST亲和层析柱纯化表达产物。 结果  1 在我们所比较的 336个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间碱基基本一致。 2 得到一分子量为 49kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 2 5 55 % ,通过Westenblotting证实 ,该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所识别。 结论  1 弓形虫昆山分离株和RH株的GRA6基因片段几乎完全一致 ;2 在大肠杆菌中得到了高效表达的融合蛋白 ;3 该重组抗原能被弓形虫感染的人特异性IgM和IgG血清所别 。 展开更多
关键词 弓形虫 GRA6抗原基因 克隆 表达 聚合酶链反应
在线阅读 下载PDF
弓形虫RH株ROP1抗原基因的克隆与表达 被引量:6
8
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 施宓 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期37-40,共4页
目的 在大肠杆菌中高效表达ROP1抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株cDNA文库中扩增得到编码ROP1的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并用SDS ... 目的 在大肠杆菌中高效表达ROP1抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株cDNA文库中扩增得到编码ROP1的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并用SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果  ( 1)在我们比较的 12 4 9个碱基中 ,我们得到的ROP1基因在Ossorio报道的基因的 4 4 7位与 4 4 8位之间有一 96bp的插入片段 ,另有 14个碱基不同 ,造成 3个氨基酸的改变 ,两基因之间有 91.19%的同源性 ,( 2 )得到一分子量约为 70kDa的融合蛋白。结论  1,我们获得了一与Ossorio报道的基因有较大差异的rop1基因 (GeneBank登录号 :AF3 5 0 2 61) ( 2 ) ,ROP1基因在大肠杆菌中得到了ROP1融合蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP1 PCR 基因表达 基因克隆
在线阅读 下载PDF
人胰腺癌细胞外基质蛋白基因表达的研究 被引量:3
9
作者 龚涌灵 许国铭 黄伟达 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1997年第8期568-571,共4页
胰腺癌组织具有较强的结缔组织反应特性,细胞外基质蛋白(Extracellularmatrixproteins,ECM)诸成分,在RNA和蛋白水平异常表达,具有一定的分子生物学意义。用Northernblotting方法,显示了胰腺组织及其癌变标本中ECM的基因表达(Gen... 胰腺癌组织具有较强的结缔组织反应特性,细胞外基质蛋白(Extracellularmatrixproteins,ECM)诸成分,在RNA和蛋白水平异常表达,具有一定的分子生物学意义。用Northernblotting方法,显示了胰腺组织及其癌变标本中ECM的基因表达(Geneexpression),以证实胰腺癌细胞本身能合成共产生这些细胞间质成分。结果显示:胰腺癌组织与胰腺癌细胞株(PaTu8988、PaTu8902)中均有ECM的基因表达,在RNA水平,Ⅳ型胶原和层粘素LN的表达较显著。正常组织中ECM的基因表达,在RNA水平,纤粘素FN和层粘素LN低水平表达,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原更低。提示ECM可能在肿瘤的浸润、转移过程中起一定的作用。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 细胞外基质蛋白 基因表达
在线阅读 下载PDF
异种VEGF融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用 被引量:2
10
作者 刘倩 唐亮 +5 位作者 李英辉 周彩存 谈立松 赵玉军 张培德 张尚权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期422-424,共3页
目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性... 目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性,构建GST-cVEGF融合蛋白疫苗。将C57BL16J小鼠随机分为3组,GST-cVEGF疫苗组10只、cVEGF疫苗组10只、生理盐水组(NS)10只。将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只分别0、2、3周免疫100μgGST-cVEGF融合蛋白疫苗、单纯cVEGF蛋白疫苗、生理盐水。接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态。接种肿瘤18d后,处死小鼠,剥离肿瘤称重。检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度。结果:GST-cVEGF疫苗组、cVEGF组、生理盐水组肿瘤均重分别为(1·55±0·534)g、(1·93±0·607)g、(2·87±0·642)g。GST-cVEGF疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P<0·01)。疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1∶2000。结论:异种血管内皮生长因子基因重组融合蛋白疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 融合蛋白疫苗 肿瘤/免疫治疗 小鼠
在线阅读 下载PDF
靶向胰腺癌细胞株增殖诱导配体基因小干扰RNA的制备及纯化 被引量:1
11
作者 毛振彪 邵建国 +3 位作者 王唯一 谭畅 黄伟达 黄介飞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期827-832,共6页
目的:制备及纯化针对增殖诱导配体基因(APRIL)的小干扰RNA(APRIL siRNA),为进一步研究APRIL基因在人胰腺癌中的作用奠定基础。方法:构建靶向胰腺癌CFPAC-1细胞株APRIL基因双链RNA(APRIL dsRNA)的表达质粒pET-22b-APRIL,在大肠杆菌中发... 目的:制备及纯化针对增殖诱导配体基因(APRIL)的小干扰RNA(APRIL siRNA),为进一步研究APRIL基因在人胰腺癌中的作用奠定基础。方法:构建靶向胰腺癌CFPAC-1细胞株APRIL基因双链RNA(APRIL dsRNA)的表达质粒pET-22b-APRIL,在大肠杆菌中发酵表达APRIL dsRNA,并利用CF-11树脂亲和层析纯化;用大肠杆菌Ⅲ型RNA水解酶(RNaseⅢ)水解dsRNA,制备APRIL siRNA,应用DEAE树脂离子交换层析使RNaseⅢ与核苷酸分离,分子筛层析进一步分离纯化APRIL siRNA。将纯化后的APRIL siRNA转染CHO细胞,荧光显微镜下观察转染后CHO细胞APRIL蛋白的表达情况。结果:pET-22b-APRIL转染大肠杆菌后,经IPTG诱导能大量表达APRIL dsRNA,表达产物经CF-11树脂纯化能得到纯化的APRIL dsRNA;dsRNA经RNaseⅢ水解后,过DEAE树脂离子交换层析柱,经5%PAGE、12%SDS-PAGE电泳证实RNaseⅢ与核苷酸分离,进一步经分子筛层析分离纯化,得到纯化APRIL siRNA。荧光显微镜下观察结果表明,APRIL siR- NA转染CHO细胞能明显抑制APRIL蛋白的表达。结论:成功制备了靶向CFPAC-1细胞株的APRIL siRNA,为下一步敲减CFPAC-1细胞APRIL基因的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 增殖诱导配体 RNA干扰 胰腺肿瘤 体外转录法
在线阅读 下载PDF
水稻类非特异脂质转移蛋白OSDIR的表达和纯化 被引量:1
12
作者 刘晓灿 汪笑峰 +1 位作者 葛晓春 曹凯鸣 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第1期75-78,共4页
通过PCR方法从水稻(O ry za sa tiva)染色体基因组中扩增一个编码非特异性脂质转移蛋白(nonspec ific lip id transfer prote in,nsLTP)类似蛋白的基因(OSd ir),将该基因片段克隆到硫氧还蛋白融合表达载体pET 32a(+)中后,在BL 21(DE 3)t... 通过PCR方法从水稻(O ry za sa tiva)染色体基因组中扩增一个编码非特异性脂质转移蛋白(nonspec ific lip id transfer prote in,nsLTP)类似蛋白的基因(OSd ir),将该基因片段克隆到硫氧还蛋白融合表达载体pET 32a(+)中后,在BL 21(DE 3)trxB-宿主菌中实现了融合蛋白的高表达,表达产物为包涵体。利用尿素溶解包涵体并复性后,再通过Sepharose N i2+-che lating fast flow柱亲和纯化融合蛋白,得到重组O SD IR蛋白。 展开更多
关键词 生物化学 非特异性脂质转移蛋白 构建 表达 纯化
在线阅读 下载PDF
阿尔兹海默病(AD)小鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)的表达与功能分析 被引量:3
13
作者 杜丽莎 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期441-446,共6页
目的研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease,AD)模型小鼠脑中的表达与功能情况。方法采用RT-PCR、real-time PCR和Western blot方法分析不同月龄的AD小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脑... 目的研究P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease,AD)模型小鼠脑中的表达与功能情况。方法采用RT-PCR、real-time PCR和Western blot方法分析不同月龄的AD小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脑中P-gp表达的差异;采用尾静脉注射罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123),HPLC检测脑及血清中Rh123的含量,计算脑血分配系数,分析不同月龄的AD小鼠和WT小鼠脑中P-gp功能的差异。结果 3月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显低于WT小鼠;6月龄时,AD小鼠与WT小鼠无明显差异;9月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显高于WT小鼠;12月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达高于WT小鼠,功能却低于WT小鼠。结论 AD小鼠脑内P-gp的表达与功能与WT小鼠明显不同,并随月龄而变化。 展开更多
关键词 阿尔兹海默症(AD) P-糖蛋白(P-gp) APP PS1双转基因小鼠 β淀粉样蛋白(Aβ)
在线阅读 下载PDF
灵芝孢子诱变与菌丝高长速菌株选育 被引量:17
14
作者 王淑珍 白晨 《中国食用菌》 2000年第6期6-9,共4页
长白山野生灵芝通过组织分离获得的灵芝CL988菌株 ,经60 CO -γ射线与紫外线交替累积诱变获得菌丝高长速灵芝菌株CjL990 (已经中国科学院微生物研究所鉴定 )通过 4次传代培养和应用研究证明该菌株性状稳定 ,菌丝生长速度与菌丝积累量同... 长白山野生灵芝通过组织分离获得的灵芝CL988菌株 ,经60 CO -γ射线与紫外线交替累积诱变获得菌丝高长速灵芝菌株CjL990 (已经中国科学院微生物研究所鉴定 )通过 4次传代培养和应用研究证明该菌株性状稳定 ,菌丝生长速度与菌丝积累量同供试株CL988比较均P<0 0 展开更多
关键词 灵芝 孢子 菌丝积累量 菌丝生长速度 菌株选育 深层发酵 诱变育种
在线阅读 下载PDF
基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸 被引量:5
15
作者 陈月 康宏艳 +2 位作者 胡楠 杨青 郁韵秋 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期704-709,共6页
目的 建立一种同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸浓度的高效液相色谱(HPLC)法,用于评价小鼠给予IDO抑制剂后体内IDO活性。方法 血清用6%高氯酸沉淀蛋白法处理,离心后取上清进样,采用标准加入法定量。选用ThermoHypersil GOLD色谱... 目的 建立一种同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸浓度的高效液相色谱(HPLC)法,用于评价小鼠给予IDO抑制剂后体内IDO活性。方法 血清用6%高氯酸沉淀蛋白法处理,离心后取上清进样,采用标准加入法定量。选用ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,流动相为乙腈-醋酸钠(15 mmol/L,冰醋酸调pH至 4.0),流速1.1 mL/min,柱温30 ℃,犬尿氨酸和色氨酸的紫外检测波长分别为360 nm和280 nm。结果 犬尿氨酸保留时间为6.10 min,线性范围为0.25~10 μmol/L,检测限为0.09 μmol/L;色氨酸保留时间10.12 min,线性范围为25~1 000 μmol/L,检测限为0.25 μmol/L。精密度、回收率及稳定性等均符合生物样品定量分析方法验证指导原则的要求,并成功应用于62只小鼠血清犬尿氨酸和色氨酸浓度的测定。结论 建立了一种简单、快速、准确的HPLC分析方法,采用标准加入定量方式,可同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸血药浓度,并成功应用于实际生物样本的测定。 展开更多
关键词 犬尿氨酸 色氨酸 HPLC 血清 标准加入法 小鼠
在线阅读 下载PDF
乳酸乳球菌表达弓形虫棒状体蛋白1(ROP1) 被引量:9
16
作者 朱翔 杨秋林 +2 位作者 陆惠民 施宓 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期54-56,共3页
目的 在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法 从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳... 目的 在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法 从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳酸乳球菌中的表达。结果 表达产物中有一约 4 3kDa的蛋白带能被弓形虫病人血清识别。 展开更多
关键词 棒状体蛋白1 弓形虫 ROP1 乳酸乳球菌 表达 疫苗 弓形虫病
在线阅读 下载PDF
促红细胞生成素(EPO)对叶酸在Caco-2细胞中跨膜转运的影响 被引量:2
17
作者 言君凯 靳桂英 +1 位作者 李豪男 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期27-33,共7页
目的采用人结肠腺癌细胞系(human colon adenocarcinoma cell line)Caco-2单细胞层模型观察促红细胞生成素(erythropoietin,EP0)对叶酸跨膜转运的影响。方法采用Caco-2单层细胞模型,观察不同剂量EPO(0.3、1、3U/mL)处理对叶... 目的采用人结肠腺癌细胞系(human colon adenocarcinoma cell line)Caco-2单细胞层模型观察促红细胞生成素(erythropoietin,EP0)对叶酸跨膜转运的影响。方法采用Caco-2单层细胞模型,观察不同剂量EPO(0.3、1、3U/mL)处理对叶酸在摄取与外排双向转运方面的影响。通过realtime-PCR与Westernblot观察EPO处理对质子偶联的叶酸转运体(protoncoupledfolatetransporter,PCFT)、还原叶酸载体(reducedfolatecarrier,RFC)以及多药耐药相关蛋白2(muhidrugresistance-associatedprotein2,MRP2)表达的影响。结果EPO在剂量0.3~3U/mL范围内可剂量依赖地增加叶酸在摄取方向的转运,增幅分别为31.6%、61.5%和120.5%。高剂量EPO(3U/mL)对叶酸在外排方向的转运也具有促进作用,增幅为56.9%,而中低剂量EPO(1、0.3U/mL)对叶酸外排无明显作用。叶酸转运体PCFT、RFC及MRP2均受EPO影响而表达上调,并呈剂量依赖和时间依赖关系。结论EP0可上调叶酸的摄取并呈剂量依赖关系,高剂量EPO对叶酸的摄取与外排具有双向促进作用。 展开更多
关键词 叶酸 促红细胞生成素(EPO) CACO-2细胞 叶酸转运体
在线阅读 下载PDF
体外RNA干扰下调ERM表达对胃癌SGC细胞转移能力的影响 被引量:1
18
作者 欧阳明 何晓婕 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期505-509,共5页
目的探讨radixin和moesin是否也和ezrin一样在肿瘤转移中起调控作用。方法选取ERM均表达的人胃癌SGC细胞作为模型,运用RNA干扰(RNAi)方法分别构建ezrin,radixin和moeisn表达特异性下调的稳定细胞株,并比较它们的体外转移能力。结果体外... 目的探讨radixin和moesin是否也和ezrin一样在肿瘤转移中起调控作用。方法选取ERM均表达的人胃癌SGC细胞作为模型,运用RNA干扰(RNAi)方法分别构建ezrin,radixin和moeisn表达特异性下调的稳定细胞株,并比较它们的体外转移能力。结果体外细胞侵袭实验表明ERM中任一蛋白的特异性下调均能减弱细胞的转移能力,Western blot分析显示ERM中的任一蛋白的特异性下调均引起E-cadherin表达的明显增加。结论 3种ERM蛋白在SGC细胞的转移过程中都起重要的作用,下调ERM蛋白中的任一成员都能明显降低SGC细胞的转移能力,ERM与E-cadherin间的相互作用可能在肿瘤的发展过程中至关重要。我们的发现同时也为ERM功能冗余论提供了佐证。 展开更多
关键词 ERM RNA干扰 肿瘤转移 功能冗余
在线阅读 下载PDF
鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较 被引量:5
19
作者 祁芳菲 楼滨 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期445-453,共9页
目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态... 目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态及脂质富集情况。采用qRT-PCR技术检测ox-LDL对细胞内炎性因子表达的影响;流式细胞术检测ox-LDL对细胞凋亡的影响;酶标仪分别检测ox-LDL对细胞内脂质过氧化标志物活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的影响;HPLC检测ox-LDL对鼠、人源巨噬细胞内催化色氨酸沿犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)分解代谢的限速酶吲哚胺2,3-双加氧化酶1(indoleamine 2,3 dioxygenase 1,IDO1)活性的影响。结果鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞经ox-LDL处理后,大量脂质在细胞内富集沉积,形成泡沫细胞。ox-LDL既可诱发巨噬细胞内炎性因子高表达,也会引起ROS和MDA水平显著升高,表明ox-LDL可以诱导鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞内炎症反应和脂质过氧化产生。ox-LDL更容易引发人源THP-1巨噬细胞的凋亡,而对鼠源RAW264.7巨噬细胞凋亡却无明显影响。ox-LDL在鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞中均可激活KP。结论鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞均可通过ox-LDL处理来建立稳定的鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型。 展开更多
关键词 泡沫细胞 RAW264.7 THP-1 炎症因子 活性氧(ROS) 丙二醛(MDA) 吲哚胺2 3-双加氧化酶1(IDO1)
在线阅读 下载PDF
构建LPS诱导的急性炎症小鼠模型用于IDO1抑制剂药效动力学评价 被引量:1
20
作者 施磊 郭磊磊 +1 位作者 杨丹 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期257-264,共8页
目的构建急性炎症小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)抑制剂的药效动力学评价。方法采用尾静脉注射或腹腔注射给予小鼠脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),构建IDO1活性上调的急性炎症小鼠模型。模型小... 目的构建急性炎症小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)抑制剂的药效动力学评价。方法采用尾静脉注射或腹腔注射给予小鼠脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),构建IDO1活性上调的急性炎症小鼠模型。模型小鼠灌胃给予IDO1抑制剂L-1-甲基色氨酸(L-1-methyl-tryptophan,L-1-MT)或TQ016,给药后不同时间点取血,HPLC检测小鼠血清中色氨酸(tryptophan,Trp)和犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)含量,计算Kyn/Trp比值。采用IDO1活性上调引起的Trp浓度降低、Kyn浓度升高及Kyn/Trp比值增大,来评价IDO1抑制剂L-1-MT和TQ016对急性炎症小鼠血清中上调的IDO1活性的抑制效果。结果尾静脉注射0.66 mg/kg LPS或腹腔注射5 mg/kg LPS均显著上调小鼠血清中IDO1活性。100 mg/kg L-1-MT在灌胃给药4 h后显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。100 mg/kg TQ016在灌胃给药1、6、12、24和30 h后均显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。TQ016呈剂量依赖性抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。结论LPS诱导的急性炎症小鼠模型适用于IDO1抑制剂的药效动力学评价。IDO1抑制剂TQ016具有良好的IDO1活性抑制效果。 展开更多
关键词 IDO1抑制剂 脂多糖(LPS) 急性炎症 小鼠模型 药效动力学
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部