表达hCGβ的乳酸杆菌经阴道粘膜免疫的研究 被引量：6

1

作者 王红梅 李大金 +3 位作者 袁敏敏 王明雁 朱影 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期701-703,共3页

目的 :用乳酸杆菌表达人绒毛膜促性腺激素 β亚单位 (hCGβ) ,并经阴道粘膜免疫小鼠 ,分析阴道局部hCGβ抗体水平。方法 :在获得稳定、分泌性表达hCGβ的菌株后 ,接种于 8周龄BALB C雌性小鼠的阴道粘膜。于免疫后 2周取阴道洗液 ,放免... 目的 :用乳酸杆菌表达人绒毛膜促性腺激素 β亚单位 (hCGβ) ,并经阴道粘膜免疫小鼠 ,分析阴道局部hCGβ抗体水平。方法 :在获得稳定、分泌性表达hCGβ的菌株后 ,接种于 8周龄BALB C雌性小鼠的阴道粘膜。于免疫后 2周取阴道洗液 ,放免法检测hCGβ水平 ,间接ELISA检测抗hCGβIgA抗体水平。结果 :Lb casei工程菌在无选择压力下培养 5 0代并冻存后 ,仍可分泌性表达hCGβ蛋白。阴道免疫 2周后 ,小鼠阴道洗液中可检测到hCGβ ,阴道洗液中的抗hCGβIgA抗体OD值为 0 2 97,明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,而与DNA免疫组无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :hCGβ在Lb caseiCECT5 2 76中得到了稳定的分泌性表达。重组hCGβ乳酸杆菌可在阴道粘膜局部定居 ,并通过粘膜免疫在局部刺激产生抗hCGβIgA抗体。 展开更多

关键词 人绒毛膜促性腺激素Β亚单位 乳酸杆菌 粘膜免疫

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复发性流产的免疫学研究进展 被引量：19

2

作者 李大金 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期81-83,共3页

妊娠是一种同种异体移植，胚胎作为同种异体移植物不被母体免疫排斥是免疫学原理的唯一例外；早期妊娠失败，如复发性流产（recurrentspontaneousaboaion，RSA）意味着母体免疫排斥胚胎抗原，其原因少数为内分泌、染色体异常及生殖道发... 妊娠是一种同种异体移植，胚胎作为同种异体移植物不被母体免疫排斥是免疫学原理的唯一例外；早期妊娠失败，如复发性流产（recurrentspontaneousaboaion，RSA）意味着母体免疫排斥胚胎抗原，其原因少数为内分泌、染色体异常及生殖道发育异常或占位性病变等，而原因不明者占80％以上。近年来妇产科临床对RSA发病与免疫功能异常的关系进行了广泛的研究，并取得明显进展。本文就RSA免疫病因学、免疫发病机制、免疫学诊断及治疗等研究进展，结合我们自己的研究结果，阐述如下。 展开更多

关键词 妇科内分泌 复发性流产 高雄激素血症 自然流产 黄体功能不足 流行病学研究 胰岛素抵抗 催乳素 发病机制 基础体温测定

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猪卵透明带-4蛋白在大肠杆菌中高表达的研究 被引量：1

3

作者 孙晓溪 徐万祥 +3 位作者 邱德义 熊艳 李大金 谢毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期660-663,共4页

目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆... 目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆区。结果：此重组表达质粒转化宿主工程菌后经热诱导培养，可在SDS-PAGE凝胶上得到特异性的高表达蛋白条带，而且它在 Wistem blot鉴定实验中能被鼠抗pZP4的单克隆抗体17D3和兔抗pZPIgGe识别。结论：成功地在大肠杆菌高效表达了可被17D3单克隆抗体及ZP多克隆抗体识别的ZP4。 展开更多

关键词 猪 CDNA 大肠杆菌 基因表达 卵透明带-4蛋白

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分子佐剂C3d的研究进展 被引量：2

4

作者 余敏 李大金 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期508-509,512,共3页

关键词 C3 血清补体蛋白 分子佐剂

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人早孕期绒毛组织和滋养细胞趋化因子受体转录水平 被引量：11

5

作者 吴霞 李大金 +2 位作者 袁敏敏 王明雁 程海东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期53-58,共6页

目的:研究早孕期绒毛组织及滋养细胞18种趋化因子受体的转录水平,以揭示趋化因子受体在母-胎界面生理性调节作用。方法:提取人早孕期绒毛组织及滋养细胞总RNA,半定量RT-PCR检测绒毛组织和滋养细胞18种趋化因子受体mRNA的表达水平。结果:... 目的:研究早孕期绒毛组织及滋养细胞18种趋化因子受体的转录水平,以揭示趋化因子受体在母-胎界面生理性调节作用。方法:提取人早孕期绒毛组织及滋养细胞总RNA,半定量RT-PCR检测绒毛组织和滋养细胞18种趋化因子受体mRNA的表达水平。结果:CXCR4及CXCR6在绒毛组织中普遍高表达;CCR6、CCR7、XCR1及CX3CR1呈普遍中等表达;CCR1-CCR5、CCR8-CCR10、CXCR1-CXCR3在部分绒毛组织中表达,部分绒毛组织不表达或表达量很低;早孕人绒毛组织不表达CXCR5。早孕期滋养细胞表达CCR1、CCR3-CCR5、CCR8-CCR9、CXCR1-CXCR4、CXCR6、XCR1、CX3CR1;不表达CCR2、CCR6、CCR7、CCR10及CXCR5。结论:早孕期绒毛组织及滋养细胞表达多种趋化因子受体,它们在正常妊娠中具有重要的生理学意义。 展开更多

关键词 趋化因子 趋化因子受体 绒毛 滋养细胞 RT-PCR

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hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达 被引量：11

6

作者 王明雁 李磊 +2 位作者 李大金 孟毅 朱影 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期445-450,共6页

目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的... 目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。 展开更多

关键词 真核细胞 hCGβ疫苗 COS-7细胞株 免疫避孕 分子佐剂C3d 免疫原性 聚合酶链反应 pBS-hCGβ-C3d3质粒

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环孢霉素A对小鼠妊娠失败模型妊娠预后的影响 被引量：11

7

作者 闫凤亭 李大金 +4 位作者 孙晓溪 朱晓勇 朱影 孟毅 余江 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期711-713,共3页

目的 :探讨环孢霉素A(CyclosporinA ,CsA)对小鼠妊娠失败模型及正常妊娠模型妊娠预后的影响。方法 :于孕 4d分别给小鼠妊娠失败模型及正常妊娠模型腹腔注射不同剂量 (0 ,5 ,10 ,15mg kg)CsA ,于孕 14d处死各组小鼠 ,观察各实验组胚胎吸... 目的 :探讨环孢霉素A(CyclosporinA ,CsA)对小鼠妊娠失败模型及正常妊娠模型妊娠预后的影响。方法 :于孕 4d分别给小鼠妊娠失败模型及正常妊娠模型腹腔注射不同剂量 (0 ,5 ,10 ,15mg kg)CsA ,于孕 14d处死各组小鼠 ,观察各实验组胚胎吸收率、胎鼠及胎盘重量变化。结果 :①CsA可使小鼠妊娠失败模型胚胎吸收率显著降低 ,接近于小鼠正常模型胚胎吸收率 ;同时胎鼠及胎盘重量无显著性差异 ,但有增加趋势。②CsA对小鼠正常妊娠模型胚胎吸收率无明显影响 ;胎鼠及胎盘重量亦无显著性差异。结论 :于孕早期 (胚胎着床期 )腹腔注射CsA可使小鼠妊娠失败模型胚胎吸收率恢复至正常水平 ,从而可能成为保胎的潜在药物。 展开更多

关键词 环孢霉素A 妊娠 预后 CSA 妊娠失败模型 动物模型

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CD86协同刺激信号在孕早期母-胎界面Th1/Th2型细胞因子表达调控中的作用 被引量：13

8

作者 朱晓勇 李大金 +1 位作者 孙晓溪 严缘昌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期483-488,共6页

目的 :探讨CD86协同刺激信号在孕早期母 胎界面Th1 Th2型细胞因子表达调控中的作用。方法 :建立正常妊娠模型CBA×Balb c和自然流产模型CBA×DBA 2。于孕第 4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠IgG作为对照组 ;仅于孕第 4天或... 目的 :探讨CD86协同刺激信号在孕早期母 胎界面Th1 Th2型细胞因子表达调控中的作用。方法 :建立正常妊娠模型CBA×Balb c和自然流产模型CBA×DBA 2。于孕第 4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠IgG作为对照组 ;仅于孕第 4天或于孕第 4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb。孕第 14天计算两种模型各实验组胚胎吸收率R。ELISA法测定孕第 9和第 14天各实验组母 胎界面组织体外培养上清中Th1 Th2型及相关细胞因子 (IL 2、IFN γ、TNF α、IL 4、IL 10、TGF β2 )表达水平。 结果 :孕早期干预CD86协同刺激信号 ,对正常妊娠模型母 胎界面孕第 9和第 14天IL 4、IL 10、TGF β2以及IFN γ、TNF α表达均无显著影响 ,其胚胎吸收率亦无显著变化。自然流产模型中 ,孕早期干预CD86协同刺激信号后 ,孕第 9、第 14天母 胎界面IL 4、IL 10、TGF β2表达均显著增加 (P <0 0 5 ) ;而IFN γ、TNF α表达显著下降 (P <0 0 5 )。胚胎吸收率亦显著下降 (P <0 0 5 )。结论 :孕早期母 胎界面CD86协同刺激信号的调节紊乱可能是触发母体对胚胎产生免疫排斥的重要病理因素 ,于孕早期干预CD86协同刺激信号能够恢复母 胎界面Th1型 Th2型免疫调节的生理平衡 ,从而诱导母 胎免疫耐受。 展开更多

关键词 CD86协同刺激信号 母-胎界面 Th1型/Th2型细胞因子

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CD4^+CD25^+调节性T细胞的生物学特性及功能 被引量：25

9

作者 陈巧英 李大金 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期89-92,共4页

关键词 CD8^+T细胞 调节性T细胞 生物学特性 CD4^+T细胞 抑制性细胞因子 自身免疫病 免疫抑制效应 自身抗原

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孕早期干预CD80/CD86协同刺激信号对自然流产模型免疫活性细胞协同刺激分子表达的影响 被引量：8

10

作者 周跃华 朱晓勇 +4 位作者 李大金 朱影 王明雁 袁敏敏 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期537-539,543,共4页

目的 :探讨孕早期干预协同刺激信号对自然流产模型孕鼠免疫活性细胞MHC Ⅱ类抗原和协同刺激分子的调控作用。方法 :建立自然流产模型组CBA×DBA 2和协同刺激信号干预组CBA×DBA 2 (CBA小鼠在孕 4天腹腔注射CD80及CD86mAb各 0 1... 目的 :探讨孕早期干预协同刺激信号对自然流产模型孕鼠免疫活性细胞MHC Ⅱ类抗原和协同刺激分子的调控作用。方法 :建立自然流产模型组CBA×DBA 2和协同刺激信号干预组CBA×DBA 2 (CBA小鼠在孕 4天腹腔注射CD80及CD86mAb各 0 1mg)。分别于孕第 14天计数两组的胚胎吸收率 ,于孕第 9天采用流式细胞技术分析孕鼠脾细胞MHC Ⅱ类抗原与协同刺激分子CD80 (B7 1)、CD86 (B7 2 )、CD2 8和CD15 2 (CTLA 4 )的表达。结果 :孕早期干预协同刺激信号后 ,孕第 14天的胚胎吸收率显著下降 (P <0 0 5 ) ;孕第 9天免疫活性细胞CD80、CD86和CD2 8的表达显著下降 (P <0 0 1) ;CTLA 4的表达则显著升高 (P <0 0 5 ) ;而MHC Ⅱ类抗原的表达无显著改变 (P >0 0 5 )。结论 :孕早期体内干预协同刺激信号使免疫活性细胞协同刺激分子CD80、CD86、CD2 8表达下调和CTLA 4表达上调 ,及母胎界面Th2型免疫偏离 ,从而诱导系统性母 展开更多

关键词 协同刺激分子 自然流产模型 胚胎吸收率

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NOEY2基因对人乳腺癌细胞体外生长的影响 被引量：6

11

作者 施宗高 许良中 +4 位作者 周晓燕 杨文涛 李勤 药锦娟 朱伟萍 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2001年第1期29-32,共4页

目的 :构建NOEY2基因真核表达载体 ,研究其对人乳腺癌细胞系MDA MB 2 31生长的影响。方法 :RT PCR获得目的基因编码区 ,经T A策略克隆后 ,再亚克隆至pcDNA3 ,获得真核表达载体。用lipofectAMINE辅助转染MDA MB 2 31细胞 ,经G418长期筛... 目的 :构建NOEY2基因真核表达载体 ,研究其对人乳腺癌细胞系MDA MB 2 31生长的影响。方法 :RT PCR获得目的基因编码区 ,经T A策略克隆后 ,再亚克隆至pcDNA3 ,获得真核表达载体。用lipofectAMINE辅助转染MDA MB 2 31细胞 ,经G418长期筛选而获得稳定转染细胞克隆。Western印迹检测NOEY2蛋白水平的表达。通过记录生长曲线和流式细胞分析术观察转染细胞的生长和细胞周期变化。结果 :NOEY2真核表达载体pcDNA3 NOEY2 CR构建成功。被稳定转染该载体的MDA MB 2 31细胞有明确NOEY2蛋白表达 ,而对照细胞无表达。NOEY2转染细胞的生长抑制率可达 46 .3 % ,在细胞周期改变上可见明显的S期分数和G2 M期分数下降 ,而G0 G1期比例上升。结论 :NOEY2基因转染对体外培养的人乳腺癌细胞生长具有一定的抑制作用 ,支持其作为一个抑癌基因的推测 。 展开更多

关键词 NOEY2基因 基因转染 乳腺癌 真核表达载体

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IV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达 被引量：2

12

作者 吴霞 李大金 +2 位作者 袁敏敏 王明雁 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期622-628,共7页

目的 :研究HIV 1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF 1在人胎盘组织的表达 ,探索HIV 1子宫内垂直传播的分子机制。方法 :半定量RT PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5mRNA水平 ;免疫组化和免疫细胞化学检测早... 目的 :研究HIV 1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF 1在人胎盘组织的表达 ,探索HIV 1子宫内垂直传播的分子机制。方法 :半定量RT PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5mRNA水平 ;免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达 ;原位杂交及免疫组化分析SDF 1在早孕胎盘的表达 ;ELISA测定滋养细胞SDF 1的动态分泌水平。结果 :各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5mRNA ;CXCR4蛋白定位于滋养细胞 ,而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF 1,且能分泌可溶性SDF 1。结论 :滋养细胞同时表达CXCR4及SDF 1,SDF 1可能通过降调CXCR4而拮抗X4 HIV 1感染胎儿细胞 ;R5 HIV 1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5 + 基质细胞和 或Hofbauer细胞 ,从而发生子宫内垂直传播。 展开更多

关键词 HIV-1 子宫内垂直传播 趋化因子 趋化因子受体 滋养细胞 胎盘 CXCR4 CCR5 艾滋病

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分子佐剂C3d增强hCGβ基因免疫体液免疫效应 被引量：5

13

作者 赵欣荣 李大金 +1 位作者 蔡立荣 孙晓溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期619-620,624,共3页

目的 :该实验室前期工作已成功构建真核表达质粒pcDNA3 hCGβ、pcDNA3 hCGβ C3d3且证明其能在真核表达系统中有效表达。通过动物DNA免疫 ,以期证实分子佐剂C3d增强免疫避孕疫苗免疫原性。方法 :抽提与纯化pcDNA3、pcD NA3 hCGβ、pcDNA... 目的 :该实验室前期工作已成功构建真核表达质粒pcDNA3 hCGβ、pcDNA3 hCGβ C3d3且证明其能在真核表达系统中有效表达。通过动物DNA免疫 ,以期证实分子佐剂C3d增强免疫避孕疫苗免疫原性。方法 :抽提与纯化pcDNA3、pcD NA3 hCGβ、pcDNA3 hCGβ C3d3质粒 ,进行动物DNA免疫。免疫剂量分别为 5、10、2 0pmol,共免疫 2次 ,每次间隔 3周。末次免疫后 6周采血 ,用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。 结果 :C3d分子佐剂能明显提高抗hCGβ抗体滴度 ;且其作用呈剂量依赖性。结论 :分子佐剂确实能增强hCGβ免疫原性 ;此结果将有助于免疫避孕疫苗的技术进步及实际应用。 展开更多

关键词 分子佐剂 C3D HCGΒ 基因免疫 体液免疫效应

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真核细胞表达质粒pCMV4增强hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力 被引量：4

14

作者 赵欣荣 李大金 +1 位作者 蔡立荣 孙晓溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期228-230,共3页

目的 :比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。 方法 :分别构建pcD NA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,并转染真核细胞瞬时表达系统COS 7细胞 ,以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、... 目的 :比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。 方法 :分别构建pcD NA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,并转染真核细胞瞬时表达系统COS 7细胞 ,以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d3质粒。对 6周龄BLAB C小鼠行DNA免疫。于末次免疫后 6周采血 ,用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。 结果 :对COS 7体外表达效率分析 ,由pCMV4介导的hCGβ C3d3表达效率明显高于pcDNA3。动物DNA免疫结果 ,pCMV4 hCGβ C3d3刺激动物机体产生的免疫应答强度及免疫效果显著高于pcDNA3 hCGβ C3d3。 结论 :pCMV4真核表达质粒hCGβ C3d3体外表达效率及动物DNA免疫效力均显著高于pcDNA3真核表达质粒。 展开更多

关键词 pCMV4-hCGβ-C3d3 pcDNA3-hCGβ-C3d3 表达效率 免疫效力 DNA免疫

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猪ZP4B细胞表位人源化定点突变 被引量：2

15

作者 袁敏敏 李大金 +3 位作者 周雷 王明雁 朱影 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期184-186,共3页

目的 :对编码猪ZP4的cDNA序列进行人源化定点突变 ,使原来编码LDPENLTL八肽表位的序列突变成编码相应人卵透明带上LDPEKLTL序列 ,同时保持其他序列不变。方法 :采用PCR重叠延伸法 ,连续进行 3次PCR ,对PZP4B细胞LD PENLTL八肽表位进行... 目的 :对编码猪ZP4的cDNA序列进行人源化定点突变 ,使原来编码LDPENLTL八肽表位的序列突变成编码相应人卵透明带上LDPEKLTL序列 ,同时保持其他序列不变。方法 :采用PCR重叠延伸法 ,连续进行 3次PCR ,对PZP4B细胞LD PENLTL八肽表位进行定点突变。第 3次PCR以前两次PCR的产物为模板 ,最终得到所需的突变体hpZP4和dpZP4。结果 :突变后的cDNA序列通过重组DNA技术 ,在突变体片段 5′及 3′末端分别引入SalI和NcoI内切酶位点 ,使其克隆入pBV2 2 1表达质粒中 ,制成hpZP4 pBV2 2 1,pZP4 pBV2 2 1和dpZP4 pBV2 2 1重组质粒。经测序 ,证明均为目的序列。结论 :通过定点突变产生人源化猪ZP4B细胞表位是可行的。研究将为人类克隆并制备新的人卵透明带避孕疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 卵透明带 B细胞表位 人源化定点突变 免疫避孕疫苗

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干预CD86协同刺激信号诱导母-胎界面Th2型免疫偏离及其对妊娠预后的影响 被引量：2

16

作者 朱晓勇 李大金 +1 位作者 严缘昌 孙晓溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期548-552,共5页

目的 :探讨干预CD86协同刺激信号在母 胎界面Th1 Th2型细胞因子表达调控及诱导母 胎免疫耐受中的作用。方法 :将正常妊娠模型CBA×BALB C和自然流产模型CBA×DBA 2的CBA孕鼠均分为 3组 :对照组于孕第 4、6、8、10天腹腔注射大... 目的 :探讨干预CD86协同刺激信号在母 胎界面Th1 Th2型细胞因子表达调控及诱导母 胎免疫耐受中的作用。方法 :将正常妊娠模型CBA×BALB C和自然流产模型CBA×DBA 2的CBA孕鼠均分为 3组 :对照组于孕第 4、6、8、10天腹腔注射大鼠IgG ;A组于孕第 4、6、8、10天腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb ;B组仅于孕第 4天 (着床期 )腹腔注射大鼠抗小鼠CD86mAb。孕第 9天 ,竞争性半定量RT PCR测定各组母 胎界面Th1 Th2型细胞因子转录水平 ;孕第 9、14天ELISA测定母 胎界面组织培养上清IL 4 IFN γ比值 ;孕第 14天比较两种模型各组的胚胎吸收率R。结果 :正常妊娠模型中 ,干预CD86协同刺激信号对母胎界面原有Th2型免疫偏离及妊娠预后均无显著影响。自然流产模型中 ,干预CD86协同刺激信号能够诱导母胎界面局部形成Th2型免疫偏离并显著改善其妊娠预后。结论 :于孕早期干预CD86协同刺激信号能够恢复母 胎界面局部Th1型 Th2型细胞因子表达的生理平衡 ,形成维持正常妊娠所需的Th2型免疫偏离 ,诱导母 胎免疫耐受。 展开更多

关键词 CD86 协同刺激信号 诱导 母-胎界面 Th2型免疫偏离 妊娠 预后 影响

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分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗的体液免疫效应 被引量：2

17

作者 王秀丽 李大金 +3 位作者 袁敏敏 王明雁 朱影 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期652-655,658,共5页

目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV16HishCGβC3d3和phCMV16HishCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并... 目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV16HishCGβC3d3和phCMV16HishCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβC3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALBc与C57BL6小鼠进行免疫,共免疫两次,间隔4周,ELISA测定血清中的抗体滴度,比较各组的免疫效果。结果:无论是BALBc小鼠还是C57BL6小鼠,hCGβC3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALBc小鼠,初次和再次免疫结果显示,C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALBc小鼠,但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性,在个性差异很大的不同品系小鼠,C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。 展开更多

关键词 分子佐剂 C3D3 HCGΒ 避孕疫苗 体液免疫

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B细胞表位人源化的猪ZP4在大肠杆菌中的表达与鉴定 被引量：1

18

作者 袁敏敏 李大金 +3 位作者 周雷 王明雁 朱影 孟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期826-827,共2页

关键词 B细胞 细胞表位 人源化 猪 ZP4 大肠杆菌 基因表达 鉴定方法 疫苗

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补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响 被引量：2

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作者 郝群 李大金 +3 位作者 朱影 袁敏敏 王明雁 孟毅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期874-878,共5页

目的 :探讨补肾宁心方对人单核 -血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法 :以培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作为靶细胞 ,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白 (ox -LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清 ,以孟加拉玫瑰红... 目的 :探讨补肾宁心方对人单核 -血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法 :以培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)作为靶细胞 ,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白 (ox -LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清 ,以孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定人单核细胞系U937与HUVECs的粘附 ,并用流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子细胞间粘附分子 - 1(ICAM - 1)、血管细胞粘附分子 - 1(VCAM - 1)以及E -选择素的表达。结果 :ox -LDL显著增强单核U937细胞与内皮细胞之间的相互粘附 ,如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清 ,则粘附率明显降低 (P <0 0 1)。流式细胞仪分析结果显示ox -LDL能明显促进内皮细胞表面ICAM - 1、VCAM -1以及E -选择素的表达 ,补肾宁心方中药灌服血清可显著下调内皮细胞表面ICAM - 1、VCAM - 1以及E -选择素的表达 (P <0 0 1)。结论 :补肾宁心方含药血清可能通过下调内皮细胞表面粘附分子的表达抑制单核 -血管内皮细胞粘附 ,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。 展开更多

关键词 单核细胞 血管内皮细胞 细胞粘附分子 补肾宁心方

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脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响 被引量：4

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作者 郝群 梁元姣 +2 位作者 张承 李大金 汪灏 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第6期571-576,共6页

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。... 目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。 展开更多

关键词 脱氢表雄酮 内皮细胞 趋化因子 细胞黏附分子

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