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特异性siRNA抑制hTERT基因表达的位置及时间效应 被引量:3
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作者 曾永秋 税青林 +3 位作者 赵矫 张志宏 余红 赵小平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期857-862,共6页
为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆... 为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中hTERT mRNA的表达。与对照组相比,4段siRNA中有3段在转染后12h即对hTERT mRNA的表达产生抑制,48h抑制率最高,72h后下降,其中位于hTERT mRNA二级结构中的结构相对简单区域的siRNA抑制率最高,达到75%,说明特异性siRNA对hTERT基因有明显的抑制效果,且该抑制效应具有位置及时间依赖性。 展开更多
关键词 SIRNA HTERT基因 位置效应 时间效应
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双基因干扰对MCF-7细胞基因表达抑制及细胞凋亡影响的研究
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作者 刘岚 陈绍坤 +2 位作者 税青林 曾永秋 余红 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期749-754,共6页
背景与目的:肿瘤细胞具有端粒酶高表达及端粒稳定性强两大特点。人端粒酶逆转录酶(hTERT@是端粒酶的催化亚单位,端粒重复序列结合因子2(TRF2@对维持端粒长度及端粒稳定性非常重要。本实验研究针对hTERT和TRF2的特异性RNAi腺病毒表达载... 背景与目的:肿瘤细胞具有端粒酶高表达及端粒稳定性强两大特点。人端粒酶逆转录酶(hTERT@是端粒酶的催化亚单位,端粒重复序列结合因子2(TRF2@对维持端粒长度及端粒稳定性非常重要。本实验研究针对hTERT和TRF2的特异性RNAi腺病毒表达载体单独和联合转染乳腺癌MCF-7细胞后,对两基因的抑制效率以及对细胞凋亡的影响,探索针对端粒的多基因干扰对乳腺癌基因治疗的可行性。方法:构建RNA干扰腺病毒载体rAd-hTERT和rAd-TRF2,单独和联合转染MCF-7细胞后实时荧光定量PCR检测hTERT和TRF2基因表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:①转染后48h,与PBS组相比,rAd-hTERT对hTERT基因mRNA的抑制率约86%,对TRF2基因表达无明显抑制(P>0.05@;rAd-TRF2对TRF2基因mRNA的抑制率约80%,对hTERT基因表达无明显抑制(P>0.05@;rAd-hTERT/rAd-TRF2联合干扰组对hTERT基因表达抑制率约88%,TRF2基因表达抑制率约85%,联合干扰与单基因干扰相比,对hTERT和TRF2基因的表达抑制差异无显著性(P>0.05@。②干扰组转染后1~6d均能促进细胞凋亡。单基因干扰组转染后3~5d凋亡最明显,第5天达凋亡高峰;凋亡率rAd-hTERT组为46.2%,rAd-TRF2组为43.5%。联合组转染后第1天凋亡率为46.2%,第2天为68.5%,第3~6天均维持在较高水平,第6天达77.6%。转染后1~6d,联合干扰细胞凋亡率与单基因干扰细胞凋亡率相比,差异均有显著性(P<0.05@。结论:①rAd-hTERT和rAd-TRF2转染MCF-7细胞48h后可分别显著抑制hTERT和TRF2基因mRNA表达,但rAd-hTERT和rAd-TRF2在抑制hTERT和TRF2基因mRNA表达上无相互协同或相互抑制作用。②rAd-hTERT和rAd-TRF2均能有效促进MCF-7细胞凋亡,且两者联合干扰效果具有累加效应。因此利用联合干扰技术靶向抑制端粒酶活性和端粒稳定性相关的多基因的表达能更高效地促进乳腺癌细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖与生长。 展开更多
关键词 HTERT TRF2 RNA干扰 基因治疗 肿瘤
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