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体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立 被引量:6
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作者 张娜娟 张彤彤 +5 位作者 刘志祥 裴斐 魏华英 马刚 杨超 杨春蕾 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第3期440-443,共4页
目的建立体外心肌细胞缺血再灌注(I/R)模型,为研究各种心血管疾病及药物治疗提供基础。方法体外培养新生SD乳鼠心肌细胞,实验分正常组和缺血再灌注组。倒置显微镜及透射电子显微镜下观察心肌细胞缺血再灌注前后的形态变化,MTT、流式细... 目的建立体外心肌细胞缺血再灌注(I/R)模型,为研究各种心血管疾病及药物治疗提供基础。方法体外培养新生SD乳鼠心肌细胞,实验分正常组和缺血再灌注组。倒置显微镜及透射电子显微镜下观察心肌细胞缺血再灌注前后的形态变化,MTT、流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫组化和Western Blot检测Bcl-2/Bax基因表达。结果I/R前后心肌细胞形态发生明显变化。与正常组相比,I/R组心肌细胞凋亡率明显增加,细胞活性降低。免疫组化和Western Blot检测结果均出现I/R后Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax显著减小的现象。结论体外培养的心肌细胞I/R损伤各项指标检测与动物体内实验结果相吻合,体外心肌细胞缺血再灌注模型建立成功。 展开更多
关键词 心肌细胞 缺血再灌注 BCL-2/BAX 凋亡
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MTHF对C57BL/6鼠Lewis肺癌细胞生长的影响 被引量:1
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作者 李小雪 邵鑫 +3 位作者 霍永旭 苏小娟 王思洋 杨春蕾 《四川动物》 北大核心 2015年第5期729-733,共5页
通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后... 通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后测量瘤体质量,并进行电镜以及组织学分析,通过免疫组化检测肿瘤组织PCNA、Bcl-2及Bax的表达。结果表明MTHF组、顺铂组抑瘤率分别为46.2%、54.5%。电镜显示MTHF组出现细胞凋亡。MTHF处理Lewis肺癌细胞后,PCNA和Bcl-2基因下调,Bax基因上调。MTHF可显著抑制C57BL/6鼠移植瘤肺癌细胞的生长,其机制可能与诱导Lewis肺癌细胞凋亡并抑制其增殖有关,是一种有前景的抗肿瘤药物。 展开更多
关键词 MTHF C57BL/6鼠 细胞增殖 肺癌
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人IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的表达
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作者 张大为 高闻达 +3 位作者 张青 唐静 陈洋 刘全胜 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第6期7-13,共7页
【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增... 【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32蛋白基因,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVEC载体上,构建重组质粒IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,并进行酶切和测序鉴定。采用脂质体法,将重组质粒线性化后转染CHO/DG44细胞,进行RT-PCR检测,筛选阳性克隆,并对筛选的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压筛选。利用ProteinG-Agarose亲和层析纯化转染CHO/DG44细胞培养上清液中的融合蛋白IL-32-IgG4(Fc),通过SDS-PAGE、Western-blot对融合蛋白IL-32-IgG4(Fc)的表达和生物学活性进行检测。【结果】PCR扩增获得了长度为564 bp的人IL-32蛋白基因cDNA,经测序与GenBank报道的序列一致。真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得了IL-32蛋白基因片段,其长度为564 bp。筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,其分子质量约为50.0 ku,与预期结果一致。MTX加压后,IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的表达量明显升高。【结论】成功构建了人IL-32蛋白融合基因的真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。 展开更多
关键词 IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白 真核表达 CHO/DG44细胞
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乙肝病毒X蛋白诱导细胞凋亡的研究
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作者 刘昌勇 李正 +2 位作者 李小玉 刘豫蓉 胡火珍 《国际口腔医学杂志》 CAS 2008年第5期491-493,605,共4页
目的探讨乙肝病毒X蛋白在诱导细胞凋亡中的作用。方法用基因重组的方法构建乙肝病毒X(HBX)真核表达载体,脂质体转染体外培养的正常小鼠胎肝细胞(FL)、人肝癌细胞(SMMC-7721)和人宫颈癌细胞(Hela);用免疫组化染色法检查HBX基因的表达;用... 目的探讨乙肝病毒X蛋白在诱导细胞凋亡中的作用。方法用基因重组的方法构建乙肝病毒X(HBX)真核表达载体,脂质体转染体外培养的正常小鼠胎肝细胞(FL)、人肝癌细胞(SMMC-7721)和人宫颈癌细胞(Hela);用免疫组化染色法检查HBX基因的表达;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法及流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建X基因真核表达载体,经免疫组化检测,重组载体pcDNA3-X均可在以上3种不同类型细胞中表达,并能诱导Hela细胞凋亡。结论HBX能诱导细胞凋亡,获得稳定表达HBX蛋白的Hela细胞株,经传代20代仍然稳定表达HBX蛋白。 展开更多
关键词 乙肝病毒X蛋白 聚合酶链反应 真核表达载体 细胞凋亡
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脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白质组学分析 被引量:6
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作者 杨明理 刘新宇 +3 位作者 杨金亮 王黎明 张勇刚 胡火珍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期212-220,共9页
对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞... 对脊髓全横断损伤前后的大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出18种蛋白质.脊髓损伤3d后表达上调的蛋白质有巨噬细胞游走抑制因子、S期激酶相关蛋白1、热休克蛋白27、多配体蛋白聚糖3、T细胞受体β链可变区、膜联蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶1、半乳凝素3、丙酮酸脱氢酶、磷脂酶B、嗜铬粒蛋白A、热休克蛋白70凝结蛋白1;同时表达下调的蛋白质有磷酸丙糖异构酶、神经鞘氨醇磷酸化受体、热休克蛋白10、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶A.多数差异蛋白质涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程,为进一步阐明中枢神经系统的损伤和修复机制提供了理论依据. 展开更多
关键词 脊髓损伤 差异表达蛋白质 双向电泳 蛋白质组学 质谱
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雌性SD大鼠缺铁性贫血模型的建立 被引量:5
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作者 魏华英 马刚 +1 位作者 张莉 杨春蕾 《四川动物》 CSCD 北大核心 2007年第1期190-191,共2页
采用雌性Sprague-Dwley(SD)大鼠构建缺铁性贫血模型。将24只雌性SD大鼠随机均分为两个大组,实验组饲以低铁饲料和去离子水,对照组饲以基础饲料和自来水。第30天处死所有SD大鼠,取血测定血红蛋白含量、红细胞压积;每只取2g肝组织匀浆离心... 采用雌性Sprague-Dwley(SD)大鼠构建缺铁性贫血模型。将24只雌性SD大鼠随机均分为两个大组,实验组饲以低铁饲料和去离子水,对照组饲以基础饲料和自来水。第30天处死所有SD大鼠,取血测定血红蛋白含量、红细胞压积;每只取2g肝组织匀浆离心,测定肝脏中铁的含量。结果表明,本研究成功构建SD大鼠缺铁性贫血模型,为营养学、内分泌学和毒理学研究提供新的动物模型。 展开更多
关键词 缺铁性贫血 SD大鼠 动物模型
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昆明小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立
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作者 杨明理 罗素元 +1 位作者 胡火珍 郭萍 《四川动物》 CSCD 北大核心 2010年第6期994-996,F0002,共4页
用豚鼠脊髓匀浆液和不完全弗氏佐剂制备免疫原,联合腹腔注射百日咳毒素,建立昆明小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型。发病小鼠临床神经系统症状逐渐加重,脑组织经HE染色后,可见血管周围有大量炎性细胞浸润,呈袖套状改变;大脑白质可... 用豚鼠脊髓匀浆液和不完全弗氏佐剂制备免疫原,联合腹腔注射百日咳毒素,建立昆明小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型。发病小鼠临床神经系统症状逐渐加重,脑组织经HE染色后,可见血管周围有大量炎性细胞浸润,呈袖套状改变;大脑白质可见胶质细胞增生形成胶质细胞结节以及神经细胞坏死等病理改变。正常小鼠中枢神经系统功能及病理检查均未见异常。此模型为进一步阐明多发性硬化的发病机制打下基础。 展开更多
关键词 实验性自身免疫性脑脊髓炎 昆明小鼠 多发性硬化 动物模型
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移动抑制因子和嗜铬粒蛋白A在脊髓损伤中的表达变化 被引量:1
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作者 马天太 谢玲林 +1 位作者 杨明理 胡火珍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期483-488,共6页
为研究移动抑制因子和嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CgA)在脊髓损伤过程中的表达变化及其参与急性脊髓损伤修复的作用机制,建立了完全脊髓横断实验模型.采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离串联质谱对脊髓损伤的动物组织样品进行分析... 为研究移动抑制因子和嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CgA)在脊髓损伤过程中的表达变化及其参与急性脊髓损伤修复的作用机制,建立了完全脊髓横断实验模型.采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离串联质谱对脊髓损伤的动物组织样品进行分析,鉴定出20种差异表达蛋白质,其中有巨噬细胞游动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和CgA等.通过RT-PCR和Western印迹分析,移动抑制因子和CgA在损伤的脊髓组织中表达量发生变化,提示这两种蛋白可能均参与了脊髓损伤过程,但在脊髓损伤中的具体作用机制还有待于进一步的研究. 展开更多
关键词 移动抑制因子 嗜铬粒蛋白A 脊髓损伤 双向凝胶电泳
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