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5-氮-2’-脱氧胞苷诱导E-cadherin基因去甲基化及转录和表达
1
作者 郑本波 何文智 +1 位作者 王锦红 何永林 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第9期744-747,共4页
背景与目的用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对细胞株MDA-MB-435抑癌基因E-cadherin(上皮钙粘附素,简称E-cad)表达的影响。观察DNA甲基化的可逆性,为肿瘤治疗提供新的靶点。方法在用5-Aza-CdR处理MDA-MB-435细胞株前、后分... 背景与目的用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对细胞株MDA-MB-435抑癌基因E-cadherin(上皮钙粘附素,简称E-cad)表达的影响。观察DNA甲基化的可逆性,为肿瘤治疗提供新的靶点。方法在用5-Aza-CdR处理MDA-MB-435细胞株前、后分别应用甲基化特异性PCR(MSP)检测E-cad基因5’-CpG岛甲基化改变;用免疫组化(LsAB法)检测E-cad蛋白表达;用半定量RT-PCR观察E-cadmRNA的变化。结果①MDA-MB-435细胞在用药前E-cad基因甲基化PCR扩增阳性(116bp),而非甲基化PCR扩增阴性。用0.5μmol/L的5-Aza-CdR处理后发现该细胞E-cad基因甲基化PCR扩增阴性,而非甲基化PCR扩增出阳性条带(97bp)。②免疫细胞化学法检测E-cad蛋白用药前细胞未见E-cad蛋白表达。用5-Aza-CdR处理后在细胞膜可见E-cad染色阳性。③RT-PCR发现用5-Aza-CdR处理前细胞不能扩增出630bp的E-cadmRNA特异性条带;用0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L的5-Aza处理细胞后都可检测到E-cadmRNA转录,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关。结论去甲基化药物5-Aza-CdR能有效地逆转MDA-MB-435细胞株的E-cad基因异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。 展开更多
关键词 甲基化 甲基化特异性PCR 基因 上皮钙粘附素
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