肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性 被引量：6

1

作者 王淑静 刘岩 +3 位作者 林雪松 付雪 徐建永 刘兴汉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期322-328,共7页

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋... 为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物. 展开更多

关键词 肿瘤抑素 蛋白质表达 蛋白质纯化 肿瘤治疗

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钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用 被引量：15

2

作者 朱晓洁 梁飞 +2 位作者 王秀宏 赵炜明 高旭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期352-356,共5页

目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞... 目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞上清液中LDH、CK的水平变化;用RT-PCR法分析HO-1mRNA表达水平;Westernblot分析HO-1、Nrf2的蛋白表达水平。结果与缺氧/复氧组比,COPP预处理组中LDH和CK水平均明显降低,而HO-1mRNA水平,蛋白水平及细胞核的Nrf2蛋白水平均明显增加;Znpp的加入阻断了COPP预处理对心肌细胞的保护作用;ATAR的加入抑制了Nrf2在细胞核的聚集,进而抑制了COPP对HO-1的诱导。结论COPP预处理诱导H9c2心肌细胞HO-1过表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用;其机制与Nrf2-ARE信号通路相关。 展开更多

关键词 血红素加氧酶-1 钴原卟啉 缺氧/复氧 Nrf2-ARE

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TAT-凋亡素融合蛋白的表达及其抗肿瘤活性 被引量：11

3

作者 陶站华 刘兴汉 +4 位作者 张宇雯 马洪星 刘远莉 栗亚 李丹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期535-541,共7页

凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有毒性.为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-... 凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有毒性.为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-apoptin的原核表达载体pET-28a-TAT-apoptin.在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用IDA-Ni2+亲和柱纯化,葡聚糖凝胶G25除去尿素后得到可溶的变性蛋白.纯化后的TAT-apoptin加入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺癌Anip973细胞,对照组加入TAT-麦芽糖结合蛋白(TAT-MBP).经免疫组化检测,转导1h后TAT-MBP分布于以上两种细胞的胞浆和胞核,TAT-apoptin则主要分布于2种细胞的胞浆内,转导24h后TAT-MBP的亚细胞定位没有变化,TAT-apoptin分别定位于HUVECs的胞浆和Anip973的胞核中.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)显示转导48h后,TAT-MBP处理过的HUVECs和Anip973细胞、TAT-apoptin处理过的HUVECs没有明显改变,而TAT-apoptin处理过的Anip973细胞大量凋亡.以上结果表明TAT-apoptin融合蛋白在肿瘤治疗上有潜在的应用价值. 展开更多

关键词 凋亡 凋亡素 蛋白质转导 肿瘤治疗

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重组人谷氧还蛋白1对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用 被引量：7

4

作者 吴莉芳 刘莹莹 +4 位作者 房绍红 周宏博 邹朝霞 杨歌德 任亚坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期641-644,共4页

目的探讨重组人谷氧还蛋白1(rhGrx1)对小鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法线栓法制备小鼠脑缺血/再灌注模型,病理形态学方法证实模型建立成功。小鼠尾静脉注射rhGrx1(5mg·kg-1和10mg·kg-1)后,观察脑组织中乳... 目的探讨重组人谷氧还蛋白1(rhGrx1)对小鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法线栓法制备小鼠脑缺血/再灌注模型,病理形态学方法证实模型建立成功。小鼠尾静脉注射rhGrx1(5mg·kg-1和10mg·kg-1)后,观察脑组织中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及蛋白质羰基含量的变化,Western blot检测小鼠脑组织中p38MAPK表达水平的变化。结果HE染色证实模型建立成功且提示rhGrx1可改善缺血/再灌注损伤所致的小鼠脑组织病理形态学变化;rhGrx1能增加小鼠脑组织LDH、SOD活性、降低蛋白质羰基的含量。与假手术组小鼠相比,缺血和再灌注时脑组织p38MAPK蛋白表达量明显增加,注射rhGrx1后p38MAPK蛋白表达被抑制。结论rh-Grx1对局灶性脑缺血/再灌注损伤小鼠有一定保护作用,其机制可能与抑制p38MAPK蛋白表达相关。 展开更多

关键词 谷氧还蛋白 脑缺血/再灌注损伤 LDH SOD 蛋白质羰基含量 P38MAPK

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CRISPR/Cas9基因组编辑技术在癌症研究中的应用 被引量：10

5

作者 王大勇 马宁 +1 位作者 惠洋 高旭 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-8,共8页

CRISPR/cas9基因组编辑技术因其设计简单以及操作容易,使其在基因编辑的研究中越来越受到欢迎。利用该技术,科研人员可以实现在碱基的水平对基因组进行定点修饰。CRISPR系统现已经被广泛地应用到多个物种的基因组编辑以及癌症的相关研... CRISPR/cas9基因组编辑技术因其设计简单以及操作容易,使其在基因编辑的研究中越来越受到欢迎。利用该技术,科研人员可以实现在碱基的水平对基因组进行定点修饰。CRISPR系统现已经被广泛地应用到多个物种的基因组编辑以及癌症的相关研究中。本文在最新研究进展的基础上,结合对癌症研究及基因组编辑技术的理解,对CRISPR/Cas9技术在癌症研究中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 CRISPR CRISPR/Cas9 基因编辑 癌症

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ADAM17通过EGFR-PI3K/Akt/p27通路调控前列腺癌细胞增殖 被引量：6

6

作者 吴琦 冯田 +5 位作者 孙希财 林平 边淑玲 赵雪飞 李聪 于晓光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期749-755,共7页

ADAM17是金属蛋白酶家族(ADAMs)成员之一,研究发现ADAM17可以通过水解细胞表面蛋白的胞外结构域导致肿瘤细胞的增殖和转移.本课题前期研究结果显示,与LNCap细胞相比,ADAM17在DU145细胞中高表达,且与细胞增殖相关.为了研究ADAM17与前列... ADAM17是金属蛋白酶家族(ADAMs)成员之一,研究发现ADAM17可以通过水解细胞表面蛋白的胞外结构域导致肿瘤细胞的增殖和转移.本课题前期研究结果显示,与LNCap细胞相比,ADAM17在DU145细胞中高表达,且与细胞增殖相关.为了研究ADAM17与前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达的关系及调控机制,我们采用RNAi技术下调ADAM17的表达,加入PMA(一种ADAM17的激活剂)上调ADAM17的表达,通过细胞计数和CCK-8方法检测细胞增殖,RT-PCR检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17的表达;进一步阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导,RT-PCR方法检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17、EGFR、pEGFR、Akt和pAkt的表达.结果显示ADAM17的表达与前列腺癌细胞的增殖呈正相关(P<0.05);p27mRNA的表达与ADAM17的表达呈负相关(P<0.05);分别阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导通路,同时使ADAM17表达增加,与对照组(单独PMA处理组)相比,p27mRNA的表达均增加(P<0.05).提示ADAM17调控前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达是通过EGFR-PI3K/Akt信号通路实现的. 展开更多

关键词 前列腺癌 ADAM17 pEGFR PAKT P27

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人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定 被引量：3

7

作者 申峰 刘明 +3 位作者 吕昌莲 王秀宏 周宏博 周虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期475-481,共7页

通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ... 通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ和HindⅢ位点之间构建pET3a cytc重组质粒 ,并成功转化入E .coliBL2 1(DE3)中 .经IPTG诱导表达后 ,15 %SDS PAGE分析 ,可观察到1条与细胞色素c蛋白分子量相符的电泳条带 .Western印迹结果显示 ,该条带与小鼠抗人cytc单克隆抗体IgG2b发生特异反应 ,证实为人细胞色素c的前体蛋白 .体外使血红素与该前体蛋白结合生成完整的人细胞色素c蛋白 ,其耗氧量在不同浓度具有与反应时间的线性关系 。 展开更多

关键词 人细胞色素c基因 大肠杆菌 克隆 表达 活性

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过表达Grx1抑制HEK293T细胞中H2O2诱导的p38MAPK信号通路 被引量：3

8

作者 邹朝霞 李强 +4 位作者 刘莹莹 吴莉芳 张春晶 房绍红 周宏博 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期537-542,共6页

谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,... 谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,经RT-PCR和Western印迹验证,细胞转染后实现了Grx1的过表达;以不同浓度H2O2为损伤因素,建立细胞氧化应激模型,检测过表达Grx1后细胞存活率,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的变化,观察过表达Grx1后细胞的抗氧化能力;用终浓度100μmol/L H2O2作用于细胞,利用Western印迹检测120 min内HEK293T细胞中p38MAPK磷酸化水平.实验结果表明,HEK293T细胞过表达Grx1后,缓解了细胞的氧化应激损伤;转染空载体组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后5min开始升高,15min达到最高值,并可维持至120min左右;而过表达Grx1组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后各时间段没有明显改变,提示Grx1通过抑制H2O2诱导的p38MAPK信号通路激活发挥其抗氧化作用. 展开更多

关键词 谷氧还蛋白 HEK293T细胞 氧化应激 P38MAPK 瞬时转染

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血红素对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用 被引量：2

9

作者 周宏博 王秀宏 +5 位作者 王爱民 刘明 申峰 吕昌莲 吕丹 周虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期528-532,共5页

采用过氧化氢作用于人脐静脉内皮细胞 ,成功地制作了氧化应激损伤的细胞模型 ,将培养的细胞分为 3组 :正常对照组 ,损伤组 (给予过氧化氢 )和血红素组 (同损伤组的制备 ,预先加入血红素 ) .观察各组细胞在光、电镜下形态学和蛋白质电泳... 采用过氧化氢作用于人脐静脉内皮细胞 ,成功地制作了氧化应激损伤的细胞模型 ,将培养的细胞分为 3组 :正常对照组 ,损伤组 (给予过氧化氢 )和血红素组 (同损伤组的制备 ,预先加入血红素 ) .观察各组细胞在光、电镜下形态学和蛋白质电泳的改变 ,用MTT法检测了各组细胞的生长状态 .结果表明 :在血红素组 ,细胞生长状态、MTT水平和蛋白质电泳结果与损伤组相比有明显好转且差异显著 ,证明血红素对人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤有明显的保护作用 . 展开更多

关键词 血红素 人脐静脉内皮细胞 氧化应激损伤 保护作用 抗乳化保护

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TFAR19蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响 被引量：1

10

作者 于靖 赵雪飞 +5 位作者 王继洲 姜颖 杜颜丹 林平 王淑娟 于晓光 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期919-923,共5页

目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A... 目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A）值。在转染TFARl9的细胞中加入20mol·L^-1 MIF培养24、48h，MTT比色法检测细胞增殖，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFARl9真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明，与对照组相比，5、10μmol·L^-1 MIF组的A值差异无统计学意义（P〉0．05），20、50和100μmol·L^-1MIF组的A值差异有统计学意义（P〈0．01），MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-TFARl9并加入20mol·L^-1 MIF后，与对照组及单独应用MIF组相比，细胞生长明显受到抑制（P〈0．01），细胞凋亡率明显增加（P〈0．01），透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征（细胞体积缩小，核皱缩、碎裂，染色质呈块状边集等）。结论TFARl9蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡，有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。 展开更多

关键词 前列腺癌 TFARl9 米非司酮 细胞凋亡 PC-3M细胞

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环形RNAs:microRNAs的新靶标

11

作者 马宁 李福源 +2 位作者 董娜珍 周凌云 高旭 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第8期728-730,共3页

微RNAs（microRNAs，miRNAs）作为一类重要的基因表达调控分子已得到了生命科学领域的广泛关注．它们主要通过与mRNA的3’非翻译区（UTR）结合，发挥诱导mRNA降解或抑制翻译的功能．随着研究不断深入，

关键词 RNAS MRNA降解 靶标 环形 基因表达调控 非翻译区 生命科学

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高糖环境下Trx1过表达对HBZY-1细胞中MMP9表达的影响

12

作者 房绍红 刘心平 +4 位作者 靳玉宏 贾慧婕 那丽颖 郑海霞 周宏博 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期465-472,共8页

硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells)HBZY-1中... 硫氧还蛋白1(thioredoxin1,Trx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要的作用.为了探讨高糖环境下Trx1过表达对肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells)HBZY-1中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)表达水平的影响,本实验采用脂质体介导的瞬时转染实现Trx1蛋白过表达;采用RT-PCR和明胶酶谱法检测HBZY-1中MMP9 mRNA及酶活性的变化;通过流式细胞仪检测细胞内活性氧的含量.实验结果显示,高糖状态下,细胞中MMP9的mRNA和酶活性分别在12 h、24 h、48 h时表达增加(P<0.05);HBZY-1细胞中转染正义Trx1组,MMP9 mRNA水平及MMP9酶活性,高糖组与正常糖组无明显差异(P>0.05),转染反义Trx1组和未转染组中,高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义(P<0.01);细胞中活性氧含量,高糖作用12 h、24 h、48 h均较正常糖组明显增多(P<0.01),高糖环境下转染正义Trx1质粒较转染反义Trx1质粒,细胞中活性氧含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).实验提示,高糖环境下,Trx1过表达对MMP9的抑制作用是通过减少细胞内活性氧含量来实现的.本实验为Trx1的抗氧化作用提供新的证据,也为继续探讨Trx1在糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路. 展开更多

关键词 糖尿病肾病 硫氧还蛋白1 基质金属蛋白酶9 活性氧

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钙离子通道β2亚基基因rs4373814位点多态性与东北汉族人群原发性高血压易感性的关联研究

13

作者 张海英 宋娟娟 +4 位作者 李天晓 王懿 吕信鹏 周宏博 邓颖 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2015年第7期661-664,共4页

目的：探索钙离子通道β2亚基（CACNB2）基因rs4373814位点的多态性与东北汉族人群（黑龙江省及周边地区）原发性高血压易感性的关联性。方法：采用病例—对照研究方法,在哈尔滨医科大学附属第二医院就诊的患者中收集原发性高血压患者1 ... 目的：探索钙离子通道β2亚基（CACNB2）基因rs4373814位点的多态性与东北汉族人群（黑龙江省及周边地区）原发性高血压易感性的关联性。方法：采用病例—对照研究方法,在哈尔滨医科大学附属第二医院就诊的患者中收集原发性高血压患者1 006例作为病例组,体检人群中随机选取同期血压正常者992例作为对照组,总计研究人群1 998例。应用Snapshot技术检测CACNB2基因rs4373814位点单核苷酸多态性,利用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析处理。结果：CACNB2基因rs4373814位点危险等位基因C的频率分布在病例组和对照组间具有显著性差异[P=0.039,比值比（OR）=1.068,95%可信区间（CI）：1.004～1.137]。经Logistic回归校正性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒后,发现显性模型CC＋GC/GG：增加高血压患病风险（P=0.037,OR=1.260,95%CI：1.013～1.567）。结论 ：CACNB2基因rs4373814位点单核苷酸多态性与东北汉族人群原发性高血压的易感性存在显著关联。 展开更多

关键词 原发性高血压 CACNB2基因 单核苷酸多态性 关联研究

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