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Camp在小鼠肺癌进展中的作用及TGF-β/Smad通路介导EMT的分子机制研究
1
作者 吴军录 李亚然 +1 位作者 王林云 李锋 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第5期861-870,共10页
目的:研究cathelicidin相关抗菌肽(Camp)基因在小鼠肺肿瘤中的作用,揭示其在调控上皮-间充质转化(EMT)及TGF-β/Smad信号通路中的分子机制。方法:采用Camp基因敲除的Kras^(G12D)自发肺癌小鼠模型,通过组织学检测和生存分析来评估Camp对... 目的:研究cathelicidin相关抗菌肽(Camp)基因在小鼠肺肿瘤中的作用,揭示其在调控上皮-间充质转化(EMT)及TGF-β/Smad信号通路中的分子机制。方法:采用Camp基因敲除的Kras^(G12D)自发肺癌小鼠模型,通过组织学检测和生存分析来评估Camp对小鼠肺肿瘤结节数量、体积和生存率的影响。在细胞水平,构建A549^(-Camp)和H1975-Camp细胞株,运用软琼脂集落形成实验、细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验来评估Camp对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并进行血管形成实验以评估血管生成情况。在分子水平上,利用qRT-PCR检测血管生成相关因子VEGF、bFGF及TGF-β的表达;Western blot检测EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin及Snail)和TGF-β/Smad信号通路相关蛋白(TGF-β、p-TGF-β、Smad3和Smad7)的表达。结果:Camp基因敲除显著抑制小鼠肺肿瘤的生长,减少肿瘤结节的数量和体积,并提高小鼠的生存率。体外实验显示,Camp过表达促进了肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。分子机制研究表明,Camp通过调节TGF-β/Smad信号通路,影响了EMT相关蛋白的表达。结论:Camp基因能促进肺肿瘤进展,其通过调节TGF-β/Smad信号通路和EMT过程,增强肺腺癌细胞的恶性行为。 展开更多
关键词 cathelicidin相关抗菌肽 上皮-间充质转化 肺癌 血管生成
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IL-1β促进肺癌细胞增殖的作用机制研究 被引量：10
2
作者 石玉荣 吴军录 +1 位作者 权文强 李冬 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期20-24,共5页
目的:研究IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖的作用机制。方法:采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人肺癌细胞株A549、NCI-H520细胞和巨噬细胞。Brd U-ELISA法检测巨噬细胞对肺癌细胞的增殖能力。采用Real-time PCR法检测巨噬细胞和... 目的:研究IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖的作用机制。方法:采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人肺癌细胞株A549、NCI-H520细胞和巨噬细胞。Brd U-ELISA法检测巨噬细胞对肺癌细胞的增殖能力。采用Real-time PCR法检测巨噬细胞和A549、NCI-H520细胞中IL-1βmRNA的表达。应用IL-1β的中和抗体抑制IL-1β的活性,观察IL-1β在巨噬细胞促进肺癌细胞增殖中的作用。利用Western blot法检测肺癌细胞中自噬标志物Beclin 1的表达。结果:Brd UELISA检测结果:A549细胞与巨噬细胞以1∶0.5的比例共培养,A549细胞的OD值从(0.41±0.06)增加到(1.13±0.10),差异有统计学意义(P<0.05),且A549细胞的OD值随共培养巨噬细胞比例的增加而升高(P<0.05)。NCI-H520细胞与不同浓度的巨噬细胞共培养后,NCI-H520细胞的OD值变化趋势与A549细胞相似。Real-time PCR法检测结果:在共培养后,巨噬细胞中IL-1βmRNA的表达显著上调,且有时间依赖性,并显著高于肺癌细胞中的表达。加入IL-1β中和抗体后,Brd U ELISA法检测的细胞增殖,结果显示IL-1β中和抗体可明显抑制巨噬细胞对肺癌细胞A549和NCI-H520的增殖促进作用。Western blot法检测结果显示IL-1β可显著抑制肿瘤细胞Beclin 1的表达。结论:巨噬细胞和肺癌细胞通过增强IL-1β的表达促进肿瘤细胞的增殖。抑制肿瘤细胞的自噬可能是IL-1β促进肺癌发展的作用机制。 展开更多
关键词 巨噬细胞 肺癌 IL-1Β 细胞增殖 自噬
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香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制研究 被引量：5
3
作者 李冬 万海英 +4 位作者 姚懿雯 吴军录 权文强 周宏 张宇 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期881-888,共8页
背景与目的:香烟烟雾诱导的炎性反应可显著促进肺肿瘤的生长,本研究通过体内外实验明确香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制。方法:利用尾静脉注射鼠Lewis肺癌细胞方法建立小鼠肺癌模型,然后采用香烟烟雾对其进行刺激,诱... 背景与目的:香烟烟雾诱导的炎性反应可显著促进肺肿瘤的生长,本研究通过体内外实验明确香烟烟雾激活肺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径的机制。方法:利用尾静脉注射鼠Lewis肺癌细胞方法建立小鼠肺癌模型,然后采用香烟烟雾对其进行刺激,诱发炎性反应。免疫组化方法检测小鼠和人肺肿瘤组织中CD68、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和无磷酸化β-catenin的表达。采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和人肺癌细胞株A549细胞。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达及磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白的表达。结果:免疫组化结果显示,香烟烟雾刺激肺肿瘤负荷小鼠后,其肿瘤组织中巨噬细胞CD68+、TNF-α和无磷酸化β-catenin的表达均明显高于对照组。肺癌患者肿瘤组织中,CD68和TNF-α的阳性表达均明显高于正常组织。肺腺癌和鳞癌的无磷酸化β-catenin的染色阳性率分别为68.9%和62.2%,其阳性率与患者吸烟与否及肿瘤分期有关,差异有统计学意义(P均<0.05),并且CD68+的细胞数在无磷酸化β-catenin染色阳性的标本中显著升高(P<0.01)。Western blot检测结果显示,不同浓度香烟抽提物(cigarette smoke extract,CSE)刺激共培养细胞后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达随着CSE浓度的增加而显著上升。在加入TNF-α中和抗体后,A549细胞中无磷酸化β-catenin的表达被抑制。用TNF-α处理A549细胞后,磷酸化的GSK-3β和Akt蛋白在2 h后表达增加,4 h后无磷酸化β-catenin蛋白表达也开始上调。结论:香烟烟雾诱导肺肿瘤组织中巨噬细胞释放炎性反应因子TNF-α,进而通过Akt/GSK-3β途径激活肿瘤细胞中Wnt/β-catenin信号通路。 展开更多
关键词 巨噬细胞 肺癌 肿瘤坏死因子Α WNT/Β-CATENIN信号通路
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银杏内酯A、B混合物抑制永久性大脑中动脉栓塞大鼠神经细胞JNK凋亡途径 被引量：5
4
作者 马伟 王旋 +3 位作者 吴军录 权文强 姚懿雯 李冬 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期633-639,共7页
目的研究银杏内酯A、B混合物(GKAB)对永久性大脑中动脉栓塞(p MCAO)大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、p MCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组(仅分离动脉而不阻断)外,其余4... 目的研究银杏内酯A、B混合物(GKAB)对永久性大脑中动脉栓塞(p MCAO)大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、p MCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组(仅分离动脉而不阻断)外,其余4组均采用阻断右侧大脑中动脉的方法制备大鼠p MCAO模型。GKAB处理低、中、高剂量组于术后10 min分别经舌下静脉注射GKAB 12.5、25、50 mg/kg,假手术组、p MCAO模型组给予中剂量组药物等容量的生理盐水。用药12 h后,采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡率,免疫组织化学法检测神经细胞磷酸化JNK(p-JNK)表达,蛋白质印迹法检测脑组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、caspase-9、caspase-3以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果与假手术组相比,p MCAO模型组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK表达水平均增加(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均升高(P<0.01),Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达均降低(P<0.01);给予GKAB处理后,与p MCAO模型组比较,GKAB处理低、中、高剂量组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK水平均降低(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达也呈下降趋势(P<0.01),而Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达呈升高趋势(P<0.01),并表现出一定的剂量依赖性。与假手术组相比,p MCAO模型组神经细胞胞质Cyt C表达升高,线粒体Cyt C表达降低(P<0.01);与p MCAO模型组比较,GKAB低、中、高剂量组神经细胞胞质Cyt C表达逐渐降低,线粒体Cyt C表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。结论 GKAB可抑制p MCAO大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与其抑制JNK磷酸化、抑制JNK信号通路的激活、阻断线粒体凋亡途径有关。 展开更多
关键词 银杏内酯类 C-JUN氨基末端激酶 细胞色素C 脑缺血
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羟基红花黄素A调控退变软骨终板细胞周期的作用研究 被引量：3
5
作者 张宇 郑为超 +1 位作者 李冬 牛凯 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1425-1429,共5页
目的研究羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellow A,HSYA)对退变软骨终板细胞周期的影响及相关机制。方法用10μg·L^(-1)的IL-1β诱导软骨终板细胞建立炎症退变模型,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用CCK-8法检测不... 目的研究羟基红花黄素A(hydroxy safflower yellow A,HSYA)对退变软骨终板细胞周期的影响及相关机制。方法用10μg·L^(-1)的IL-1β诱导软骨终板细胞建立炎症退变模型,分别制备不同浓度的HSYA培养基作为干预措施,采用CCK-8法检测不同浓度HSYA对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测HSYA对细胞周期的影响;real-time PCR检测细胞周期及凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-xl表达;Western blot检测细胞周期相关蛋白PCNA、p53、p21表达。结果 HSYA具有促进退变软骨终板细胞增殖的作用;HSYA降低退变组细胞周期S期比例;HSYA下调退变细胞p53、Bax mRNA表达,上调Bcl-xl mRNA表达;HSYA下调退变细胞周期蛋白p53、p21表达,上调PCNA表达。结论 HSYA具有改变退变软骨终板细胞周期及抑制其凋亡的作用。 展开更多
关键词 羟基红花黄素A 软骨终板 细胞周期 凋亡 椎间盘 退变
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维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响
6
作者 吴军录 权文强 +2 位作者 姚懿雯 万海英 李冬 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期566-571,共6页
背景与目的:维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并... 背景与目的:维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞增殖的作用。方法:采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段,利用LR重组系统构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后,感染A549细胞;采用有限稀释法筛选稳定株;使用细胞免疫荧光和蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果;CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果:成功构建p Lenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,包装后测得其活性滴度为1.0×108 TU/m L;慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×109 VP/m L;RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达,并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后,A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107 vs 2.099±0.162,P<0.05)。结论:本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株;RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。 展开更多
关键词 维甲酸诱导基因G 慢病毒 表达调控 细胞增殖
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人肺癌细胞系中SENP3介导p53的de-SUMO2/3修饰对其活性的调控作用 被引量：2
7
作者 董瑞 王英 +3 位作者 王毓美 孙祖俊 易静 杨洁 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期732-739,共8页
目的·探索SENP3介导的去SUMO化修饰(de-SUMO修饰)对p53的定位和活性的影响。方法·选取肺癌细胞系A549(p53野生型)和H1299(p53缺失型)分别作为内源表达p53和强制表达p53的细胞模型;野生型及SUMO修饰位点突变型p53转染细胞,比较... 目的·探索SENP3介导的去SUMO化修饰(de-SUMO修饰)对p53的定位和活性的影响。方法·选取肺癌细胞系A549(p53野生型)和H1299(p53缺失型)分别作为内源表达p53和强制表达p53的细胞模型;野生型及SUMO修饰位点突变型p53转染细胞,比较SUMO化修饰的效应。免疫共沉淀技术检测静息或氧化应激时p53的SUMO2/3修饰及SENP3的去除作用;免疫荧光技术检测上述修饰及SENP3的调控对p53定位的影响;双荧光素酶报告基因和定量实时PCR方法检测p53促进p21转录的活性;生长曲线检测细胞增殖,探讨上述修饰和调控的生物学效应。结果·SENP3可介导p53的de-SUMO2/3修饰,且氧化应激时更为明显。p53的de-SUMO2/3修饰不影响p53定位,但抑制其促转录活性,并且取消其增殖抑制功能。结论·人肺癌细胞系中SENP3介导p53的de-SUMO2/3修饰可能是p53失活的机制之一。 展开更多
关键词 P53 SENP3 SUMO化修饰 促转录活性
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ROC曲线评价血清相关指标在血液病患者血流感染中的诊断价值 被引量：9
8
作者 张伟 陈众 +3 位作者 王微微 陆文英 商安全 胡丽庆 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1746-1749,共4页
目的:评价血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)在血液病患者血流感染(BSI)中的诊断价值。方法:选取分析2016年7月-2018年6月医院诊断为血流感染的血液病患者60例,设为血流感染组;选择同期血培养阴性患者65例,设为... 目的:评价血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)在血液病患者血流感染(BSI)中的诊断价值。方法:选取分析2016年7月-2018年6月医院诊断为血流感染的血液病患者60例,设为血流感染组;选择同期血培养阴性患者65例,设为非血流感染组。绘制ROC曲线对各指标诊断价值进行评价。结果:血流感染组PCT、CRP、SAA水平高于非血流感染组(P<0.05)。ROC曲线显示,PCT、CRP、SAA及联合试验检测的AUC值分别为0.868、0.746、0.678和0.900。联合试验检测与PCT检测的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05),联合试验检测及PCT检测的AUC分别大于CRP与SAA检测的AUC,差异有统计学意义(P<0.05)。CRP与SAA检测的AUC差异无统计学意义(P>0.05)。PCT检测最佳临界值为0.49 ng/ml,敏感度与特异度分别为75.0%和83.1%。CRP检测最佳临界值为15.76 mg/L,敏感度与特异度分别为60.0%和80.0%。SAA检测最佳临界值为35.66 mg/L,敏感度与特异度分别为81.7%和53.8%。结论:对于血液病患者PCT、CRP、SAA检测对血流感染有着较好的诊断价值,PCT诊断价值优于CRP与SAA,联合试验检测与PCT单项检测的诊断价值无显著差异。 展开更多
关键词 血流感染 降钙素原 C反应蛋白 血清淀粉样蛋白A 诊断价值
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维吾尔族与汉族女性妊娠早期甲状腺激素水平比较 被引量：2
9
作者 邝辉 周瑾 +8 位作者 李焕灵 米日班 米日古 戴咏玲 李北宁 胡达拜尔迪 易婷曲 杨凡 周健 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2016年第11期134-138,共5页
目的 通过比较维吾尔族和汉族女性妊娠早期甲状腺激素水平的差异,为初步建立本地区妊娠早期女性甲状腺激素正常参考值范围提供参考依据。方法 选取2015年10月至2016年1月于喀什地区第二人民医院产检的280例妊娠早期健康女性和同期于喀... 目的 通过比较维吾尔族和汉族女性妊娠早期甲状腺激素水平的差异,为初步建立本地区妊娠早期女性甲状腺激素正常参考值范围提供参考依据。方法 选取2015年10月至2016年1月于喀什地区第二人民医院产检的280例妊娠早期健康女性和同期于喀什地区妇幼保健院体检的216例非妊娠健康女性为研究对象,测定所有研究对象的血清促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone,TSH）、游离甲状腺素（free thyroxine,FT_4）、游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine,FT_3）、总甲状腺素（total thyroxine,TT_4）、总三碘甲腺原氨酸（total triiodothyronine,TT_3）、甲状腺过氧化物酶抗体（thyroid peroxidase antibodies,TPOAb）及甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulin antibody,TGAb）水平,比较妊娠早期与非妊娠期的维吾尔族、汉族女性甲状腺激素水平的差异。结果 非妊娠期维吾尔族女性FT_3水平高于非妊娠期汉族女性（P〈0.01）,FT_4水平低于非妊娠期汉族女性（P〈0.05）;但FT_3和FT_4水平之和两组间比较无显著差异（P〉0.05）。妊娠早期维吾尔族女性FT_3、FT_4、TT_4水平均低于妊娠早期汉族女性（P〈0.05）,TGAb水平高于妊娠早期汉族女性（P〈0.05）。维吾尔族与汉族妊娠早期女性的TT3、TT4、FT_4水平均高于同民族非妊娠期女性（P〈0.01）,TSH水平均低于同民族非妊娠期女性（P〈0.01）。以中位数及双侧限值（P2.5~P97.5）比较甲状腺激素测定值范围在妊娠早期及非妊娠期女性中的差异,初步确定妊娠早期维吾尔族和汉族女性TSH的正常参考值分别为〈5.5μIU/ml和4.8μIU/ml。结论 妊娠早期与非妊娠期的维吾尔族与汉族女性血甲状腺激素水平存在差异,因此应分别建立新疆喀什地区妊娠早期维吾尔族和汉族女性甲状腺激素水平正常值参考范围,以避免对妊娠早期女性甲状腺疾病的临床诊疗造成漏诊和误诊。 展开更多
关键词 妊娠早期 维吾尔族 甲状腺激素 电化学发光法
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