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慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
被引量：
1
1
作者
侯军
陈洁
+4 位作者
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期30-35,共6页
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含...
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含YCD基因的慢病毒载体质粒,体内外观察YCD/5-FC自杀基因系统的杀伤效应。方法:应用亚克隆技术将YCD和绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein,GFP)连接至慢病毒空载体pFUW,构建获得pGC-FU-YCD-GFP。将3质粒系统(含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)脂质体法共转染包装细胞293T,获得的慢病毒转染人Jurkat细胞,流式细胞仪(FACS)和Western blot检测Jurkat/YCD-GFP表达水平;加入前体药物5-FC,观察对靶细胞的杀伤情况和旁观者效应。转基因细胞接种至裸鼠前肢皮下,观察体内肿瘤杀伤情况。结果:慢病毒载体3质粒系统感染293T细胞后,获得的慢病毒滴度为1.2×108 TU/mL。该病毒可高效转染人Jurkat细胞,感染率达96.93%,Western blot显示转基因细胞可分泌YCD蛋白。100μmol/L 5-FC作用96 h可杀伤(89.37±6.57)%的Jurkat/YCD-GFP细胞。混合培养提示存在明显的旁观者效应。转基因细胞可在小鼠体内致瘤,5-FC可明显抑制肿瘤生长。结论:成功构建慢病毒载体pGC-FU-YCD-GFP,YCD/5-FC自杀基因系统在体内外均有显著的特异性杀伤效应。
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关键词
自杀基因
慢病毒载体
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
JURKAT细胞
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职称材料
4-羟基水杨酰苯胺对T淋巴细胞白血病肿瘤增殖与凋亡的影响
2
作者
邓惠
陈格格
+2 位作者
徐莉
贾新颜
施菊妹
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第9期1185-1193,共9页
目的:研究4-羟基水杨酰苯胺(4-hydroxysalicylaniline,HDS)对T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和Hut-78的抑制效果及其机制。方法:体外实验中,梯度浓度的HDS处理Jurkat和Hut-78细胞后,以CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖状况;用细胞流式术检...
目的:研究4-羟基水杨酰苯胺(4-hydroxysalicylaniline,HDS)对T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和Hut-78的抑制效果及其机制。方法:体外实验中,梯度浓度的HDS处理Jurkat和Hut-78细胞后,以CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖状况;用细胞流式术检测细胞周期变化,通过Western blot检测周期相关蛋白的表达水平;用细胞流式术检测细胞凋亡水平,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平;以γ-H2AX免疫荧光染色检测DNA损伤状况,并通过Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平。体内实验中,通过皮下注射Jurkat细胞构建小鼠肿瘤模型,处理组腹腔注射HDS,对照组给予等量溶剂,记录小鼠体重与肿瘤体积变化,13 d后,取肿瘤组织,通过HE染色观察组织形态,并通过Ki67和γ-H2AX的免疫组织化学染色,分析药物对肿瘤组织增殖与DNA损伤的影响。结果:在体内和体外,证明了HDS可通过诱导Jurkat和Hut-78细胞S期细胞周期阻滞与凋亡,并且通过CHK1/CHK2信号通路的磷酸化激活,加重DNA损伤,抑制T淋巴细胞白血病肿瘤,但HDS对小鼠无明显毒性。结论:HDS可作为潜在的抗T淋巴细胞白血病药物,可抑制细胞周期,诱导细胞凋亡,并通过CHK1/CHK2信号通路影响DNA损伤修复过程。
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关键词
T淋巴细胞白血病
4-羟基水杨酰苯胺
细胞周期S期阻滞
细胞凋亡
DNA损伤
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职称材料
题名
慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
被引量：
1
1
作者
侯军
陈洁
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
机构
第二军医
大学
附属
长海
医院
血液
科
同济大学附属上海第十人民医院血液科
出处
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期30-35,共6页
文摘
背景与目的:酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)可将无毒性的抗真菌药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)转化为细胞毒性产物氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU),进而阻抑DNA、RNA和蛋白质合成,引起细胞死亡。本研究中构建含YCD基因的慢病毒载体质粒,体内外观察YCD/5-FC自杀基因系统的杀伤效应。方法:应用亚克隆技术将YCD和绿色荧光蛋白基因(green fluorescence protein,GFP)连接至慢病毒空载体pFUW,构建获得pGC-FU-YCD-GFP。将3质粒系统(含包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)脂质体法共转染包装细胞293T,获得的慢病毒转染人Jurkat细胞,流式细胞仪(FACS)和Western blot检测Jurkat/YCD-GFP表达水平;加入前体药物5-FC,观察对靶细胞的杀伤情况和旁观者效应。转基因细胞接种至裸鼠前肢皮下,观察体内肿瘤杀伤情况。结果:慢病毒载体3质粒系统感染293T细胞后,获得的慢病毒滴度为1.2×108 TU/mL。该病毒可高效转染人Jurkat细胞,感染率达96.93%,Western blot显示转基因细胞可分泌YCD蛋白。100μmol/L 5-FC作用96 h可杀伤(89.37±6.57)%的Jurkat/YCD-GFP细胞。混合培养提示存在明显的旁观者效应。转基因细胞可在小鼠体内致瘤,5-FC可明显抑制肿瘤生长。结论:成功构建慢病毒载体pGC-FU-YCD-GFP,YCD/5-FC自杀基因系统在体内外均有显著的特异性杀伤效应。
关键词
自杀基因
慢病毒载体
酵母菌胞嘧啶脱氨酶
JURKAT细胞
Keywords
Suicide gene
Lentiviral vector
Yeast cytosine deaminase
Jurkat cell
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
4-羟基水杨酰苯胺对T淋巴细胞白血病肿瘤增殖与凋亡的影响
2
作者
邓惠
陈格格
徐莉
贾新颜
施菊妹
机构
安徽医
科
大学
上海
临床学院
上海
市东方
医院
血液
科
安徽医
科
大学
第五临床医学院
同济大学附属上海第十人民医院血液科
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第9期1185-1193,共9页
基金
国家自然科学基金(82170200,82170201,82170190)。
文摘
目的:研究4-羟基水杨酰苯胺(4-hydroxysalicylaniline,HDS)对T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和Hut-78的抑制效果及其机制。方法:体外实验中,梯度浓度的HDS处理Jurkat和Hut-78细胞后,以CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖状况;用细胞流式术检测细胞周期变化,通过Western blot检测周期相关蛋白的表达水平;用细胞流式术检测细胞凋亡水平,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平;以γ-H2AX免疫荧光染色检测DNA损伤状况,并通过Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平。体内实验中,通过皮下注射Jurkat细胞构建小鼠肿瘤模型,处理组腹腔注射HDS,对照组给予等量溶剂,记录小鼠体重与肿瘤体积变化,13 d后,取肿瘤组织,通过HE染色观察组织形态,并通过Ki67和γ-H2AX的免疫组织化学染色,分析药物对肿瘤组织增殖与DNA损伤的影响。结果:在体内和体外,证明了HDS可通过诱导Jurkat和Hut-78细胞S期细胞周期阻滞与凋亡,并且通过CHK1/CHK2信号通路的磷酸化激活,加重DNA损伤,抑制T淋巴细胞白血病肿瘤,但HDS对小鼠无明显毒性。结论:HDS可作为潜在的抗T淋巴细胞白血病药物,可抑制细胞周期,诱导细胞凋亡,并通过CHK1/CHK2信号通路影响DNA损伤修复过程。
关键词
T淋巴细胞白血病
4-羟基水杨酰苯胺
细胞周期S期阻滞
细胞凋亡
DNA损伤
Keywords
T⁃cell lymphoblastic leukemia
4⁃hydroxysalicylaniline
S phase cell cycle arrest
apoptosis
DNA damage
分类号
R733.71 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒载体介导的自杀基因系统YCD/5-FC对人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞杀伤效应的研究
侯军
陈洁
陈萍萍
冯曹波
周虹
章卫平
王健民
《中国癌症杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
4-羟基水杨酰苯胺对T淋巴细胞白血病肿瘤增殖与凋亡的影响
邓惠
陈格格
徐莉
贾新颜
施菊妹
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023
0
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