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我国人畜间弓形虫感染状况及流行特征
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作者 刘平 刘俐君 +7 位作者 唐斌 孙向东 赵达卓 徐全刚 刘晓雷 王圆圆 刘明远 王幼明 《中国动物检疫》 2025年第3期1-6,共6页
弓形虫病是一种由刚地弓形虫引起的人兽共患传染病,对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁。为了解我国人畜间弓形虫感染状况及分布特征,检索整理已发表的中英文文献,对相关感染数据进行汇总分析。结果显示:我国人间弓形虫感染率为0.72%~2... 弓形虫病是一种由刚地弓形虫引起的人兽共患传染病,对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁。为了解我国人畜间弓形虫感染状况及分布特征,检索整理已发表的中英文文献,对相关感染数据进行汇总分析。结果显示:我国人间弓形虫感染率为0.72%~23.41%。猪群感染率为29.4%,远高于鸡(13.4%)、牛(10.1%)和绵羊(8.5%)等畜禽,也高于犬猫伴侣动物的感染率(11.0%~20.0%)。除猪群外,畜间弓形虫感染率随年份呈降低趋势;西南地区感染率最高,其次是中部和西北地区,东北地区最低。结果表明:弓形虫病在我国人群、畜禽及伴侣动物中普遍存在,并呈现一定的空间和群间分布特征,其流行得到一定程度的控制。今后应加强畜间弓形虫病监测,以保障人类食品安全和生命健康,保障畜牧业稳定快速发展。 展开更多
关键词 弓形虫 感染率 流行特征
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重组毒素rCCK_(96-104)PE38靶向结肠癌生物特性研究
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作者 张嵩 柳溪林 +4 位作者 李萌 常江 高世奇 胡盼 柳增善 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期247-252,共6页
旨在原核表达并纯化新型重组毒素rCCK_(96-104)PE38,验证其对结肠癌细胞的靶向杀伤作用。使用基因扩增技术将反向编译的胆囊收缩素CCK_(96-104)与绿脓杆菌外毒素PE38融合,构建原核表达载体。利用Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过结肠癌细... 旨在原核表达并纯化新型重组毒素rCCK_(96-104)PE38,验证其对结肠癌细胞的靶向杀伤作用。使用基因扩增技术将反向编译的胆囊收缩素CCK_(96-104)与绿脓杆菌外毒素PE38融合,构建原核表达载体。利用Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过结肠癌细胞体外杀伤实验以及结肠癌裸鼠模型的治疗验证rCCK_(96-104)PE38的抗肿瘤能力。结果显示,扩增出的rCCK_(96-104)PE38序列正确,成功利用pET-28a原核表达系统实现了活性表达。纯化后的重组蛋白能够在体外诱导结肠癌细胞凋亡,并能抑制裸鼠模型体内的肿瘤生长。成功制备高纯度、无标签的rCCK_(96-104)PE38重组免疫毒素,体内、体外实验证实其具有抑制结肠癌的能力。 展开更多
关键词 重组毒素 结肠癌 胆囊收缩素 绿脓杆菌外毒素
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虫草素预防肥胖及通过ADORA1介导GH3细胞中泌乳素分泌研究 被引量:7
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作者 李燕 徐红月 +3 位作者 李树林 王雪艳 唐旭东 于录 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第5期1382-1388,共7页
为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量(50、25、12.5mg/(kg·d))的虫草素,连续灌胃35d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培... 为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量(50、25、12.5mg/(kg·d))的虫草素,连续灌胃35d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培养大鼠脑垂体瘤细胞(GH3),通过CCK8、Western blotting、ELISA等方法检测虫草素对GH3细胞的增殖毒性,以及腺苷受体A1(ADORA_1)的表达和对泌乳素分泌量的影响。体内试验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠体重、脂肪系数和血脂水平(高密度脂蛋白(HDL)除外)均极显著升高(P<0.01);虫草素高、中、低各剂量组均能极显著或显著降低大鼠体重、脂肪系数及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平(P<0.01;P<0.05),但HDL水平仅在虫草素高剂量组中显著升高(P<0.05),而虫草素中、低剂量组均无显著变化(P>0.05);体外试验结果显示,虫草素浓度低于25μg/mL时对GH3细胞增殖无影响;虫草素能够诱导GH3细胞ADORA_1表达升高;虫草素和ADORA_1激动剂(R-PIA)单独作用能显著或极显著降低泌乳素的分泌量(P<0.05;P<0.01),虫草素与ADORA_1抑制剂(DPCPX)联合作用时能够在一定程度上阻断虫草素对泌乳素的抑制作用。结果表明,虫草素具有预防肥胖和降血脂的作用,其可能的作用机制是通过诱导ADORA_1表达抑制泌乳素的分泌,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥降脂药物的开发提供一定依据。 展开更多
关键词 虫草素 肥胖 血脂 泌乳素 脑垂体瘤细胞
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华支睾吸虫病在我国的流行及诊断方法研究进展 被引量:16
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作者 孙青松 于妮娜 +2 位作者 尚信池 张笛 刘明远 《动物医学进展》 北大核心 2019年第8期84-88,共5页
华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的危害严重的鱼源性人兽共患寄生虫病,主要引起人和多种动物的肝胆病变,严重者可引起胆管上皮癌,因此华支睾吸虫被国际癌症署(IARC)归为第Ⅰ类生物性致癌因子。我国华支睾吸虫病主要流行于淡水资源丰富... 华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的危害严重的鱼源性人兽共患寄生虫病,主要引起人和多种动物的肝胆病变,严重者可引起胆管上皮癌,因此华支睾吸虫被国际癌症署(IARC)归为第Ⅰ类生物性致癌因子。我国华支睾吸虫病主要流行于淡水资源丰富的地区,在我国27个省、市、自治区均有该病人体感染的报道。近年来,我国华支睾吸虫感染率呈上升趋势,且受威胁地区和人数不断增加。对该病的诊断和防控已刻不容缓,传统的病原学诊断方法存在着一定的局限性和弊端。免疫学方法和分子生物学技术的不断发展为该病的诊断提供了新的途径,今后在华支睾吸虫病的基础研究与防控中起到更加重要的作用。论文就华支睾吸虫病的流行特点及诊断方法研究进展进行综述,以期为华支睾吸虫病的研究提供参考。 展开更多
关键词 华支睾吸虫病 流行病学 免疫学诊断 分子生物学技术
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胰岛素联合利奈唑胺抑制糖尿病细菌性肺炎的机制研究
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作者 倪丽慧 栾文静 +7 位作者 王雪飞 李媛 安雅男 马方雪 周宏 王超 梁俊超 于录 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期356-366,共11页
试验旨在研究胰岛素联合利奈唑胺是否同时具有降糖、抗菌以及抑制α-溶血素活性,从而抑制糖尿病细菌性肺炎。本研究通过体外试验探讨了联合用药对高糖和金黄色葡萄球菌α-溶血素共同诱导的巨噬细胞炎症反应的作用,并探讨其机制。通过药... 试验旨在研究胰岛素联合利奈唑胺是否同时具有降糖、抗菌以及抑制α-溶血素活性,从而抑制糖尿病细菌性肺炎。本研究通过体外试验探讨了联合用药对高糖和金黄色葡萄球菌α-溶血素共同诱导的巨噬细胞炎症反应的作用,并探讨其机制。通过药物敏感试验测定最小抑菌浓度(MIC);通过检测D600 nm值绘制生长曲线来考察胰岛素、利奈唑胺单独或联合胰岛素的抗菌活性;通过溶血试验考察药物组合对α-溶血素活性的抑制效果;通过细胞毒性试验判定药物组合的体外安全性;借助Western blotting药物组合对炎症通路蛋白的作用。药物敏感性试验结果显示,胰岛素组未检测到金黄色葡萄球菌8325-4株和DU1090株的MIC值,利奈唑胺和胰岛素+利奈唑胺药物组合对这两种金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5μg/mL;由生长曲线结果可知,胰岛素不抑制正常组和高糖组金黄色葡萄球菌的生长,但是在利奈唑胺组和胰岛素+利奈唑胺药物组合组,0.25~4μg/mL利奈唑胺可抑制金黄色葡萄球菌的生长;溶血试验结果显示,正常组和高糖组胰岛素均不抑制α-溶血素活性,0.25~4μg/mL利奈唑胺均可抑制α-溶血素活性;细胞毒性试验显示,正常组和高糖组,细胞存活率均大于88.038%,50 nmol/L胰岛素、0.25μg/mL利奈唑胺、50 nmol/L胰岛素+0.25μg/mL利奈唑胺药物组合可提高高糖诱导的MH-S细胞存活率;Western blotting结果显示,50 nmol/L胰岛素单独使用对高糖和α-溶血素共同诱导小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)中TLR2、MAPKs及NLRP3蛋白的表达水平没有抑制作用,而50 nmol/L胰岛素联合0.25μg/mL利奈唑胺可降低高糖和α-溶血素共同诱导MH-S细胞中上述蛋白的表达水平,其抑制作用比单独使用利奈唑胺时显著。综上所述,胰岛素联合利奈唑胺可通过降糖、抗菌和抑制α-溶血素活性的方式抑制小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。 展开更多
关键词 利奈唑胺 胰岛素 金黄色葡萄球菌 α-溶血素 高糖 小鼠肺泡巨噬细胞
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GEM-PA表面展示系统研究进展 被引量:1
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作者 吕瑞卿 焦翠翠 +2 位作者 张梦瑶 王化磊 张海丽 《广东畜牧兽医科技》 2023年第1期51-56,共6页
GEM-PA表面展示系统是由革兰氏阳性细菌增强基质(Gram positive Enhancer Matrix,GEM)与锚定蛋白(Protein Anchor,PA)组成,以GEM颗粒为展示核心,外源蛋白通过与PA锚定蛋白的融合表达实现其在GEM颗粒表面的展示。由于GEM颗粒生物安全性... GEM-PA表面展示系统是由革兰氏阳性细菌增强基质(Gram positive Enhancer Matrix,GEM)与锚定蛋白(Protein Anchor,PA)组成,以GEM颗粒为展示核心,外源蛋白通过与PA锚定蛋白的融合表达实现其在GEM颗粒表面的展示。由于GEM颗粒生物安全性高、结合外源蛋白能力强、有自体佐剂效应等优点,以其为基础的GEM-PA表面展示系统近年来发展迅速,成为表面展示系统新的研究热点之一。目前,该系统已应用于固定化酶、蛋白及病毒纯化、新型疫苗的研制等多个领域。该文将对该系统的组成及应用研究进展进行综述。 展开更多
关键词 GEM-PA表面展示系统 细菌样颗粒 研究进展
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肠舌状绦虫线粒体基因组特征及系统发育分析
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作者 陈秀琴 邱阳元 +1 位作者 吕庆博 黄梅清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5725-5737,共13页
本研究旨在获得肠舌状绦虫线粒体基因组全序列,了解其序列的结构特征,探究肠舌状绦虫系统发育相关信息。从麦穗鱼中获得肠舌状绦虫,提取基因组DNA,通过Illumina测序技术对肠舌状绦虫的线粒体全基因组进行测序、组装和注释,并进行生物信... 本研究旨在获得肠舌状绦虫线粒体基因组全序列,了解其序列的结构特征,探究肠舌状绦虫系统发育相关信息。从麦穗鱼中获得肠舌状绦虫,提取基因组DNA,通过Illumina测序技术对肠舌状绦虫的线粒体全基因组进行测序、组装和注释,并进行生物信息学分析;从GenBank数据库中下载8个科34种绦虫的线粒体基因组序列,运用最大似然法和贝叶斯法构建系统发育树。结果显示,肠舌状绦虫线粒体基因组全长为13655 bp,A+T含量为67.6%,其碱基组成具有明显的AT偏向性。肠舌状绦虫线粒体基因组包括12个蛋白编码基因(protein-coding genes,PCGs)、22个tRNA基因、2个rRNA基因和2个非编码控制区。在12个PCGs中,除cox3基因使用TTG作为起始密码子外,其余11个PCGs均使用ATG作为起始密码子;终止密码子方面,5个PCGs使用TAA,5个PCGs使用TAG,而cox3基因和nad3基因均没有终止密码子。PCGs使用密码子频率最高的是UUA,最低的是CGA。22个tRNA基因总长为1272 bp,大多数tRNA能形成典型的三叶草结构,但是trnS1和trnR由于缺少二氢尿嘧啶臂无法形成典型的三叶草结构。nad2、nad 6和nad 4基因更适合作为肠舌状绦虫的分子标记。系统发育树结果表明,肠舌状绦虫与双线绦虫亲缘关系最近,并与双槽头属绦虫(Dibothriocephalus)形成姐妹群。本研究获得了肠舌状绦虫的线粒体全基因组,为研究肠舌状绦虫的分类学和系统学提供参考。 展开更多
关键词 肠舌状绦虫 线粒体基因组 结构特征 系统发育
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红景天苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用 被引量:23
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作者 王秋静 王泺璎 +1 位作者 王苹 杨丽 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3147-3151,共5页
目的观察红景天苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,阳性药组,红景天苷低、中、高(7.5、15、30 mg/kg)剂量组,采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)模型,手术... 目的观察红景天苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,阳性药组,红景天苷低、中、高(7.5、15、30 mg/kg)剂量组,采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)模型,手术前连续7 d腹腔注射给药,缺血60 min再灌注24 h后,观察红景天苷对血清AST、CK、LDH、SOD、NOS活性及MDA、NO水平的影响。分光光度法检测心肌组织caspase-3活性,测定心肌梗死面积,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测相关信号通路关键蛋白表达。结果与模型组比较,红景天苷各剂量组能降低AST、CK、LDH、caspase-3活性和MDA水平,增加SOD、NOS活性和NO水平,抑制心肌细胞凋亡,提高心肌组织Nrf2蛋白表达和ERK磷酸化。结论红景天苷可降低缺血再灌注导致的心肌损伤,其机制可能与Nrf2激活和ERK磷酸化有关。 展开更多
关键词 红景天苷 心肌缺血再灌注 氧自由基 细胞凋亡 信号通路
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吉林省羊群饲养管理及养羊场户布鲁氏菌病知信行调查
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作者 刘平 杨宏琳 +7 位作者 孙向东 刘娜 徐全刚 刘晓雷 姜秋杰 赵达卓 刘明远 张衍海 《中国动物检疫》 2025年第9期9-14,共6页
为了解吉林省羊群养殖管理现状以及养殖人群对布鲁氏菌病(以下简称“布病”)防控的认知、态度及行为意向(以下简称“知信行”),在吉林省9地市抽取491家养羊场户开展横断面调查。结果显示:吉林省西部和东部地区约60.0%场户羊群饲养方式... 为了解吉林省羊群养殖管理现状以及养殖人群对布鲁氏菌病(以下简称“布病”)防控的认知、态度及行为意向(以下简称“知信行”),在吉林省9地市抽取491家养羊场户开展横断面调查。结果显示:吉林省西部和东部地区约60.0%场户羊群饲养方式为半舍饲半放牧,中部平原地区66.7%场户为圈养。养羊场户对布病防控的知晓率平均为84.1%。被调查养羊场户中,96.9%知晓布病可以预防,但仅59.9%认为布病早期可以治愈,45.8%认为目前布病流行较严峻,82.7%表示羊患布病会带来很大损失,90%以上表示有能力实施布病预防措施。不同市州的知信行分值差异有统计学意义,其中白城、松原、四平和延边4个地区的养羊场户认知水平低于平均值。59.7%的养羊场户表示最常用移动视频软件获取疫病防控相关信息。结果表明,吉林省养羊场户对布病防控较为重视,对人布病和羊布病的传播途径认知较好,有能力也有较高的意愿来预防羊布病,但对布病治疗、流行形势及感染风险等缺乏足够认知。建议针对薄弱环节和认知盲区,优化宣传内容和方式,加大布病防控宣传教育力度,以提高高危人群的自我防护意识,降低人畜间布病传播扩散风险。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 知信行 养羊户 吉林省
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芴完全抗原和多克隆抗体制备与鉴定 被引量:1
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作者 王男男 李岩松 +7 位作者 孟星宇 周玉 乔斌 孙宇 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第9期108-112,共5页
以9-芴乙酸(fluorene-9-aceticacid,FLU)为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和FLU-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BAL... 以9-芴乙酸(fluorene-9-aceticacid,FLU)为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和FLU-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测得多克隆抗体效价为51 200,间接竞争ELISA方法测得芴多克隆抗体的特异性,与荧蒽的交叉反应率为12%,与其他14种多环芳烃交叉反应不明显。 展开更多
关键词 9-芴乙酸 完全抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附实验
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2018—2019年山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 被引量:7
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作者 梁俊超 李坤 +6 位作者 袁飞 王宗升 刘红祥 郝尧光 王辉之 刘东 于录 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期13-19,26,共8页
为了解近年来山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及分子遗传变异情况。对2018—2019年山东不同地区493份疑似PRRSV样品进行RT-PCR检测,并对34份PRRSV阳性样品进行ORF 5基因核苷酸及GP5蛋白氨基酸序列分析比较。结果显示,2018... 为了解近年来山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及分子遗传变异情况。对2018—2019年山东不同地区493份疑似PRRSV样品进行RT-PCR检测,并对34份PRRSV阳性样品进行ORF 5基因核苷酸及GP5蛋白氨基酸序列分析比较。结果显示,2018年和2019年送检样品中PRRSV抗原阳性率分别为20.79%和24.09%;同源性对比及遗传进化分析,34株PRRSV主要属于谱系1和谱系8,且2018年和2019年均为谱系1中的PRRSV检出率最高,分别为50.00%和59.10%;氨基酸分析显示,34株PRRSV主要以点突变为主,未见插入突变,与不同谱系代表毒株相比,诱饵表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均存在不同程度的变异。结果表明,NADC 30 like PRRSV可能已成为山东地区优势野毒毒株,且仍在不断发生变异。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 流行病学 遗传进化 抗原表位 N-糖基化位点
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2020年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查 被引量:13
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作者 梁俊超 赵翔 +7 位作者 刘红祥 袁飞 李坤 郝尧光 王宗升 王辉之 刘东 杜元钊 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期17-25,共9页
为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。RT-PCR检测结果显示,2020年送检样品中,PRRSV阳性检出率为23.68%(135/570),其中保育猪病料的阳性检出率最高,为32.24%(108/335)。同源性对比及遗传进化分析结果显示,60个PRRSV均为PRRSV2(美洲株),主要属于谱系1和谱系8,占比分别为51.67%和43.33%。氨基酸分析结果显示,60个PRRSV的GP5蛋白氨基酸以点突变为主,其中10个PRRSV的GP5蛋白氨基酸出现缺失突变,且非中和表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均发生不同程度的变异。结果表明,保育猪群为PRRSV高发病群体,谱系1 PRRSV或已成为国内流行优势毒株,且PRRSV不断发生变异,这或许会影响现有疫苗的免疫保护效果。因此,针对PRRS需要综合防控,除选用安全有效的PRRSV弱毒活疫苗进行免疫外,加强猪场生物安全及饲养管理也极其重要。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5基因 分子遗传变异
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玉米中伏马毒素B1、B2间接竞争酶联免疫吸附方法的建立 被引量:6
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作者 于瑶 李岩松 +5 位作者 卢士英 杨勇 胡盼 任洪林 柳增善 周玉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期193-197,共5页
基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被... 基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被条件、酶标二抗稀释倍数、底物作用时间。结果显示,线性检测范围为1.41~54.2ng/m L,最低检测限为24.5μg/kg,实测玉米样品加标回收率为89.36%~108.54%。交叉反应结果显示,与伏马毒素B2(fumonisin B2,FB2)交叉反应率为129.88%,与其他真菌毒素交叉反应均小于10%,该ic-ELISA方法可对玉米样品中的FB1与FB2总量进行初筛。 展开更多
关键词 玉米 伏马毒素B1 伏马毒素B2 间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)
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利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系 被引量:4
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作者 翟菲菲 全芷仪 +12 位作者 王路鹿 张士军 鞠丹迪 水一鸣 常江 常恒祯 胡盼 李岩松 卢士英 周玉 柳增善 李兆辉 任洪林 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期36-40,共5页
利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉... 利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选。单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变。说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 RAW264.7 Prdx6 移码突变 布鲁菌
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我国部分地区送检样品3种常见猪病血清学和病原学检测 被引量:7
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作者 梁俊超 王辉之 +7 位作者 刘晓东 刘红祥 李坤 孔宪好 马振乾 胡继明 刘东 于录 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期21-26,共6页
为了解我国部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病3种常见疫病的流行情况,采用ELISA、聚合酶链式反应(PCR)和反转录PCR(RT-PCR)等方法,对2019年11个省(自治区)172个猪场送检的3550份猪血清样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼... 为了解我国部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病3种常见疫病的流行情况,采用ELISA、聚合酶链式反应(PCR)和反转录PCR(RT-PCR)等方法,对2019年11个省(自治区)172个猪场送检的3550份猪血清样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬病野毒(PRV-gE)抗体检测,对9个省(自治区)72个猪场送检的371份病料进行抗原检测。结果显示:CSFV、PRRSV、PRV-gE抗体阳性率分别为82.75%、84.08%、31.86%,抗原阳性率分别为2.62%、26.15%、1.67%。保育猪群CSFV抗体平均阻断率最低,为44.62%,抗体整齐度差,CV为58.26%,且CSFV抗原主要在哺乳仔猪和保育猪病料中被检出,检出率分别为3.57%、3.00%;除育肥猪群外,其他各阶段猪群的PRRSV抗体S/P平均值为1.0~2.0,抗体整齐度整体较差,且平均抗原阳性率较高(26.15%),其中保育阶段猪群病原检出率最高(37.68%);育肥猪、母猪、公猪的PRV-gE抗体阳性率分别为36.82%、35.31%、15.65%,病原主要从死胎/木乃伊胎和哺乳仔猪病料中被检出,检出率分别为8.70%和2.99%。结果表明,PRRSV对我国猪场不同阶段猪群均有较大威胁;保育猪群CSFV抗体水平不理想,暴发疫情风险较高;公猪、母猪及育肥猪群普遍存在PRV感染,尤其是母猪。提议各猪场采取免疫、监测、净化等综合措施,加强这3类常见猪群疫病的防控。 展开更多
关键词 流行病学调查 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 伪狂犬病毒
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我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析 被引量:2
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作者 梁俊超 刘晓东 +6 位作者 袁飞 李坤 刘红祥 马振乾 胡继明 刘东 于录 《家畜生态学报》 北大核心 2021年第9期62-67,共6页
为了解近年我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传变异情况,对2019年来自8省的46株PRRSV测序并进行ORF5基因分析比较。结果表明,送检测序的46株PRRSV均属于北美型,同源性... 为了解近年我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传变异情况,对2019年来自8省的46株PRRSV测序并进行ORF5基因分析比较。结果表明,送检测序的46株PRRSV均属于北美型,同源性对比结果显示,与欧洲毒株LV的同源性为61.4%~64.0%,与谱系1代表毒株NADC30和MN184B的同源性为82.9%~95.0%,与谱系3代表毒株GM2同源性为82.1%~92.4%,与谱系5代表毒株VR2332和MLV同源性为83.6%~89.6%,与谱系8经典毒株CH-1a的同源性为83.1%~95.2%,与谱系8过渡毒株BJ0706的同源性为81.6%~97.5%,与谱系8高致病性蓝耳毒株JXA1、HuN4、TJ的同源性为81.4%~99.7%;氨基酸分析结果表明,46株PRRSV主要以点突变为主,未见插入突变,与不同谱系代表毒株相比,在中和表达位点及N-糖基化位点均存在一定变异。由此可知,PRRSV野毒仍在不断的发生变异。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 中和位点 N-糖基化位点
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环状RNA hsa_circ_004389对甲型流感病毒复制的影响 被引量:1
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作者 张舒 于小航 +3 位作者 张乐 苏宁 赵丽丽 段铭 《广东农业科学》 CAS 2022年第2期135-142,共8页
【目的】试验前期组学数据提示甲型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)感染A549细胞后宿主的环状RNA(circular RNA,circRNA)hsa_circ_004389表达显著上调。为进一步明确hsa_circ_004389表达和IAV感染间的关联,研究其对IAV复制的影响。【... 【目的】试验前期组学数据提示甲型流感病毒(Influenza A Virus,IAV)感染A549细胞后宿主的环状RNA(circular RNA,circRNA)hsa_circ_004389表达显著上调。为进一步明确hsa_circ_004389表达和IAV感染间的关联,研究其对IAV复制的影响。【方法】(1)采用荧光定量PCR等方法,确定在IAV病毒感染后不同时间点和不同感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)条件下hsa_circ_004389的表达水平;(2)检测聚肌苷酸胞苷酸(Polyinosinic acid:polycytidilic acid,poly I∶C)和细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理后hsa_circ_004389的表达情况;(3)干扰素(Interferon,IFN)β和JAK的抑制剂处理细胞后检测hsa_circ_004389的表达情况;hsa_circ_004389过表达和敲低后,在mRNA和蛋白水平上检测该环状RNA对IAV复制的影响。【结果】宿主细胞内hsa_circ_004389表达的增加与IAV感染相关,且与病毒复制呈明显正相关,而JAK-STAT信号通路参与hsa_circ_004389的表达调控,并且hsa_circ_004389能够抑制IAV复制。【结论】hsa_circ_004389是宿主应答IAV感染的产物,为潜在的细胞Ⅰ型IFN应答IAV的拮抗因子。 展开更多
关键词 环状RNA hsa_circ_004389 甲型流感病毒 宿主 表达调控
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旋毛虫感染对高脂饮食肥胖小鼠的干预作用
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作者 仝明薇 李承瑶 +1 位作者 康杰 杨勇 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第4期182-189,共8页
流行病学分析显示,蠕虫感染率和肥胖等代谢疾病呈负相关,然而其作用机制未被完全阐明。本文探究了旋毛虫(Trichinella spiralis)感染对高脂饮食(HFD)肥胖小鼠的干预作用,并初步分析其作用机制。以高脂饮食构建肥胖模型,分为3组:ND组给... 流行病学分析显示,蠕虫感染率和肥胖等代谢疾病呈负相关,然而其作用机制未被完全阐明。本文探究了旋毛虫(Trichinella spiralis)感染对高脂饮食(HFD)肥胖小鼠的干预作用,并初步分析其作用机制。以高脂饮食构建肥胖模型,分为3组:ND组给予基础饲料,其他两组高脂饲喂。4周后,HFD+inf组口服感染250条肌肉虫期旋毛虫,各组继续饲喂8周。每周称重,实验末期统计肝脏和附睾脂肪湿重;检测血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量;HE染色观察附睾脂肪组织病理学形态;油红O染色观察肝脏组织内脂滴情况;荧光定量PCR方法分析附睾脂肪中脂代谢基因表达。结果显示,与HFD组比较,HFD+inf组体重增加明显降低,血清中TC和TG的升高程度有所降低;HE显示附睾脂肪细胞的体积增大得到改善;同时,小鼠肝脏质量增加呈现降低趋势,油红O染色可见肝脏脂质变性得以纠正;此外,旋毛虫感染还可下调附睾脂肪组织中脂质合成相关基因并且上调脂质分解相关基因的mRNA表达水平。结果表明,旋毛虫可以通过减少机体脂质累积和加速脂质分解来影响脂质代谢,从而有效干预高脂诱导的肥胖,因此旋毛虫及其抗原可能为防治肥胖提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 旋毛虫 高脂饮食 肥胖 脂质代谢
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三药组合抑制由α-溶血素导致的巨噬细胞炎性因子激活
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作者 栾文静 安雅男 +3 位作者 王雪飞 徐红月 王超 于录 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2020年第5期519-526,共8页
为了考察一种新型三药组合(氯唑西林、硫利达嗪和四环素)对金葡菌α-溶血素分泌的影响,以及探讨该三药组合对由金葡菌α-溶血素引起巨噬细胞炎症发生的抑制作用。试验采用抗菌药物敏感实验、三维棋盘法、溶血实验、Western blot实验方... 为了考察一种新型三药组合(氯唑西林、硫利达嗪和四环素)对金葡菌α-溶血素分泌的影响,以及探讨该三药组合对由金葡菌α-溶血素引起巨噬细胞炎症发生的抑制作用。试验采用抗菌药物敏感实验、三维棋盘法、溶血实验、Western blot实验方法。结果表明:三药组合显示出协同杀菌作用;三药组合能够显著协同抑制α-溶血素的分泌;三药组合可显著抑制由金葡菌α-溶血素引起巨噬细胞raw264.7相关炎症通路MAPKs、NF-κB、NLRP3蛋白的表达。说明该新型三药组合通过抑制金葡菌α-溶血素的分泌,进而阻断金葡菌α-溶血素引起的巨噬细胞炎性因子的激活。 展开更多
关键词 金葡菌 α-溶血素 巨噬细胞 丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) NLRP3炎性小体
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基于CRISPR/Cas9技术的法尼醇X受体缺失株的构建及其对HeLa细胞增殖的影响
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作者 马方雪 安雅男 +7 位作者 王超 李媛 栾文静 王雪飞 倪丽慧 周宏 梁俊超 于录 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期450-456,共7页
试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),以P... 试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),以PX459质粒为载体,构建真核重组表达质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,再用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞FXR基因敲除稳定株中FXR的表达量,并用Western blotting方法鉴定HeLa细胞FXR基因敲除效果。最后用结晶紫染色试验检测FXR基因敲除对HeLa细胞增殖的影响。结果显示,经测序后,3对sgRNA位置与方向均正确插入到PX459质粒载体内,成功构建出重组表达质粒PX459-sgRNA;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,转染后筛选出的细胞中FXR蛋白不表达,表明构建出稳定敲除FXR基因的HeLa细胞株;结晶紫试验结果发现,FXR基因敲除的HeLa细胞染色深度明显低于正常HeLa细胞,FXR基因敲除HeLa细胞孔D 595 nm值极显著低于野生型HeLa细胞孔(P<0.01),说明HeLa细胞FXR基因敲除株的增殖能力较正常HeLa细胞显著降低。本试验利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源FXR基因敲除细胞株,且FXR基因敲除对癌细胞增殖具有显著抑制作用,为研究FXR的功能和作用机制提供了细胞模型,并为研究FXR在相关癌症发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 法尼醇X受体(FXR) HELA细胞 细胞增殖
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