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浅谈医学科研实验平台建设运行与可持续发展 被引量：4
1
作者 于洋 刘师兵 +3 位作者 王晓军 孙路阳 曹慧玲 徐冶 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2015年第5期220-223,共4页
随着医学科学研究事业的发展,对于医学科研实验平台建设的要求越来越迫切,很多医疗机构或医学院校都急需建立公共科研实验平台以满足临床科研与教学科研的需要,公共医学科研实验平台建立建设能够最大限度满足实际需要的同时对可利用资... 随着医学科学研究事业的发展,对于医学科研实验平台建设的要求越来越迫切,很多医疗机构或医学院校都急需建立公共科研实验平台以满足临床科研与教学科研的需要,公共医学科研实验平台建立建设能够最大限度满足实际需要的同时对可利用资源进行最大限度的整合,针对实验平台的前期准备、场地选择、仪器购置、人员配置到实验室的运行与发展等实际过程,从硬件建设、人员素质建设和实验室运行与发展三方面来探索公共医学科研试验平台建设运行与可持续发展的科学模式。 展开更多
关键词 科研实验平台 建设与管理 实验室运行 人员素质
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大蒜素对D-半乳糖致衰老模型大鼠学习记忆能力及脑组织氧化应激相关蛋白的影响 被引量：7
2
作者 于洋 徐冶 +2 位作者 刘师兵 李松岩 曾林川 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期880-884,共5页
目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老大鼠脑部衰老的影响,并从氧化应激通路入手探讨其中可能的机制。方法取50只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为5组(n=10):正常组(C组)、D-半乳糖组(D组)和大蒜素组,其中大蒜素组按剂量分为低剂量组(L组)、... 目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老大鼠脑部衰老的影响,并从氧化应激通路入手探讨其中可能的机制。方法取50只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为5组(n=10):正常组(C组)、D-半乳糖组(D组)和大蒜素组,其中大蒜素组按剂量分为低剂量组(L组)、中剂量组(M组)和高剂量组(H组)。D、L、M、H组按大鼠体重以125mg/kg的剂量皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液,C组皮下注射同体积生理盐水对照,每日8:00注射1次。同时,L、M和H组分别腹腔注射10、20和40mg/kg大蒜素注射液,C组和D组以同体积生理盐水作对照处理,每日20:00注射1次,所有大鼠均持续注射6周。通过行为学实验,观察各组大鼠学习记忆能力。处死后取各组大鼠脑组织:检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化力(T-AOC);另取部分脑组织:固定包埋后石蜡切片,采用免疫组织化学法观察海马区凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果行为学实验结果显示,与C组比较,D组大鼠学习记忆能力明显下降,而大蒜素干预的各组大鼠记忆能力有所增强。与C组比较,D组大鼠脑组织匀浆中MDA含量升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),T-AOC下降(P<0.05),大蒜素干预的各组大鼠较D组MDA含量下降(P<0.05),SOD活性增强(P<0.05),T-AOC上升(P<0.05),且呈现一定的剂量效应关系。免疫组化结果显示,与C组比较,D组Bax表达明显增加(P<0.05),Bcl-2表达明显减弱(P<0.05),大蒜素干预的L、M、H组大鼠Bax表达较D组呈减弱趋势,Bcl-2表达较D组呈增强趋势,但结果并无统计学意义。结论大蒜素可改善D-半乳糖致衰老大鼠的学习记忆能力,提高脑组织匀浆中SOD活性,降低MDA含量,增强脑组织总抗氧化力,并减轻衰老大鼠脑海马区细胞凋亡。 展开更多
关键词 大蒜素 衰老 脑 氧化应激 凋亡
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过氧化氢通过内质网应激信号通路对Hela细胞自噬和凋亡的诱导作用 被引量：5
3
作者 于洋 徐冶 +3 位作者 刘师兵 衣丹 李松岩 王晓军 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期437-441,共5页
目的:利用过氧化氢(H2O2)构建人宫颈癌Hela细胞体外氧化应激模型,观察其对Hela细胞自噬和凋亡的影响,并探讨H2O2与内质网应激(ERS)信号通路之间的关系。方法:以1mmol·L-1 H2O2构建体外氧化应激模型;实验分为对照组、H2O24h组、H2O... 目的:利用过氧化氢(H2O2)构建人宫颈癌Hela细胞体外氧化应激模型,观察其对Hela细胞自噬和凋亡的影响,并探讨H2O2与内质网应激(ERS)信号通路之间的关系。方法:以1mmol·L-1 H2O2构建体外氧化应激模型;实验分为对照组、H2O24h组、H2O28h组和H2O212h组,各组细胞分别以H2O2作用0、4、8及12h后,利用Western blotting法检测各组Hela细胞中ERS及凋亡、自噬相关蛋白表达。结果:与对照组比较,各H2O2组Hela细胞中Cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05),Cleaved Caspase-4表达水平亦明显升高(P<0.05);各H2O2组Hela细胞中LC3-Ⅱ表达水平高于对照组(P<0.05),GRP78表达水平亦高于对照组(P<0.05);随着H2O2作用时间的延长,各H2O2组Hela细胞中IRE1a表达水平明显升高(P<0.01),p-JNK表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:在H2O2所构建的体外氧化应激模型中H2O2能够诱导Hela细胞发生自噬和凋亡,且该诱导作用由ERS信号通路介导。 展开更多
关键词 过氧化氢 氧化应激 内质网应激 细胞凋亡 自噬 HELA细胞
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缺糖缺氧对经内质网应激途径诱导Hela细胞凋亡的影响 被引量：6
4
作者 徐冶 钟加滕 +4 位作者 李晓宁 于慧美 康劲松 苏静 孙连坤 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期821-824,I0002,共5页
目的:体外构建肿瘤细胞缺糖缺氧(OGD)模型,观察缺糖缺氧应激条件对肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法:利用平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖模型,利用连二亚硫酸钠消耗培养基中氧构建缺氧模型;实验分为对照组、缺糖缺氧4、8和1... 目的:体外构建肿瘤细胞缺糖缺氧(OGD)模型,观察缺糖缺氧应激条件对肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法:利用平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖模型,利用连二亚硫酸钠消耗培养基中氧构建缺氧模型;实验分为对照组、缺糖缺氧4、8和12 h组。MTT法检测各组细胞增殖率;Western blotting检测各组Hela细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平;Hoechst染色检测各组细胞细胞核形态学改变。结果:与对照组比较,缺糖缺氧各组细胞增殖率明显下降(P<0.05);内质网应激相关蛋白GRP78表达水平明显升高,内质网应激相关凋亡信号蛋白CHOP和caspase-4活化片段蛋白表达水平明显升高(P<0.05);细胞内凋亡相关蛋白caspase-3活化片段表达水平(P<0.05);缺糖缺氧组细胞核出现核皱缩和核碎裂等凋亡形态学表现。结论:缺糖缺氧可以诱导Hela细胞发生凋亡,其凋亡可能是通过内质网应激介导。 展开更多
关键词 缺糖缺氧 内质网应激 凋亡 HELA细胞
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大蒜素对衰老模型小鼠心脏和肺的保护作用 被引量：5
5
作者 于洋 刘师兵 +1 位作者 李松岩 徐冶 《医药导报》 CAS 2016年第2期115-120,共6页
目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠心肌和肺组织氧化应激与细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法雄性昆明小鼠50只,按体质量随机分为正常对照组(C组)、模型对照组(D组)和大蒜素小剂量组(L组)、中剂量组(M组)、大剂量组(H组),每... 目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠心肌和肺组织氧化应激与细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法雄性昆明小鼠50只,按体质量随机分为正常对照组(C组)、模型对照组(D组)和大蒜素小剂量组(L组)、中剂量组(M组)、大剂量组(H组),每组10只。D、L、M、H组小鼠注射D-半乳糖0.9%氯化钠溶液制备衰老模型,L、M和H组同时腹腔注射大蒜素注射液进行给药干预,共持续6周。通过小鼠转棒疲劳仪和小鼠跑台检测各组小鼠运动耐力;检测心肌和肺组织匀浆上清液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化力(T-AOC);免疫组织化学法观察凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达并统计二者比值变化。结果行为学实验结果:与C组比较,D组小鼠在疲劳转棒上的停留时间和小鼠跑台上持续跑步时间均明显缩短(P<0.05),L、M、H组较D组有所延长;D组小鼠心肌和肺组织匀浆上清液中MDA含量较C组升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),T-AOC下降(P<0.05),L、M、H组较D组小鼠心肌和肺组织匀浆中MDA含量下降(均P<0.05),SOD活性升高(均P<0.05),T-AOC上升(均P<0.05),且呈现一定剂量效应关系;免疫组化结果显示:D组小鼠较C组小鼠心肌Bax表达增强,Bcl-2表达减弱,L、M、H组小鼠Bax表达较D组减弱,Bcl-2表达较D组增强,肺组织两种蛋白表达趋势同心肌组织。结论大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠心脏和肺具有保护作用,具体表现为增加衰老小鼠心肺运动耐力、减轻心肌和肺局部组织过氧化水平,并减少心肌和肺组织内的细胞凋亡。 展开更多
关键词 大蒜素 小鼠 衰老 氧化应激 凋亡
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氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞内质网应激途径凋亡的影响 被引量：2
6
作者 李松岩 郭敏 +3 位作者 王烟 于洋 刘师兵 徐冶 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期960-965,共6页
目的探讨氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞(SMC)内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养主动脉SMC细胞,分别加入100、400和800μmol/L H2O2培养12h后,MTT法检测SMC细胞生存率。将细胞分为对照组、H2O2组、氯喹组、H2O2+氯喹组,培养12h后采... 目的探讨氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞(SMC)内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养主动脉SMC细胞,分别加入100、400和800μmol/L H2O2培养12h后,MTT法检测SMC细胞生存率。将细胞分为对照组、H2O2组、氯喹组、H2O2+氯喹组,培养12h后采用MTT法检测氯喹阻断自噬后SMC细胞的生存率,倒置相差显微镜观察H2O2对SMC细胞形态变化的影响,间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,Western blotting检测Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT检测结果显示,100、400、800μmol/L H2O2作用12h后,SMC细胞存活率明显降低,IC50为447.4μmol/L;氯喹阻断自噬后,SMC细胞存活率明显降低(P<0.05)。倒置相差显微镜观察结果显示,H2O2+氯喹组SMC收缩变圆,细胞密度明显下降。激光共聚焦显微镜观察显示,H2O2与氯喹联合作后,SMC细胞质中LC3和p62蛋白表达均明显增加,且有明显共定位现象。Western blotting检测结果表明,H2O2与氯喹联合作用后,SMC中内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达明显增加(P<0.05,P<0.01),凋亡执行分子Caspase-3的裂解形式蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论氯喹对过氧化氢诱导SMC通过内质网应激途径的凋亡具有促进作用。 展开更多
关键词 自噬 肌细胞 平滑肌 细胞凋亡 氯喹 过氧化氢
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EGFR及TGF-α在前列腺腺癌及前列腺上皮内瘤组织中的表达及其临床意义 被引量：2
7
作者 王利群 徐冶 金仁顺 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期308-311,I0004,共5页
目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子α(TGF-α)蛋白在前列腺腺癌(PAC)和高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)以及癌旁前列腺良性增生(BPH)组织中的表达,阐明其表达在PAC发生过程中的作用。方法:收集41例PAC和癌旁BPH组织以及32例HG... 目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子α(TGF-α)蛋白在前列腺腺癌(PAC)和高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)以及癌旁前列腺良性增生(BPH)组织中的表达,阐明其表达在PAC发生过程中的作用。方法:收集41例PAC和癌旁BPH组织以及32例HGPIN病变组织,采用免疫组化SABC方法检测EGFR和TGF-α在不同病变中的表达。结果:①EGFR在PAC、HGPIN及BPH组织中的阳性表达率分别为56.6%、53.7%及85.4%,在BPH中的表达率高于PAC和HGPIN,差异有统计学意义(P<0.01)。PAC和HGPIN组织中EGFR的表达差异无统计学意义(P>0.05)。EGFR的表达与肿瘤细胞的分化程度无关,在高、中和低分化PAC组织中阳性表达率分别为53.9%、55.6%及52.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。②TGF-α在PAC中的阳性表达率为56.1%,在癌旁BPH组织中阳性表达率为85.4%,差异有统计学意义(P<0.01),但与肿瘤细胞的分化程度无关,在高、中和低分化PAC阳性表达率分别为53.8%、66.7%及52.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。③TGF-α在HGPIN病变中的阳性表达率为56.3%,与PAC比较差异无统计学意义(P>0.05),但与BPH比较差异有统计学意义(P<0.01)。EGFR和TGF-α在PAC中共同阳性率为81.8%,分别阳性率EGFR为18.2%,TGF-α为26.3%,两者呈正相关(r=0.558,P<0.001),但在HGPIN病变(r=0.111,P=5.450)和BPH(r=0.024,P=0.883)中两者无相关性。结论:EFFR和TGF-α蛋白在PAC、HGPIN和BPH组织中的表达水平不同,可以作为良恶性前列腺疾病的诊断及鉴别诊断指标。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 前列腺上皮内瘤 表皮生长因子受体 转化生长因子Α
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HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响
8
作者 徐冶 李质馨 +4 位作者 曹慧玲 王弘珺 田洪艳 于洋 刘师兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期117-120,共4页
目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研... 目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研究HIP1基因对PC-3细胞增殖的影响。结果转染PC-3细胞后,沉默HIP1基因效率达83%(P<0.01);Western blotting证实该基因片段为抑制HIP1的有效作用靶点。细胞划痕实验和生长曲线显示HIP1基因沉默可抑制PC-3细胞的增殖。结论 pSilence-shHIP1表达载体可特异性地抑制HIP1基因的表达,沉默HIP1基因可抑制PC-3细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 HIP1蛋白 RNA干扰 PC-3细胞 细胞增殖
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杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞自噬的诱导作用及线粒体分裂的促进作用
9
作者 于洋 刘师兵 +2 位作者 李松岩 徐路 徐冶 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期685-689,I0002,共6页
目的:观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法:体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60g·L^(-1)分为对照组和低、中、高剂量杨梅素... 目的:观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法:体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60g·L^(-1)分为对照组和低、中、高剂量杨梅素组,均作用12h。流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位变化,MitoTracker Red荧光探针特异性标记线粒体观察其形态,Western blotting法检测动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达水平,采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3表达强度。结果:与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞线粒体膜电位下降比例明显升高(t=3.27,t=6.85,t=5.49,P<0.05)。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中线粒体数目增加,且线粒体砂砾感增强。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中Drp1(t=4.35,t=3.28,t=6.17,P<0.05)和Fis1(t=8.32,t=6.74,t=9.27,P<0.05)蛋白表达水平明显升高,中和高剂量杨梅素组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高(t=3.28,t=4.21,P<0.05)。间接免疫荧光检测,与对照组比较,随着杨梅素给药剂量增加,LC3表达强度逐渐增强。结论:杨梅素能够诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生自噬,并对线粒体动分裂有明显促进作用。 展开更多
关键词 杨梅素 SKOV3细胞 自噬 线粒体分裂
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Ca^(2+)在顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬反应中的作用 被引量：2
10
作者 曾林川 邓慧敏 +2 位作者 陈君 窦茗瀚 徐冶 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期313-319,共7页
背景与目的:Ca^(2+)在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色,其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节,细胞内Ca^(2+)浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca^(2+)在顺铂诱导SKOV3细胞... 背景与目的:Ca^(2+)在维持细胞生物活性方面扮演着很重要的角色,其在细胞内的储存、释放和摄取主要受内质网调节,细胞内Ca^(2+)浓度的稳态是维持细胞生物能量代谢、蛋白质折叠和分泌的基础条件。本研究探讨Ca^(2+)在顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激-自噬反应中的作用机制。方法:取人卵巢癌SKOV3细胞系为研究对象,按以下步骤分组:1探讨顺铂诱导内质网应激与自噬反应,用6μg/m L的顺铂处理SKOV3细胞0、6、12和24 h;2了解顺铂和毒胡萝卜内酯(thapsigargin,TG)诱导内质网应激释放的Ca^(2+)与自噬的关系,分别用TG和顺铂处理SKOV3细胞0、9和12 h;3探究Ca^(2+)对自噬的作用机制,分成对照组、顺铂组、TG组、BAPTA-AM组、顺铂联合BAPTA-AM组和TG联合BAPTA-AM组。用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78和自噬标志性蛋白LC3蛋白的表达水平;用Fluo-4钙离子荧光探针检测细胞质中的Ca^(2+)浓度变化;间接免疫荧光染色后,用共聚焦显微镜检测LC3蛋白的表达情况。结果:SKOV3细胞经6μg/m L顺铂作用6 h时GRP78灰度值(1.393±0.004)与其对照组(0.679±0.011)相比显著提高(t=113.2,P=0.000),在12 h时LC3灰度值(0.072±0.002)与其对照组(0.038±0.000)相比显著提高(t=25.5,P=0.000)。间接免疫荧光结果显示,顺铂(6μg/m L)组和TG(3μmol/L)组随作用时间的延长,细胞内LC3荧光斑点会逐渐增多,并伴随着细胞质Ca^(2+)浓度上升。后经钙离子络合剂BAPTA-AM干预后,细胞内LC3荧光强度进一步增强。Westren blot结果显示,顺铂组LC3灰度值(0.039±0.000)小于顺铂联合BAPTA-AM组(0.071±0.001),TG组(0.035±0.001)小于TG联合BAPTA-AM组(0.065±0.001),差异有统计学意义(P=0.000)。结论:顺铂诱导SKOV3细胞内质网应激和自噬的发生,并伴随着细胞质内Ca^(2+)浓度的上升。络合细胞质内Ca^(2+)能增强顺铂诱导的自噬反应。 展开更多
关键词 顺铂 CA^2+ 内质网应激 自噬
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