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姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞iNOS表达的抑制及抗氧化作用 被引量：25
1
作者 杨开艳 顾建兰 +1 位作者 殷冬梅 沈勤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期938-945,共8页
用姜黄素预处理小胶质细胞株BV,1h后加用脂多糖(200ng/ml)进行刺激,通过MTT检测细胞活性;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western印迹、免疫细胞化学染色检测细胞活化后形态及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达;瞬... 用姜黄素预处理小胶质细胞株BV,1h后加用脂多糖(200ng/ml)进行刺激,通过MTT检测细胞活性;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western印迹、免疫细胞化学染色检测细胞活化后形态及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达;瞬时转染和荧光素酶报告基因鉴定iNOS和NF-κB基因表达活性;SOD和GSH-Px检测姜黄素的抗氧化能力.结果证明,脂多糖可促使小胶质细胞活化,使iNOS和NF-κB基因表达活性显著增强;iNOS蛋白表达明显上调,NO释放增多;细胞内SOD和GSH-Px活性明显下降.而姜黄素(10μmol/L)可以显著抑制活化后小胶质细胞NO的产生、iNOS蛋白的表达及iNOS-Luc、NF-κB-Luc的表达活性,其机制可能通过NF-κB的信号转导途径抑制iNOS的表达.姜黄素可通过提高细胞内SOD和GSH-Px的活性发挥抗氧化作用. 展开更多
关键词 小胶质细胞 姜黄素 诱导型一氧化氮合酶 氧化应激
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海马中56 kD蛋白诱导人神经干细胞向神经元分化的作用 被引量：11
2
作者 金国华 陈蓉 +4 位作者 田美玲 秦建兵 谭雪锋 朱蕙霞 徐慧君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期389-393,共5页
在已证明切割海马伞海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移作用的基础上,进一步探讨其诱导神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用。取切割SD大鼠海马伞后14d及正常海马组织的匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native... 在已证明切割海马伞海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞迁移作用的基础上,进一步探讨其诱导神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用。取切割SD大鼠海马伞后14d及正常海马组织的匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d和正常海马56kD差异蛋白的胶条及空白对照胶条共培养,在倒置显微镜下观察神经干细胞球中细胞的迁移和分化情况,于第21d分别应用MAP-2免疫荧光和AChE组织化学方法检测人神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的情况,并进行神经元的计数、细胞面积、细胞周长的图像处理和统计学分析。结果显示,分化的MAP-2阳性神经元的数量、细胞面积及细胞周长三项指标切割组最好,正常组次之,而空白对照组最差;三组AChE组织化学染色均为阴性结果。上述结果提示切割海马伞后海马中差异表达的56kD蛋白具有诱导神经干细胞向MAP-2阳性神经元分化的作用,但不能诱导神经干细胞向AChE阳性神经元分化。 展开更多
关键词 56 kD蛋白 人神经干细胞 分化 神经元 海马
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O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达的抑制对tau蛋白磷酸化作用的影响 被引量：7
3
作者 杨江勇 顾建兰 +2 位作者 施建华 刘飞 沈勤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期346-352,共7页
研究HEK293T细胞中O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达抑制对与AD密切相关的tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响.以OGT基因为靶点设计三段siRNA(OGT-siRNA1～3),用脂质体的方法转染OGT-siRNA1～3进入HEK293T细胞,通过RT-PCR检测OGT-siRNA1～... 研究HEK293T细胞中O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因表达抑制对与AD密切相关的tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响.以OGT基因为靶点设计三段siRNA(OGT-siRNA1～3),用脂质体的方法转染OGT-siRNA1～3进入HEK293T细胞,通过RT-PCR检测OGT-siRNA1～3对OGT mRNA的抑制.将pEGFP/OGT与OGT-siRNA1～3共转染HEK293T细胞,24h后在倒置荧光显微镜下观察各组GFP/OGT的表达,根据GFP/OGT的表达量来评价OGT-siRNA1～3对OGT基因表达的抑制率.将筛选出的具有最佳沉默效果的OGT-siRNA与质粒pCI/tau441共转染HEK293T细胞,48h后Western blot检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化.OGT-siRNA3在100nmol/L的终浓度时对OGT基因的抑制效率最高.与Mock组相比,对OGT基因mRNA及蛋白质水平的抑制率分别可达80.0%与51.3%左右.OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高,证实tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在AD的发生发展中起关键作用. 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 TAU蛋白 O-GlcNAc糖基转移酶 RNA干扰
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海马中56kD蛋白诱导人神经干细胞迁移的作用 被引量：13
4
作者 陈蓉 金国华 +4 位作者 田美玲 朱蕙霞 秦建兵 谭雪锋 徐慧君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期372-376,共5页
为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)。将用无血... 为了探讨切割海马伞后的海马和正常海马在蛋白表达方面的差异,获取海马中具有生物活性的特异蛋白,并观察其对人胚神经干细胞迁移的影响,取切割SD大鼠海马伞后10、14、20d及正常海马进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)。将用无血清培养技术获取的人胚神经干细胞球分别与切割海马伞后14d海马和正常海马的56kD差异蛋白胶条及空白对照胶条共培养,观察神经干细胞球中神经干细胞迁移情况,第3d时计数朝胶条方向1/4扇区内的迁出细胞数。结果显示,切割后各天组和正常组比较见多条差异蛋白条带,其中56kD差异蛋白的密度积分正常组最低,10d组和20d组较高,14d组最高。神经干细胞球中向56kD差异蛋白胶条方向迁移的细胞数在切割组最多,正常组次之,对照组最少。提示切割海马伞后的海马与正常海马间存在多种差异蛋白,其中56kD蛋白在切割海马伞后14d表达量最高,并具有诱导神经干细胞迁移的作用。 展开更多
关键词 海马 56kD蛋白 人神经干细胞 细胞迁移 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 诱导作用
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NOV蛋白在切割海马伞大鼠海马中表达的变化 被引量：4
5
作者 秦建兵 朱蕙霞 +3 位作者 王磊 谭雪锋 田美玲 金国华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期624-628,共5页
通过切割右侧海马伞制备大鼠海马伞损伤模型,应用Westernblotting、免疫组织化学技术,观察切割海马伞后不同时程海马中肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白表达的变化,并对结果进行图像处理和统计学分析。Westernblotting结果显示,NOV蛋白... 通过切割右侧海马伞制备大鼠海马伞损伤模型,应用Westernblotting、免疫组织化学技术,观察切割海马伞后不同时程海马中肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白表达的变化,并对结果进行图像处理和统计学分析。Westernblotting结果显示,NOV蛋白在切割海马伞后3d表达开始上升,14d达高峰后缓慢下降。切割海马伞后14d切割侧和正常侧相比较,海马CA1-CA3区的锥体细胞层及齿状回颗粒层NOV阳性细胞数目无显著性差异(P>0.05),但切割侧NOV阳性细胞明显比正常侧深染,两侧比较平均灰度值有显著性差异(P<0.01)。结合本课题组以往的工作,本研究结果提示,切割海马伞后海马中高表达的NOV蛋白可能参与了诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的过程。 展开更多
关键词 肾母细胞瘤过度表达基因蛋白 蛋白质印迹 免疫组化 切割海马伞 海马 大田
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Brn-4在大鼠海马神经干细胞向神经元分化中的作用 被引量：2
6
作者 施金洪 田美玲 +4 位作者 朱蕙霞 秦建兵 谭雪锋 王磊 金国华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期431-435,共5页
为探讨Brn-4在海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备切割海马伞侧和正常侧海马提取液,将鼠胚海马神经干细胞球分成3组:(1)切割组加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(2)正常组加入含正... 为探讨Brn-4在海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备切割海马伞侧和正常侧海马提取液,将鼠胚海马神经干细胞球分成3组:(1)切割组加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(2)正常组加入含正常侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(3)对照组加入单纯的DMEM/F12无血清培养基。培养后第14d行Brn-4/MAP-2免疫荧光双标染色。在荧光显微镜下分别计数每个视野下Brn-4单标神经元和Brn-4/MAP-2双标神经元的数量,并测量双标神经元的胞体面积、细胞周长以及Brn-4的免疫荧光强度。用图像处理系统和Stata7.0软件对所得数据进行统计学分析。结果显示:Brn-4/MAP-2双标神经元数在切割组中较多、胞体较大、突起较丰富,且Brn-4的免疫荧光亦较强;正常组次之,对照组最差。上述数据经组间比较分析,3组间差异有显著性意义(P<0.01)。本研究结果提示Brn-4在海马神经干细胞向神经元分化过程中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 Brn-4 海马 神经干细胞 分化 神经元
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PD模型大鼠黑质中Nurr1和TH的表达变化及其意义 被引量：2
7
作者 谭雪锋 金国华 +4 位作者 刘娟 秦建兵 田美玲 李浩明 朱蕙霞 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期16-20,共5页
为探讨孤儿核受体(Nurr1)在多巴胺能神经元损伤修复过程中对特异性表型酪氨酸羟化酶(TH)的影响,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤大鼠一侧前脑内侧束(MFB)制备单侧帕金森病(PD)模型,分别应用Western blot和免疫组织化学技术观察不同时... 为探讨孤儿核受体(Nurr1)在多巴胺能神经元损伤修复过程中对特异性表型酪氨酸羟化酶(TH)的影响,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤大鼠一侧前脑内侧束(MFB)制备单侧帕金森病(PD)模型,分别应用Western blot和免疫组织化学技术观察不同时间点中脑黑质中Nurr1、TH蛋白表达的变化及其相关性。结果显示,Nurr1蛋白表达在术后1d损伤侧黑质中即明显下降,7d后开始逐渐上升,14d接近正常水平,28d明显升高;TH蛋白表达在术后1d损伤侧黑质中无明显变化,7d开始下降,14d达最低,28d开始上升。上述结果提示,在6-OHDA损伤黑质-纹状体通路后,Nurr1的表达先下降后上升,其表达变化早于TH,可能在PD模型大鼠的损伤修复中发挥重要作用。 展开更多
关键词 帕金森病 黑质 孤儿核受体 酪氨酸羟化酶 大鼠
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番茄NAC家族基因的鉴定及其功能预测 被引量：2
8
作者 张亚莉 张铖 +2 位作者 陈晓旭 刘爱香 孙利军 《安徽农业科学》 CAS 2014年第20期6549-6552,6561,共5页
利用生物信息学方法对番茄NAC转录因子家族成员、序列、保守区、分子量、等电点等基本信息进行分析,结果显示,番茄NAC家族包含101个蛋白质,分为12亚族(I^XII)。功能预测显示,20个NAC基因可能与植物抗逆相关,8个NAC基因可能与植物所参与... 利用生物信息学方法对番茄NAC转录因子家族成员、序列、保守区、分子量、等电点等基本信息进行分析,结果显示,番茄NAC家族包含101个蛋白质,分为12亚族(I^XII)。功能预测显示,20个NAC基因可能与植物抗逆相关,8个NAC基因可能与植物所参与的渗透胁迫和衰老有关,24个NAC基因可能与发育相关。该研究为番茄NAC转录因子家族基因功能分析提供信息基础,从而对番茄品种的改良提供候选基因。 展开更多
关键词 番茄 NAC转录因子 功能预测
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微管相关蛋白tau在动物死亡后被快速去磷酸化 被引量：1
9
作者 殷冬梅 施建华 +3 位作者 顾建兰 沈勤 龚成新 刘飞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1150-1155,共6页
tau蛋白是神经细胞中主要的微管相关蛋白,它的异常过度磷酸化被认为是阿尔茨海默病(AD)致病过程中的关键因素.由于法律、社会、家庭等诸多因素使得获取的人脑组织标本常常在死亡后2￣3h以上,因此了解死亡不同时间后tau蛋白磷酸化的改变... tau蛋白是神经细胞中主要的微管相关蛋白,它的异常过度磷酸化被认为是阿尔茨海默病(AD)致病过程中的关键因素.由于法律、社会、家庭等诸多因素使得获取的人脑组织标本常常在死亡后2￣3h以上,因此了解死亡不同时间后tau蛋白磷酸化的改变,对研究tau蛋白的功能及在AD致病过程中作用显得十分重要.用位点特异的、磷酸化依赖的抗tau蛋白抗体检测正常大鼠脑中tau蛋白磷酸化程度及死亡后其磷酸化的变化情况,再用非同位素的点印迹技术测定鼠脑中tau蛋白激酶、磷酸酶在不同温度下的活性.结果发现,正常鼠脑中tau蛋白除了Ser262,Ser409,Ser422外,在Thr181,Ser199,Ser202,Thr205,Thr212,Ser214,Thr217,Ser396和Ser404存在不同程度的磷酸化,并且在死亡后3h,出现tau的多位点的去磷酸化及tau蛋白迁移加快,6h后更为明显,但tau蛋白水平即使在大鼠死亡后6h,仍未见有明显的改变.用点印迹测定蛋白激酶和磷酸酶活性结果显示,tau蛋白激酶、磷酸酶活性均有温度依赖性降低,在25℃时激酶活性降低远大于磷酸酶活性的降低,tau蛋白在死亡后的快速去磷酸化与相对高的磷酸酶作用有关. 展开更多
关键词 TAU 蛋白质磷酸化 动物尸检时间 阿尔茨海默病
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大麦麦芽品质表型效应的关联因子分析 被引量：3
10
作者 平军娇 王大忠 +2 位作者 罗素元 翟旭光 钱刚 《中国种业》 2010年第8期48-51,共4页
采用碘量法和密度瓶法分别测定103份贵州地方栽培大麦的糖化力和麦芽无水浸出率,并分析糖化力与无水浸出率之间相关性,以及受资源产地、棱型的影响。结果表明,参试大麦材料的糖化力（68.12-297.37WK°）和无水浸出率（29.56%-78.50... 采用碘量法和密度瓶法分别测定103份贵州地方栽培大麦的糖化力和麦芽无水浸出率,并分析糖化力与无水浸出率之间相关性,以及受资源产地、棱型的影响。结果表明,参试大麦材料的糖化力（68.12-297.37WK°）和无水浸出率（29.56%-78.50%）表现出性状分布的多态性,其中2份大麦资源麦芽品质符合国家啤酒大麦生产的行业标准。相关性分析结果发现,糖化力与无水浸出率之间成不显著负相关（r=-0.127）,意味着从大样本量材料中分别检测糖化力和无水浸出率才可能筛选到适宜的啤酒大麦种质资源;本研究也提示选育四棱和六棱啤酒大麦可成为丰富国内啤酒大麦种质资源遗传多样性的重要途径,稳定优质啤酒大麦资源遗传力是保持最佳啤酒麦芽品质的重要育种环节。 展开更多
关键词 大麦 麦芽品质 糖化力 麦芽浸出率
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