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瘢痕疙瘩的差异表达基因谱研究 被引量:14
1
作者 胡振富 高建华 +2 位作者 李薇 宋艳斌 李朝龙 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期308-312,共5页
目的应用基因芯片技术筛选瘢痕疙瘩组织的差异表达基因,探讨异常瘢痕发生的分子机制。方法应用含有8064个人类靶基因的表达谱芯片,检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中基因的差异表达变化,筛选出差异表达基因,应用RT-PCR验证芯片结果;建立与... 目的应用基因芯片技术筛选瘢痕疙瘩组织的差异表达基因,探讨异常瘢痕发生的分子机制。方法应用含有8064个人类靶基因的表达谱芯片,检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中基因的差异表达变化,筛选出差异表达基因,应用RT-PCR验证芯片结果;建立与瘢痕疙瘩形成相关的基因表达谱并进行生物信息学分析。结果与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织中发生显著性差异表达变化的基因有277个,其中上调163个、下调114个,涉及到各种信号传递及基因调控的改变。RT-PCR检测结果与芯片结果呈一致性趋势。结论创面过度愈合形成瘢痕疙瘩是一个复杂的病理生理过程,受多种基因表达调控;差异表达基因谱的建立和研究较全面反映了瘢痕疙瘩发生的分子生物学概貌,有助于认识异常瘢痕形成的机制。 展开更多
关键词 瘢痕 皮肤 基因表达 基因芯片
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乙型脑炎病毒寡核苷酸基因芯片研究 被引量:9
2
作者 张海燕 马文丽 +4 位作者 李凌 吴清华 徐秋林 温颖 郑文岭 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1244-1247,共4页
目的:制备检测乙型脑炎病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片。方法:应用生物信息学软件设计60-meroligo探针用于制备基因芯片,乙型脑炎病毒(JEV)基因片段经限制性显示技术扩增标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果:... 目的:制备检测乙型脑炎病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片。方法:应用生物信息学软件设计60-meroligo探针用于制备基因芯片,乙型脑炎病毒(JEV)基因片段经限制性显示技术扩增标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果:大部分oligo探针都能特异性与相应样品杂交,呈现阳性荧光信号,而阴性对照和空白对照则基本不能检测到荧光信号。结论:实验中建立的oligo基因芯片检测病原体方法可行,具有应用于临床诊断的前景。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 寡核苷酸基因芯片 限制性显示技术 基因芯片检测 生物信息学 软件设计 基因片段 数据分析 空白对照 阴性对照 临床诊断 光信号 特异性 病原体 制备 探针 杂交
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酪氨酸酶抑制剂的研究进展 被引量:27
3
作者 丁大鹏 马文丽 郑文岭 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1364-1366,共3页
关键词 酪氨酸酶抑制剂 色素沉着性皮肤病 合成反应 皮肤黑色素 生物合成 哺乳动物 选择应用 祛斑增白 作用机制 研究前景 关键性 限速酶 黄褐斑 化妆品 分类学
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RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究 被引量:5
4
作者 岳枫 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 石嵘 张宝 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期647-650,共4页
目的运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果转... 目的运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNAI siRNA 基因 myc 逆转录聚合酶链反应 K562细胞
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DNA测序中常见影响因素的研究 被引量:5
5
作者 宋艳斌 马文丽 郑文岭 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期44-46,共3页
对测序中的模板、引物、测序反应条件及测序反应纯化方法和仪器操作等进行研究。结果显示测序模板的纯度影响测序的质量 ,浓度对测序的长度有影响。引物设计时除符合一般设计原则外 ,Tm值最好在5 0℃~ 6 0℃之间 ,且无成串的G、C。改... 对测序中的模板、引物、测序反应条件及测序反应纯化方法和仪器操作等进行研究。结果显示测序模板的纯度影响测序的质量 ,浓度对测序的长度有影响。引物设计时除符合一般设计原则外 ,Tm值最好在5 0℃~ 6 0℃之间 ,且无成串的G、C。改变变性、退火、延伸的时间和温度对特殊DNA模板的序列测定有较好的效果。测序反应产物的纯化有几种方法 ,以 70 %乙醇沉淀法最经济、方便。因此模板的纯度和浓度对测序成功与否起决定作用。最佳反应条件可降低成本 ,提高测序成功率 ,乙醇沉淀法是首选的测序反应产物纯化方法。仪器操作熟练、正确与否也会影响测序结果。 展开更多
关键词 DNA测序 常见 乙醇沉淀法 影响 改变 成功率 序列测定 浓度 纯度 引物
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N-ras基因在K562细胞中的表达研究 被引量:1
6
作者 燕翔 马文丽 +2 位作者 宋艳斌 张宝 郑文岭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期245-246,共2页
目的 探讨N- ras基因突变及表达水平与慢性粒细胞白血病发病的关系。方法 以慢粒细胞株K562细胞为研究对 象,采用RT- PCR和直接测序的方法对N- ras的表达水平及突变进行检测。结果 RT- PCR结果示N- ras基因在K562细胞中表达升 高,直... 目的 探讨N- ras基因突变及表达水平与慢性粒细胞白血病发病的关系。方法 以慢粒细胞株K562细胞为研究对 象,采用RT- PCR和直接测序的方法对N- ras的表达水平及突变进行检测。结果 RT- PCR结果示N- ras基因在K562细胞中表达升 高,直接测序结果表明N- ras基因在K562细胞中不存在突变。结论 N- ras基因在K562细胞中高表达,而其高表达机制与突变无 关。 展开更多
关键词 基因 ras K562细胞 逆转录聚合酶链反应 序列分析 DNA
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感染组学(infectomics)——对感染性疾病的总体性和综合性研究 被引量:1
7
作者 黄胜和 徐钤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期304-309,共6页
在感染性疾病的范畴内,目前急需一个能有效地、精确地和综合性地研究微生物感染的结构性和功能性基因组学和蛋白质组学(感染组学) 的全面方法. 新的方法(如DNA和蛋白质微阵列) 和传统方法(如分子克隆、PCR、基因敲除,加进(knockin) 和... 在感染性疾病的范畴内,目前急需一个能有效地、精确地和综合性地研究微生物感染的结构性和功能性基因组学和蛋白质组学(感染组学) 的全面方法. 新的方法(如DNA和蛋白质微阵列) 和传统方法(如分子克隆、PCR、基因敲除,加进(knockin) 和反义术等) 的结合将有助于克服今天的困难. 在感染时,微生物及其宿主的全部表型改变(感染组) 均由微生物病原体及其宿主的基因组所编码,并在特异的微生物-宿主相互作用时的某些环境条件下表达. 微生物及其宿主的全部药物反应(药理组) 可用基因组或蛋白质组的方法检出. 分析基因型和表型或表达形式的全基因组方法将最终导致对微生物的发病机理、感染性疾病的快速诊断和控制感染的新策略的全面研究. 感染性疾病中最基本的问题是,如何全面地和综合性地应用感染组学,来了解微生物病原体及其宿主的相互作用. 展开更多
关键词 感染性疾病 综合性研究 总体 蛋白质微阵列 相互作用 蛋白质组学 微生物感染 分子克隆 传统方法 基因组学 基因敲除 发病机理 表达形式 药物反应 环境条件 快速诊断 病原体 宿主 DNA 功能性 结构性 PCR 全基因 基因型 表型
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绿色荧光蛋白基因在脂肪细胞分化研究中的应用 被引量:1
8
作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 毛向明 李凌 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第9期1119-1123,共5页
目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型,为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因启动子,将该启动子插入真... 目的建立人脂肪细胞分化的绿色荧光蛋白活体检测动态模型,为进一步进行脂肪细胞分化及其相关基因表达研究奠定基础。方法用PCR法从培养的人前脂肪细胞总DNA中扩增出过氧化物体酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)基因启动子,将该启动子插入真核细胞表达载体pEGFP-1后转染3T3成纤维细胞及人前脂肪细胞,并诱导脂肪细胞分化。结果在胰岛素、地塞米松及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导下,人前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞时表达绿色荧光蛋白基因,而3T3细胞则不能诱导为脂肪细胞及表达绿色荧光蛋白基因。结论脂肪组织特异表达的PPARγ2基因启动子与绿色荧光蛋白基因构成的重组基因转化人前脂肪细胞后,能够用来动态活体检测脂肪细胞分化状态。这一模型的建立为脂肪细胞分化调控的分子机制研究提供一个更加方便的检测途径。 展开更多
关键词 脂肪细胞分化 绿色荧光蛋白基因 过氧化物体酶增殖物激活受体γ2基因启动子
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基于神经网络集成的蛋白质二级结构预测模型研究
9
作者 刘军 马文丽 +1 位作者 姚文娟 郑文岭 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12884-12886,共3页
[目的]探讨基于CPN神经网络集成的蛋白质二级结构预测模型的效果。[方法]借助神经网络集成方法对从36个蛋白质提取的共4 000个氨基酸进行预测研究,其数据集是从HSSP数据库中提取的数据经过处理后得到的评测数据库,同时在Profile编码中... [目的]探讨基于CPN神经网络集成的蛋白质二级结构预测模型的效果。[方法]借助神经网络集成方法对从36个蛋白质提取的共4 000个氨基酸进行预测研究,其数据集是从HSSP数据库中提取的数据经过处理后得到的评测数据库,同时在Profile编码中引进了CPN网络算法的概念。[结果]基于CNP网络的神经网络集成预测模型可以取得很好的预测结果,把蛋白质二级结构预测的平均精度提高了17.74%。同时,所用的Profile编码和CPN网络算法在很大程度上为系统模型引入较多的生物信息和联系,而这一点对蛋白质二级结构预测非常重要。[结论]该研究为蛋白质二级结构预测准确率的提高奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白质二级结构 CPN 神经网络集成
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cyclin E基因siRNA抑制K562细胞生长的研究 被引量:4
10
作者 宋海星 马文丽 +2 位作者 宋艳斌 张宝 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期361-365,共5页
目的应用RNAi技术,研究cyclinE基因小干扰RNA(siRNA)对K562细胞生长的抑制作用。方法针对cyclinEmRNA设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,以LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,分别设置为... 目的应用RNAi技术,研究cyclinE基因小干扰RNA(siRNA)对K562细胞生长的抑制作用。方法针对cyclinEmRNA设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,以LipofectamineTM2000脂质体法转染K562细胞,分别设置为干扰组、阴性对照组以及空白对照组,转染48h后进行细胞计数、RT-PCR及通过PI染色进行流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果干扰组与阴性对照组和空白对照组相比,活细胞计数减少约80%,G1期细胞百分比增高30%,细胞基本停止增殖。干扰组cyclinEmRNA表达明显减弱,相对阴性对照组及空白对照组,干扰组mRNA表达下降70%。阴性对照组与空白对照组无显著性差异。结论应用RNAi技术可以有效地干扰cyclinE基因的表达,并进一步抑制细胞的生长,但对于干扰的长期有效性尚无实验结论,需通过长效表达载体实验验证。 展开更多
关键词 RNA干扰 CYCLIN E 小干扰RNA K562细胞
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基于GPRS远程医疗系统的移动终端设计与实现 被引量:16
11
作者 刘军 马文丽 +1 位作者 姚文娟 郑文岭 《计算机应用与软件》 CSCD 2010年第3期9-12,共4页
远程医疗是基于生物医疗、计算机科学、通信技术等多学科,将无线数据传输、计算机软硬件技术等密切结合的高新技术。介绍远程医疗系统的组成及其工作原理,设计基于ARM芯片S3C2410和MC55无线模块的远程医疗系统的移动终端,该终端以ARM芯... 远程医疗是基于生物医疗、计算机科学、通信技术等多学科,将无线数据传输、计算机软硬件技术等密切结合的高新技术。介绍远程医疗系统的组成及其工作原理,设计基于ARM芯片S3C2410和MC55无线模块的远程医疗系统的移动终端,该终端以ARM芯片为控制器,以通用无线分组业务GPRS(General Packet Radio Service)无线网络和Internet网络为通道,实现远程生理数据的传输。该终端具有强大的数据采集和处理功能。实验结果表明,该移动终端通信可靠、实时性好。 展开更多
关键词 远程医疗 GPRS S3C2410 MC55 WINCE.NET
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PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA 被引量:8
12
作者 刘欣 刘国炳 +4 位作者 庞战军 邢福祺 郭遂群 马文丽 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期201-203,共3页
目的探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见... 目的探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。结论PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法,并可检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。 展开更多
关键词 人类乳头瘤病毒 聚合酶链反应 测序分析 宫颈癌
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人乳头瘤病毒分型长链寡核苷酸芯片的制备 被引量:3
13
作者 危敏 马文丽 +3 位作者 张宝 李凌 孙朝晖 郑文岭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期120-123,共4页
目的制备用于人乳头瘤病毒(HPV)初步检测和分型的长链寡核苷酸基因芯片。方法对4型HPV(6,11,16,18)全基因组序列进行分析,设计特异性高、熔解温度(Tm)和GC含量相近的HPV型特异性长链寡核苷酸探针,点样制备成寡核苷酸基因芯片,利用限制... 目的制备用于人乳头瘤病毒(HPV)初步检测和分型的长链寡核苷酸基因芯片。方法对4型HPV(6,11,16,18)全基因组序列进行分析,设计特异性高、熔解温度(Tm)和GC含量相近的HPV型特异性长链寡核苷酸探针,点样制备成寡核苷酸基因芯片,利用限制性显示技术对HPV样品进行荧光标记,并将标记好的样品与芯片杂交,以了解寡核苷酸基因芯片在HPV病毒检测和分型中的作用。结果荧光标记的HPV样品与多个型特异性HPV探针杂交有明显的荧光信号,可以根据杂交结果进行初步的分型检测。结论采用设计合理的60mer寡核苷酸基因芯片可以从基因水平实现对HPV的检测和分型。 展开更多
关键词 乳头瘤状病毒 寡核苷酸序列分析 检测
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应用限制性显示技术筛选K562细胞脱核前后差异表达基因 被引量:2
14
作者 危敏 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 毛向明 李凌 郑文岭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期162-165,共4页
目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制。方法用CB(终浓度为10 μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞... 目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制。方法用CB(终浓度为10 μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选CB处理前后差异表达的基因。对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在GenBank检索进行序列同源性分析。结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(AQP1)基因经反转录PCR验证在CB诱导脱核的 K562细胞中表达上调。结论 AQP 1基因在CB诱导K562细胞脱核过程中特异性高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关。 展开更多
关键词 限制性显示PCR K562细胞 细胞松弛素B 水通道蛋白1 差异表达
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IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用 被引量:2
15
作者 齐宗利 张宝 +2 位作者 韩西群 朱梅刚 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1964-1967,共4页
目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、... 目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物。另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物。通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况。以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照。结果IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgHFR3区和IgHFR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%。以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性。结论IgH不同区域引物比较,FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区。FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率。 展开更多
关键词 免疫球蛋白重链 基因重排 B细胞淋巴瘤 聚合酶链反应 石蜡组织
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一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U_2联合标记法 被引量:5
16
作者 徐秋林 马文丽 +2 位作者 李凌 石嵘 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期289-292,共4页
目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss1... 目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。 展开更多
关键词 流感病毒 检测RD技术 基因芯片
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EBV全基因组芯片的制备及应用 被引量:2
17
作者 方唯意 郑文岭 +3 位作者 马文丽 刘真 李欣 姚开泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1812-1815,共4页
目的鼻咽癌高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒(EBV)关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EBV已知和预测的编码基因作为cDNA探针,构建EBV芯片,用于检测鼻咽癌组织中的EBV基因表达。方法85个EBV基因探针通过一... 目的鼻咽癌高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒(EBV)关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EBV已知和预测的编码基因作为cDNA探针,构建EBV芯片,用于检测鼻咽癌组织中的EBV基因表达。方法85个EBV基因探针通过一对设计于T/A克隆载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,与8000个人基因打印到同一张玻片上,建立EBV与人基因的检测芯片,随后用于检测鼻咽癌组织与正常鼻咽组织之间的基因表达差异,观测检测效果,以确定是否可以临床应用。结果在人的基因表达谱中,我们成功检测了大量的人基因表达。而在EBV阵列中,我们虽然得到了一些EBV基因表达的信号,但这些信号都非常微弱,没有明显可见的荧光,其表达强度无法与人的基因表达信号强度相比。结论虽然我们成功地构建了EBV芯片,但由于可能受到基因芯片检测的敏感性以及EBV基因在鼻咽癌中表达量的限制,不能用于临床检测,需要进一步改进研究方法。 展开更多
关键词 鼻咽癌 EBV芯片 人基因表达谱
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人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2
18
作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 毛向明 李凌 宋艳斌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期395-398,共4页
目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克... 目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 肥胖症 肥胖基因 反转录PCR 基因表达 瘦素蛋白
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两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较 被引量:2
19
作者 吴清华 马文丽 +4 位作者 王洪敏 毛向明 张宝 李凌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期794-798,共5页
目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺... 目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。 展开更多
关键词 基因芯片 氨基修饰 表而化学 Λ噬菌体
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利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ 被引量:1
20
作者 姜耀东 郑少斌 +3 位作者 谭万龙 赵善超 任非 张宝 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期307-309,共3页
目的利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ。方法采用PCR法从原有质粒中扩增G250/MN/CAⅨ全长编码序列,将获得的编码序列片段插入pET32a(+)表达载体,转化Rosseta大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,而后进行纯化及Westernblot鉴定。... 目的利用原核表达系统制备肾癌相关抗原G250/MN/CA Ⅸ。方法采用PCR法从原有质粒中扩增G250/MN/CAⅨ全长编码序列,将获得的编码序列片段插入pET32a(+)表达载体,转化Rosseta大肠杆菌,IPTG诱导蛋白表达,而后进行纯化及Westernblot鉴定。结果正确构建pET32a(+)/G250重组质粒,重组质粒转化Rosseta菌后,经IPTG诱导,在58000相对分子质量处有明确的条带。目的蛋白表达占菌体总蛋白的32.7%。89.9%的重组蛋白是可溶性的。Westernblot结果显示纯化后的蛋白可以与G250单克隆抗体M75特异性结合。结论在原核系统中成功进行G250/MN/CA Ⅸ的高效表达,为下一步的单克隆抗体制备和蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肾肿瘤 G250/MN/CA Ⅸ抗原 克隆 原核表达载体
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