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CRMP-1真核表达载体的构建及其突起生长抑制作用 被引量：3
1
作者 郭国庆 辛莉 +2 位作者 邱小忠 沈伟哉 原林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期297-304,共8页
为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行... 为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行观察.结果显示,NGF诱导的PC12细胞具有典型的神经元形态特征,脂质体转染技术可成功地把CRMP-1基因导入细胞.过表达CRMP-1可明显抑制突起生长,促进突起坍塌,首先是细小突起缩短,然后是长突起,细胞突起的长度随CRMP-1蛋白表达时间延长呈逐渐缩短的趋势.突起提取液的测定显示,CRMP-1过表达的细胞较NGF诱导的和转染空载体的细胞突起明显减少(P<0.01).说明CRMP-1具有明显的突起生长抑制作用. 展开更多
关键词 坍塌反应调节蛋白 神经元 突起 生长 基因转染 基因表达
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miRNA 520h影响神经胶质瘤发生的初步研究 被引量：2
2
作者 邱小忠 胡晓芳 +2 位作者 王乐禹 余磊 陆云涛 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期133-137,共5页
目的:综合分析胶质瘤标本中基因的表达,体外生物学作用的检测及对临床病例预后的长期随访,评价胶质瘤中miR-520h的生物学作用及其与NF-κB通路的关系。方法:选取46例II到IV级胶质瘤标本,常规RT-PCR检测前体microRNA(pri-miR-520h)的表达... 目的:综合分析胶质瘤标本中基因的表达,体外生物学作用的检测及对临床病例预后的长期随访,评价胶质瘤中miR-520h的生物学作用及其与NF-κB通路的关系。方法:选取46例II到IV级胶质瘤标本,常规RT-PCR检测前体microRNA(pri-miR-520h)的表达,免疫组织化学方法评估Ki-67指数;对46例患者的预后进行KPS评分及肿瘤复发与相关死亡率监测;用520h抑制剂转染U251胶质瘤细胞后缺氧培养,Western blotting检测p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平。结果:miR-520h的RT-PCR分析及免疫组织化学结果显示,表达前体miR-520h(Pri(+))的病例Ki-67阳性率较低,而表达成熟miR-520h的病例Ki-67阳性率增加;长期随访结果显示,Pri(+)病例的KPS评分比Pri(-)病例显著增高;此外,高表达前体miR-520h(Pri(+))的病例预后较好,肿瘤复发和相关死亡率较低,说明pri-miR-520h(+)病例预后较好;Western blotting显示浓度为200 nmol/L的has-miR-520h抑制剂在缺氧条件下,促进U251胶质瘤细胞中p-NF-κB/p65的表达。结论:miR-520h在胶质瘤的发生中具有重要的作用,成熟miR-520h作为原癌miR,能诱导胶质瘤细胞的发生。 展开更多
关键词 胶质瘤 微RNA 核转录因子 人神经胶质瘤细胞
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携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建 被引量：2
3
作者 张黎声 邱小忠 +4 位作者 余磊 秦建强 陆云涛 杨俊 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期276-277,共2页
目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具。方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和... 目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具。方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;并通过细胞转染技术将Id2基因导入L6成肌细胞中。结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2cDNA片段,获取了转染外源性Id2基因的L6细胞。结论:我们成功构建了同时携带有G418筛选位点和增强绿色荧光蛋白的Id2真核表达载体。 展开更多
关键词 分化抑制因子2 构建 真核表达载体
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周期性机械拉伸对C2C12成肌细胞增殖的影响 被引量：9
4
作者 邱小忠 李小娜 +5 位作者 陈维毅 余磊 廖华 焦培峰 赖桂华 欧阳钧 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2006年第2期183-185,共3页
目的:探讨不同的周期性拉伸应变条件对C2C12成肌细胞增殖的影响。方法:周期性拉伸的各种力学条件通过BioFlex加载系统实现,采用应用流式细胞术和BrdU法对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行分析,反映成肌细胞增殖情况。结果:不同的周... 目的:探讨不同的周期性拉伸应变条件对C2C12成肌细胞增殖的影响。方法:周期性拉伸的各种力学条件通过BioFlex加载系统实现,采用应用流式细胞术和BrdU法对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行分析,反映成肌细胞增殖情况。结果:不同的周期性机械拉伸条件影响C2C12细胞的增殖,拉伸的频率对C2C12细胞增殖有较大的影响。在0.5Hz拉伸频率下,2.5%、5%和10%的细胞变形幅度都不能促进细胞的增殖,其中10%(0.5Hz)的拉伸幅度抑制C2C12成肌细胞的增殖;而在0.125Hz拉伸频率下,10%的细胞变形幅度明显地促进C2C12成肌细胞的增殖。结论:较低的拉伸频率有利于成肌细胞的增殖,高频率的拉伸抑制成肌细胞的增殖。 展开更多
关键词 周期性拉伸 C2C12成肌细胞 细胞增殖 流式细胞术
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不同浓度基底膜组份对雪旺细胞生长的影响 被引量：3
5
作者 武雷 罗艳芬 +2 位作者 杨俊 廖华 秦建强 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期278-280,283,共4页
目的:了解不同浓度的基底膜成分对体外培养雪旺细胞生长的影响。方法:用不同浓度的基底膜成分修饰培养板底,并设置空白对照,将纯化的雪旺氏细胞以相同数量接种至各组孔内;观察细胞生长,培养72h后以MTT法和3H-TdR掺入法检测各组细胞的增... 目的:了解不同浓度的基底膜成分对体外培养雪旺细胞生长的影响。方法:用不同浓度的基底膜成分修饰培养板底,并设置空白对照,将纯化的雪旺氏细胞以相同数量接种至各组孔内;观察细胞生长,培养72h后以MTT法和3H-TdR掺入法检测各组细胞的增殖情况,数据进行统计学分析。结果:层粘连蛋白、纤维粘连蛋白和IV型胶原促雪旺细胞分裂增殖的最低浓度分别是:10μg/ml、10μg/ml、3μg/ml;发挥最大促进效应的浓度分别是:500 μg/ml、300 μg/ml和100μg/ml。结论:不同的基底膜组份和修饰浓度对雪旺细胞分裂增殖所发挥的作用强度不同,本实验为组织工程化神经桥接体的优化修饰提供了实验基础。 展开更多
关键词 基底膜 雪旺细胞 周围神经 组织工程
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大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶神经元的分布和超微结构特征 被引量：2
6
作者 郭国庆 山爱景 +6 位作者 沈伟哉 邱小忠 余磊 秦建强 欧阳钧 廖华 钟世镇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-4,共4页
目的观察大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布以及阳性神经元的超微结构特征。方法取健康成年SD大鼠,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元,包埋前染色方法对阳性细胞进行免疫电镜观察。结果光镜下,nNOS免疫阳性细胞呈棕... 目的观察大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布以及阳性神经元的超微结构特征。方法取健康成年SD大鼠,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元,包埋前染色方法对阳性细胞进行免疫电镜观察。结果光镜下,nNOS免疫阳性细胞呈棕褐色,胞体及突起清晰,纹状体外侧区阳性细胞较多,内侧区较少。各区内阳性细胞以中、小型细胞为主,且大多数为中型细胞,小型细胞次之,大型细胞最少。透射电镜观察nNOS阳性神经元核大,胞浆少,呈中间神经元的特征;阳性颗粒呈黑色斑块样,在胞体内,可见小的阳性物质分布于胞核周围或者细胞膜内侧均无膜样结构包裹,大的团块样阳性物质主要存在于胞浆,有清晰的单层膜样结构包裹,亦可见部分无膜样结构包裹的大的阳性物质;在树突和轴突集中的部位亦可见免疫阳性物质,但并不在突起终末的囊泡内;脑组织内微血管壁旁的免疫阳性终末较多见,其突起毗邻血管外膜。结论大鼠纹状体nNOS免疫阳性神经元以中、小型细胞为主,符合中间神经元的特征,nNOS阳性物质分布于胞质和突起,大块物质多有膜性结构包裹,小块和部分大块阳性物质以及位于轴树突内的无膜性结构包裹,这可能与其功能状态有关。 展开更多
关键词 神经元型一氧化氮合酶 纹状体 免疫细胞化学 超微结构 大鼠
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Nix和miR-520h对神经胶质瘤发生的影响及相互作用 被引量：1
7
作者 胡晓芳 王永魁 +1 位作者 邱小忠 王国保 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第5期590-594,共5页
目的通过综合分析肿瘤标本中基因和蛋白表达,及体外生物学作用的检测,来评价胶质瘤中Nix蛋白的作用以及Nix蛋白与miR-520h的关系。方法选取46例胶质瘤标本,RT-PCR检测miR-520h基因的表达,Western blotting检测Nix蛋白的表达;培养U251胶... 目的通过综合分析肿瘤标本中基因和蛋白表达,及体外生物学作用的检测,来评价胶质瘤中Nix蛋白的作用以及Nix蛋白与miR-520h的关系。方法选取46例胶质瘤标本,RT-PCR检测miR-520h基因的表达,Western blotting检测Nix蛋白的表达;培养U251胶质瘤细胞,Western blotting检测Nix蛋白的表达;构建靶向Nix基因的shRNA敲除U251细胞中Nix基因(Nix-kn),Western blotting检测Nix,IKKα,i-κBα和p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平;has-miR-520h抑制剂转染U251细胞,Western blotting检测Nix,IKKα,i-κBα和p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平。结果胶质瘤标本的基因和蛋白检测表明,miR-520h的高表达伴随着Nix蛋白的高表达;体外实验结果表明,与正常培养的U251相比,缺氧培养的U251细胞Nix表达较高;与Nix-kn组相比,Nix-wt组胶质瘤细胞Nix和p-NF-κB/p65表达均明显增高,而NF-κB活性抑制剂蛋白i-κBα表达降低;200 nmol/L的has-miR-520h抑制剂处理细胞后,与正常对照组比较,Nix蛋白表达显著减少,而p-NF-kappaB/p65蛋白表达显著增加。结论在神经胶质瘤的发生发展中miR-520h与Nix蛋白的表达相关;miR-520h可能通过促进Nix合成,从而成为一个强大的肿瘤激活剂。 展开更多
关键词 胶质瘤 Nix microRNA-520h NF-ΚB
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大鼠海马发育过程中netrin-1、nogo-A和tsp-1 mRNA的表达
8
作者 郭国庆 辛莉 +2 位作者 沈伟哉 邱小忠 钟世镇 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期546-550,共5页
目的:探讨神经元突起定向生长和突触形成过程的规律。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段胶质细胞源性netrin-1、nogo-A和tsp-1 mRNA的表达。结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合,未出现与DNA相同的杂带。内参照β-actin的PC... 目的:探讨神经元突起定向生长和突触形成过程的规律。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段胶质细胞源性netrin-1、nogo-A和tsp-1 mRNA的表达。结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合,未出现与DNA相同的杂带。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在胚胎、新生和成年时灰度较均一。netrin-1 mRNA以胎鼠和新生大鼠表达较多,成年大鼠弱表达(P<0.01)。nogo-A在各个阶段均呈高表达,以胎鼠和新生大鼠较多,其中新生大鼠表达最多(P<0.01),成鼠相对较低(P<0.01)。tsp-1以胎鼠和新生大鼠表达较多,成年大鼠表达微弱(P<0.01)。结论:大鼠海马胚胎和新生后是突起定向生长的主要阶段,抑制突起的生长则发生在发育的各个阶段,以新生后为主,突触结构和功能的发育发生在胚胎和新生后阶段。 展开更多
关键词 NETRIN NOGO-A TSP-1 海马 大鼠
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大鼠海马发育过程中突触蛋白-Ⅰ和生长相关蛋白-43mRNA的表达
9
作者 辛莉 郭国庆 +5 位作者 沈伟哉 邱小忠 余磊 欧阳钧 秦建强 钟世镇 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期172-175,183,共5页
目的:探讨大鼠海马突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA的表达,了解神经元的发育。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA量的变化。结果:RT-PCR产物电泳后在731 bp、984 bp、324 bp处出现清晰的电泳条带... 目的:探讨大鼠海马突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA的表达,了解神经元的发育。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA量的变化。结果:RT-PCR产物电泳后在731 bp、984 bp、324 bp处出现清晰的电泳条带,实际扩增长度与设计长度相吻合,未出现与DNA相同的杂带。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在孕期、新生和成年时亮度均一。突触蛋白的PCR产物电泳条带以成年大鼠表达最强,胎鼠次之,新生大鼠较弱。生长相关蛋白-43的PCR产物电泳条带以新生鼠亮度最强,胎鼠次之,成年大鼠最暗。结论:大鼠海马在新生期处在轴突生长旺盛的时期,而在胚胎期和成年期是突触形成和建立的主要阶段。 展开更多
关键词 海马 突触蛋白-I 生长相关蛋白-43 发育 大鼠
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