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艾叶精油体外抑制鸡马立克病病毒增殖的效应分析
1
作者 张苑 李明扬 +6 位作者 梁越 于向谦 王妍 陈吉一 刘海侠 连雪 钱莺娟 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5901-5911,共11页
本研究旨在探究艾叶精油(Artemisia argyi essential oil, AAEO)对鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)体外增殖的影响及潜在分子机制。通过CCK-8法测定AAEO对鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast, CEF)细胞的毒性作用,筛选A... 本研究旨在探究艾叶精油(Artemisia argyi essential oil, AAEO)对鸡马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)体外增殖的影响及潜在分子机制。通过CCK-8法测定AAEO对鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast, CEF)细胞的毒性作用,筛选AAEO的最佳作用浓度范围;根据筛选出的最佳作用浓度处理细胞收集样品。通过蚀斑分析和病毒滴度测定,检测AAEO对MDV体外增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot从分子水平上解析AAEO抑制MDV增殖的机制。结果表明,AAEO作用浓度为60~360μg·mL^(-1)对CEF无细胞毒作用。AAEO处理组的病毒蚀斑明显减小且变少,病毒滴度下降,病毒在基因水平和蛋白水平的表达上均有下降,说明AAEO可抑制MDV的复制,且具有剂量依赖性。通过对AAEO作用的细胞内信号通路筛选发现,AAEO可下调磷酸化ERK和STAT3蛋白表达水平,下调IL-6 mRNA表达水平。使用ERK抑制剂U0126处理细胞,当细胞内ERK通路被抑制时,病毒复制减少。AAEO可抑制鸡MDV体外增殖,其抗病毒作用可能与AAEO抑制IL-6/STAT3和ERK通路激活有关。艾叶精油具有较好的抗MDV活性,研究结果可为抗疱疹病毒药物的研发提供新的依据。 展开更多
关键词 马立克病病毒 艾叶精油 鸡胚成纤维细胞 体外抗病毒
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非洲猪瘟病毒减毒活疫苗研究进展
2
作者 吕家轩 于家荣 +6 位作者 左媛媛 戈胜强 郑龙三 徐天刚 李金明 钱莺娟 王志亮 《中国动物检疫》 2025年第9期49-56,63,共9页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高度传染性疾病,对全球养猪业造成了严重威胁。疫苗是解决ASF防控问题的关键,其中减毒活疫苗因免疫原性强、保护效力高而成为研究热点。... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高度传染性疾病,对全球养猪业造成了严重威胁。疫苗是解决ASF防控问题的关键,其中减毒活疫苗因免疫原性强、保护效力高而成为研究热点。本文总结了ASF减毒活疫苗研究进展,包括基于天然弱毒株、人工重组弱毒株和细胞传代致弱毒株的疫苗研发策略,分析了当前疫苗研发面临的挑战,并对未来的疫苗发展方向进行了深入思考,以期为ASF疫苗研发提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 减毒活疫苗 疫病防控 疫苗研发
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牛结节性皮肤病免疫抗体监测的Meta分析
3
作者 沈鹏 王艺 +3 位作者 任炜杰 杨永春 宋厚辉 王志亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3649-3658,共10页
疫苗接种是预防牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)的重要措施,但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐,目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计,并进行... 疫苗接种是预防牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)的重要措施,但是疫苗接种后诱导的体液免疫应答水平参差不齐,目前尚缺乏评价疫苗免疫效果的有效手段。本文使用R软件利用Meta分析对已发表的LSD免疫抗体监测结果进行统计,并进行亚组分析,综合评价免疫抗体监测的意义。通过计算机分别检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库、PubMed、Web of science等中英文数据库,检索时限截止至2023年7月,收集LSD免疫抗体监测的相关文献,根据制定的文献纳入与排除标准,共纳入符合筛选条件的文献24篇,涉及羊痘疫苗的文献共有13篇,涉及LSD疫苗的文献共有13篇,其中2篇文献同时涉及羊痘疫苗和LSD疫苗,包含8 638例样本,其中阳性样本2 782份,结局指标为免疫抗体阳性率。Meta分析结果显示,羊痘疫苗的免疫抗体水平为41%(95%CI:27%~55%),LSD疫苗的免疫抗体水平为73%(95%CI:64%~86%),各文献间的同质性较低,两种疫苗之间无显著性差异(P=0.59),与羊痘疫苗接种(P=0.12)和LSD疫苗接种(P=0.077)相关的文献均提示未存在明显发表偏移;按养殖环境和检测方法分类进行亚组分析,不同养殖环境(P=0.84)和检测方法(P=0.40)均无显著性差异,两亚组均非异质性的主要来源。本文结果提示,使用免疫抗体监测方法评价免疫效果存在较大的不确定性,在实际工作中需要综合分析研判。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 羊痘 疫苗 免疫 抗体监测 META分析
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磷酸化修饰对山豆根多糖抗Ⅰ型鸭肝炎病毒效果的影响 被引量：7
4
作者 何淼 张宝康 +6 位作者 粟灵琳 杜红旭 明珂 白景英 刘家国 王德云 武毅 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期322-330,共9页
[目的]山豆根多糖(Bush Sophora Root polysaccharide,BSRPS)具有良好的抗病毒作用,且硫酸化修饰可明显增强其抗病毒作用,但硫酸化修饰污染大,操作危险。本试验拟探究多聚磷酸盐法修饰对BSRPS抗病毒活性的影响。[方法]通过多聚磷酸盐法... [目的]山豆根多糖(Bush Sophora Root polysaccharide,BSRPS)具有良好的抗病毒作用,且硫酸化修饰可明显增强其抗病毒作用,但硫酸化修饰污染大,操作危险。本试验拟探究多聚磷酸盐法修饰对BSRPS抗病毒活性的影响。[方法]通过多聚磷酸盐法对BSRPS进行修饰,观察其理化性质并采用傅里叶红外光谱法分析其结构,通过MTT法和PCR法测定其体外抗Ⅰ型鸭肝炎病毒(duck hepatitis virusⅠ,DHAV-1)感染细胞的活性和对病毒增殖的影响,同时比较修饰前后山豆根多糖对DHAV-1感染雏鸭的保护作用。[结果]修饰后药物的理化性质变化及红外光谱结果表明,BSRPS经磷酸化修饰制备出pBSRPS,BSRPS和pBSRPS为500和15.63μg·mL-1时最大病毒抑制率分别达53.66%和57.87%,且pBSRPS抑制DHAV-1复制的作用也明显强于BSRPS(P<0.05)。2种药物均能显著提高DHAV-1感染雏鸭的存活率,减轻雏鸭肝脏的炎性渗出和坏死,提高受感染雏鸭肝脏的抗氧化酶(SOD、CAT)活性,减少抗氧化物质(GSH)的消耗和氧化产物(MDA)的积累,显示出良好的肝保护和抗氧化作用。[结论]山豆根多糖磷酸化修饰可以更有效提高其对鸭病毒性肝炎的治疗效果,达到磷酸化修饰的效果。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 山豆根多糖 磷酸化修饰 抗病毒 氧化应激
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兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用 被引量：6
5
作者 王冠萱 陈萌萌 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 葛雷 徐为中 王芳 钱莺娟 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第18期40-44,共5页
兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血... 兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断,建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的Taq Man实时PCR。结果显示,稀释度为1×10^(8)~1×10^(4) copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系,决定系数r^(2)为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性,与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应;检测灵敏度为100~1000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%~1.61%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测,结果显示,RHDV检出率为70.5%,敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此,该方法能够同时检测RHDV1型和RHDV2型,可用于鉴别诊断兔出血症病毒。 展开更多
关键词 兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 双重TaqMan qPCR
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猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3
6
作者 王飞飞 刘珂 +8 位作者 郇贝丽 魏建超 邵东华 李蓓蓓 邱亚峰 石元元 钱莺娟 马志永 JUNG Yong-Sam 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第3期28-33,共6页
根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过... 根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP。重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性。结果显示标准曲线线性关系R2>0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%。使用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异。本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段。 展开更多
关键词 促血小板碱性蛋白 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
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制备大肠杆菌菌蜕的方法比较 被引量：2
7
作者 袁橙 郭长明 +3 位作者 左伟勇 郝福星 左沁丹 蔺辉星 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期410-416,共7页
为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组... 为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH5α组和pCold-E/BL21组的裂解效率最高,但pCold-E/BL21组的裂解起始时间晚于其他几组。诱导剂的浓度对pETDuet1-E-SNA/BL21(DE3)的裂解效率有较大影响。电泳结果显示,随着E基因的表达,细菌DNA逸出膜外,同时金黄色葡萄球菌核酸酶A将DNA降解为250 bp以下的小片段。除pBV221-E/BL21组外,β-丙内酯可实现对其他试验组菌蜕的完全灭活。电镜观察发现,几组菌蜕在结构上并无明显差别。与对照菌相比,菌蜕结构完整,电子密度低且不均匀,细胞膜有不同程度的皱缩。 展开更多
关键词 菌蜕 大肠杆菌 E基因 金黄色葡萄球菌核酸酶A 裂解效率
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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析
8
作者 敖清莹 钟秋萍 +7 位作者 史馨瑾 魏常青 刘英楠 廖欣欣 谢振华 钱莺娟 郑龙三 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期164-169,共6页
非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的... 非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 昆虫细胞表达系统 免疫原性
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