肾上腺脑白质营养不良分子诊断中假基因干扰的排除 被引量：7

1

作者 黄梁浒 郑德柱 +2 位作者 曾健 辛娜 兰风华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期572-575,共4页

在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DN... 在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DNA中假基因的干扰 ,利用扩增阻滞突变系统 ,成功地分析了一个肾上腺脑白质营养不良 (R6 17G突变 )家系成员的基因型 .结果表明 ,扩增阻滞突变系统是排除假基因干扰的有效方法之一 . 展开更多

关键词 肾上腺脑白质营养不良 分子诊断 ABCD1基因 假基因 扩增阻滞突变系统

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毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究 被引量：13

2

作者 杨湘越 兰小鹏 +2 位作者 颜宏利 陈蕊雯 孙树汉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期241-243,253,共4页

目的　研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法　对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,... 目的　研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法　对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,易于纯化 ,等电点较理论值低 ,重组cC1已被磷酸化 ,N端携带了来自载体的 4个氨基酸 ,免疫原性较原核的明显增强。结论　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化 ,尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强 ,表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。 展开更多

关键词 抗原cCl 特征 猪囊尾蚴 巴斯德毕赤酵母

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高血压患者心房颤动急性发作后内皮功能生物学标志的改变 被引量：4

3

作者 郑卫星 黄明方 +5 位作者 盖晓波 徐周一 林衔亮 陈娟 侯建萍 兰小鹏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期970-973,共4页

目的观察高血压患者发生急性心房颤动(房颤)后其内皮功能生物学标志的改变。方法高血压患者房颤急性发作者37例,在发作时间小于48h内复律,未给予抗凝治疗,复律后窦性心律维持1个月以上。根据是否服用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和(或... 目的观察高血压患者发生急性心房颤动(房颤)后其内皮功能生物学标志的改变。方法高血压患者房颤急性发作者37例,在发作时间小于48h内复律,未给予抗凝治疗,复律后窦性心律维持1个月以上。根据是否服用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和(或)血管紧张素受体拮抗剂(ARB)分为两组:急性房颤1组(使用ACEI/ARB,n=17)和急性房颤2组(未使用ACEI/ARB,n=20),选择20例高血压合并窦性心律者为对照组。急性房颤患者分别于复律前,复律后1、7、14和30天检测血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、假性血友病因子(vWF)及可溶性E-选择素水平,并与对照组进行比较。结果两个急性房颤组房颤急性发作时ET、vWF和E-选择素水平均显著高于对照组,NO水平显著低于对照组;两急性房颤组间上述指标无显著差异。复律后ET在急性房颤1组于第7天降至对照组水平,急性房颤2组于第30天降至对照组水平;NO、vWF水平在急性房颤1组于第14天恢复至对照组水平,急性房颤2组于第30天恢复至对照组水平;两组急性房颤患者E-选择素均于复律后第1天迅速上升,于第7天基本恢复到对照组水平。结论高血压患者房颤急性发作时存在内皮功能障碍,复律后其内皮功能障碍可持续相当一段时间,ACEI/ARB类药物有助于其内皮功能的恢复。 展开更多

关键词 心房颤动 高血压 电抗休克 内皮 血管

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革兰阴性杆菌菌种分布及耐药性和分子流行病学研究 被引量：4

4

作者 冯福英 张亚彬 +2 位作者 苏丽萍 王德春 黄晓辉 《实用医学杂志》 CAS 2006年第24期2915-2917,共3页

目的:了解我院多重耐药革兰阴性杆菌菌种分布、耐药性及分子流行病学状况。方法:收集2004年9月至2006年1月我院住院和门诊患者样本分离出的革兰阴性杆菌,分析多重耐药发生率、菌种分布、样本分布和药物敏感试验结果;用双纸片确证试验检... 目的:了解我院多重耐药革兰阴性杆菌菌种分布、耐药性及分子流行病学状况。方法:收集2004年9月至2006年1月我院住院和门诊患者样本分离出的革兰阴性杆菌,分析多重耐药发生率、菌种分布、样本分布和药物敏感试验结果;用双纸片确证试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率;采用肠杆菌科基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)检测菌株间的同源关系。结果:多重耐药株发生率为92.37%(605/655);分离率居前3位的菌种为肺炎克雷伯菌(23.05%)、大肠埃希菌(22.29%)和铜绿假单胞菌(15.73%);大肠埃希菌主要分离自尿液,肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌主要分离自痰液;分离的各菌种对美罗培南、亚胺培南、他唑新虽有较高的敏感率,但耐药率呈上升趋势;多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的发生率分别为61.54%(32/52)和47.83%(22/46);存在ESBLs菌株在院内的传播扩散。结论:临床上应重视革兰阴性杆菌引起的感染,合理选用抗生素和严格消毒措施。 展开更多

关键词 抗药性 细菌 革兰氏阴性菌 Β-内酰胺酶类 分子流行病学

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血清丙氨酸氨基肽酶(AAP)测定在诊断肝胆疾病中的应用 被引量：2

5

作者 涂向东 陈敏 +1 位作者 朱忠勇 胡望平 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第6期344-345,共2页

为观察血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)水平对肝胆疾病的临床诊断价值。用自动分析仪速率法测定 2 2 9名肝胆疾病患者和 70名健康人血清AAP活力。结果显示肝癌、各类肝炎、胆道阻塞病人血清AAP活力明显高于健康对照组 (P <0 0 1) ,且与γ ... 为观察血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)水平对肝胆疾病的临床诊断价值。用自动分析仪速率法测定 2 2 9名肝胆疾病患者和 70名健康人血清AAP活力。结果显示肝癌、各类肝炎、胆道阻塞病人血清AAP活力明显高于健康对照组 (P <0 0 1) ,且与γ -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)、碱性磷酸酶 (ALP)活力呈正相关 ;与血清总胆红素 (T -Bil)、丙氨酸转氨酶 (ALT)不存在明显相关性。结论 :在肝胆疾病诊断中 。 展开更多

关键词 诊断 丙氨酸氨基肽酶 肝胆疾病 AAP

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人干燥综合征抗原A毕赤酵母分泌型表达载体的构建 被引量：3

6

作者 杨湘越 兰小鹏 +4 位作者 冯福英 吴文冰 钟智强 廖剑 朱忠勇 《实用医学杂志》 CAS 2006年第22期2575-2577,共3页

目的:构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:以人白血病淋巴细胞HL-60株cDNA为模板,PCR扩增目的基因SSA,纯化,双酶切,DNA浓缩回收,插入酵母分泌型表达载体pPIC9k,热冲击法转化感受态大肠杆菌JM109,阳性克隆提... 目的:构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:以人白血病淋巴细胞HL-60株cDNA为模板,PCR扩增目的基因SSA,纯化,双酶切,DNA浓缩回收,插入酵母分泌型表达载体pPIC9k,热冲击法转化感受态大肠杆菌JM109,阳性克隆提取质粒,双酶切鉴定并测序。结果:PCR产物大小符合要求,重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致,测序结果正确。结论:成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体,为下一步取代从动物胸腺中人工提取低纯度、低产量的SSA抗原,研制新型抗SSA诊断试剂盒打下基础。 展开更多

关键词 干燥综合征 毕赤酵母 分泌型表达载体

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质粒介导AmpC型β-内酰胺酶的基因型和检测方法 被引量：3

7

作者 冯福英 胡望平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期175-178,共4页

关键词 质粒介导AMPC酶 新基因型 Β-内酰胺酶 检测 革兰氏阴性杆菌 C型 公共卫生问题 耐药性 发生率

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DcR3双抗体夹心ELISA法的建立及其在原发性肝癌中的应用前景 被引量：2

8

作者 孙艳 兰小鹏 +3 位作者 张鲁榕 赵猛 杨湘越 朱忠勇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期970-972,共3页

目的:建立一种新的双抗体夹心ELISA法,以检测血清中DcR3抗原的浓度,辅助诊断原发性肝癌。方法:探索建立DcR3双抗体夹心ELISA法最适反应条件。结果:所建立方法线性范围广、灵敏度较高、精密度较好、回收率较高,批间和批内变异系数均<... 目的:建立一种新的双抗体夹心ELISA法,以检测血清中DcR3抗原的浓度,辅助诊断原发性肝癌。方法:探索建立DcR3双抗体夹心ELISA法最适反应条件。结果:所建立方法线性范围广、灵敏度较高、精密度较好、回收率较高,批间和批内变异系数均<10%。对50例正常对照组的检测结果进行统计学分析,确定参考值范围为1.59～60.71ng/mL(x±2s)。原发性肝癌组同正常对照组血清DcR3抗原水平差异有显著性(P<0.01)。结论:该法是一种较好的定量测定血清DcR3抗原的ELISA法,它可以为原发性肝癌患者的诊断提供一种新的辅助指标。 展开更多

关键词 肝肿瘤 DCR3 酶联免疫吸附试验

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膜上斑点洁显示人红细胞b_5还原酶活性 被引量：1

9

作者 兰风华 唐玉钗 +1 位作者 朱忠勇 吴玉水 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第4期379-380,共2页

人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶是使高铁血红蛋白还原的主要酶类，其缺陷将导致遗传性高铁血红蛋白血症．目前，主要通过分光光度法测定ｂ５还原酶活性．我们将ｂ５还原酶抗体点于硝酸纤维膜上，以此捕获并富集红细胞胞浆ｂ５还... 人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶是使高铁血红蛋白还原的主要酶类，其缺陷将导致遗传性高铁血红蛋白血症．目前，主要通过分光光度法测定ｂ５还原酶活性．我们将ｂ５还原酶抗体点于硝酸纤维膜上，以此捕获并富集红细胞胞浆ｂ５还原酶．有ｂ５还原酶活性的斑点用噻唑蓝染色．此法简单直观，可用于ｂ５还原酶的定性和半定量测定，为遗传性高铁血红蛋白血症的诊断提供了一种新的实验手段． 展开更多

关键词 高铁血红蛋白 血症 b5还原酶 红细胞 膜上斑点法

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NADH-细胞色素b5还原酶在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化 被引量：2

10

作者 王瑶 吴玉水 +2 位作者 兰风华 唐玉钗 朱忠勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第4期452-457,共6页

为了探讨 NADH-细胞色素 b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制 ,研究突变型 ( b5R)蛋白结构和功能的关系 ,用基因重组技术将野生型和突变型 ( C2 0 3Y) b5Rc DNA克隆于 p GEX- 2 T载体 ,在大肠杆菌 BL2 1中诱导表... 为了探讨 NADH-细胞色素 b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制 ,研究突变型 ( b5R)蛋白结构和功能的关系 ,用基因重组技术将野生型和突变型 ( C2 0 3Y) b5Rc DNA克隆于 p GEX- 2 T载体 ,在大肠杆菌 BL2 1中诱导表达 .Western印迹鉴定所表达的蛋白为GST- b5R融合蛋白 .应用谷胱甘肽 - Sepharose 4B亲和层析 ,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST- b5R和 GST- b5RC2 0 3Y融合蛋白 .比较 GST- b5R和 GST- b5RC2 0 3Y酶活性及稳定性 ,发现野生型和突变型的酶活性基本相同 .但与野生型酶相比 ,突变型酶对热的稳定性较差 ,对胰蛋白酶更加敏感 .结果提示 ,C2 0 3Y突变可引起蛋白质二级结构改变而导致酶的稳定性下降 . 展开更多

关键词 分子病理 基因突变 GST融分蛋白 纯化 RCM b5R

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病毒白细胞介素-10的基因克隆与原核表达 被引量：1

11

作者 连云宗 李极品 +2 位作者 吴玉水 程烽 朱忠勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期661-662,共2页

目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因。PCR产物经EcoRI和XhoI双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌B... 目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因。PCR产物经EcoRI和XhoI双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下表达目的蛋白。结果:以终浓度为100μmol/L的IPTG于30℃诱导6h后,重组菌可高效表达相对分子质量(Mr)约为24000的His-vIL-10融合蛋白。结论:成功地克隆vIL-10的编码基因并在大肠杆菌中高效表达,为制备抗vIL-10单克隆抗体(mAb)、分析vIL-10结构与功能的关系提供了条件。 展开更多

关键词 病毒白细胞介素-10 大肠杆菌 表达

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一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验 被引量：1

12

作者 兰小鹏 涂向东 +5 位作者 黄俏佳 冯修高 唐玉钗 朱忠勇 周明宣 陈学香 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期214-215,共2页

目的：建立一种可同时检测抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）和单链ＤＮＡ（ｓＤＮＡ）抗体的快速斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）。方法：将ｄｓＤＮＡ和ｓＤＮＡ抗原结合在同一检测盒内，采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术，... 目的：建立一种可同时检测抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）和单链ＤＮＡ（ｓＤＮＡ）抗体的快速斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ）。方法：将ｄｓＤＮＡ和ｓＤＮＡ抗原结合在同一检测盒内，采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术，同时检测抗ｄｓＤＮＡ和ｓＤＮＡ抗体。结果：ＤＩＧＦＡ既可同步又可区别检测两种ＤＮＡ抗体，且检测ｄｓＤＮＡ抗体的敏感性优于酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）。结论：ＤＩＧＦＡ简便、快速、可靠，是一种实用的ＤＮＡ抗体检测方法。 展开更多

关键词 抗双链DNA抗体 抗单链DNA抗体 DIGFA

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筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立 被引量：1

13

作者 李卫滨 兰小鹏 +1 位作者 杨湘越 吴文冰 《实用医学杂志》 CAS 2007年第19期2966-2968,共3页

目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性的适体。方法:合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,通过SELEX方法,即以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链亲和素-... 目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性的适体。方法:合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,通过SELEX方法,即以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选针对CsA的适体,将最后一轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析。结果:经过10轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势,随机挑选的19个克隆适体根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主。结论:我们通过改良SELEX方法筛选得到了CsA特异性的适体。 展开更多

关键词 环孢菌素 适体 随机ssDNA 文库

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抗人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶单克隆抗体的建立 被引量：1

14

作者 兰风华 唐玉钗 +2 位作者 黄长晖 朱忠勇 王瑶 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第3期61-64,共4页

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免... 以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免疫印迹分析表明，两株ＩｇＧ单克隆抗体对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶有较高的特异性和亲和力。这一研究为开展对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的研究和遗传性高铁血红蛋白血症的免疫诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 红细胞 细胞色素酶 还原酶 辅酸I 单克隆抗体

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Bcl-2反义核酸治疗Burkitt’s淋巴瘤裸鼠模型的研究 被引量：3

15

作者 兰小鹏 吕联煌 +2 位作者 林景娟 陈英玉 林振兴 《北京大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期513-517,共5页

为了探讨Bcl 2反义核酸治疗Burkitt’s淋巴瘤 (BL)的疗效 ,将不含EB病毒的人类BL的细胞株—CA4 6移植到BAB C裸鼠体内 ,建立BL裸鼠模型 ,并将荷瘤裸鼠随机分为反义治疗 (A组 )、无义对照 (B组 )和空白对照 (C组 ) 3个组 ,每组 5只。A组... 为了探讨Bcl 2反义核酸治疗Burkitt’s淋巴瘤 (BL)的疗效 ,将不含EB病毒的人类BL的细胞株—CA4 6移植到BAB C裸鼠体内 ,建立BL裸鼠模型 ,并将荷瘤裸鼠随机分为反义治疗 (A组 )、无义对照 (B组 )和空白对照 (C组 ) 3个组 ,每组 5只。A组注射Bcl 2反义核酸 ,B组注射无义寡核苷酸 ,C组不注射任何制剂 ;治疗剂量为 5mg·kg-1 ·d-1 ,给药方式为瘤内局部注射 ,每天注射 1次 ,连续给药 1 5d。结果显示 :A组肿瘤的生长明显受到抑制 ,其中 1只裸鼠的肿瘤消失 ,其余 4只的瘤块明显小于B组和C组。A组对C组的肿瘤抑制率为 89.5 % ;A组对B组的肿瘤抑制率为83.3% ,2者的抑制率无显著差异 (p >0 .0 5 ) ;而B组对C组的抑制率为 36 .9%与前 2者的抑制率差异非常显著 (p <0 .0 1 )。说明Bcl 展开更多

关键词 BCL-2反义核酸 治疗 Burkitt’S淋巴瘤 裸鼠模型 CA-46

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SELDI-TOF MS室内质量控制的初步研究 被引量：1

16

作者 陈蓉艳 兰小鹏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期2074-2076,共3页

目的:表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOFMS)是快速、高通量的蛋白质组学分析技术。像所有技术一样,质量控制是SELDI-TOFMS应用于临床的关键。本文就SELDI-TOFMS室内质量控制进行初步研究。方法:收集本院门诊患者血清,对仪器... 目的:表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOFMS)是快速、高通量的蛋白质组学分析技术。像所有技术一样,质量控制是SELDI-TOFMS应用于临床的关键。本文就SELDI-TOFMS室内质量控制进行初步研究。方法:收集本院门诊患者血清,对仪器进行内标、外标校准后,采用Biomarker Wizard软件对同一血清样本在不同批次的芯片进行比较。结果:质量CV值小于0.1%,而血清样本的峰值的平均CV值也都控制在30%以内,质控血清也相当稳定。结论:初步建立了SELDI-TOFMS的质控方案。 展开更多

关键词 蛋白质组学 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 质量控制

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EB病毒gp85N端片段的原核表达与初步鉴定

17

作者 涂向东 吴玉水 +4 位作者 邱龙翔 连云宗 程烽 兰风华 朱忠勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期110-112,116,共4页

目的构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用PCR扩增E... 目的构建EB病毒基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。分析非糖基化的EB病毒包膜糖蛋白gp85N端截短片段的抗原性。方法采用基因工程技术,以B95-8细胞(美洲绒猴外周血B淋巴细胞经EBV转化后的细胞系)[1]培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片段。PCR产物经HindⅢ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pGEX-5T中,构建pGEX5T-85N重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白用Westernblot鉴定,并免疫BALB/c小鼠。结果序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全一致。重组表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为45000,同预期的大小相符。以纯化的可溶性重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测获得了高效价的抗血清,且抗gp85单克隆抗体(mAb)可识别所表达的gp85N抗原。Westernblot显示,该抗原可与小鼠免疫血清起特异性反应。结论表达并纯化的EB病毒截短的gp85N重组蛋白具有良好的抗原性,为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供了条件。 展开更多

关键词 EB病毒 gp85 N端片段 表达 免疫原性

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间接免疫荧光法检测人红细胞NADH-细胞色素b5还原酶

18

作者 吴玉水 唐玉钗 朱忠勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期82-83,共2页

关键词 血红蛋白血症 遗传性还原酶 红细胞 NADH HM

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