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华南地区番木瓜环斑病毒和畸型花叶病毒调查鉴定研究 被引量:10
1
作者 肖火根 真冈哲夫 骆学海 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期52-53,共2页
调查鉴定了广州、南宁、厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类,发现都是由番木瓜环斑病毒引起的,未发现番木瓜畸型花叶病毒。
关键词 番木瓜 环斑病毒 畸型花叶病毒 病毒病
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广东兰花病毒病的鉴定和检测研究 被引量:31
2
作者 肖火根 郑冠标 +1 位作者 张曙光 高乔婉 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1996年第1期21-24,共4页
用建立的DAC-ELIsA法,检测了来自广东省7市18个兰场或兰圃的20种兰共159个感病兰花样本。建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)以及CyMV和ORSV复合感染分别在40,26和6个样本中检测到,... 用建立的DAC-ELIsA法,检测了来自广东省7市18个兰场或兰圃的20种兰共159个感病兰花样本。建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)以及CyMV和ORSV复合感染分别在40,26和6个样本中检测到,分别占所检测样品的25。2%,16.4%和3.8%,占所检测的20个兰种的50%(10/20),35%(7/20)和15%(3/20)。感染CyMV的兰种有墨兰、文心兰、大花惠兰(组培苗)、惠兰、石斛兰、硬叶吊兰、卡特兰、秋兰和万代兰;感染ORSV的兰种有墨兰、文心兰、大花惠兰(组培苗)、蝴蝶兰、五唇兰、毛兰和万代兰;混合感染CyMV和ORSV的兰种有文心兰、大花惠兰(组培苗)和万代兰。 展开更多
关键词 兰花 病毒病 检测 鉴定 广东
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烟草花叶病毒株系鉴定研究进展 被引量:8
3
作者 付鸣佳 高乔婉 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期113-117,共5页
烟草花叶病毒(TobaccoMosaicVirus,TMV)具许多株系,国内外近十几年来主要在生物学、血清学、生物化学和分子生物学等方面进行株系鉴定的研究。文章就上述研究进展作一简要综述,并针对某些研究方面阐述了一些... 烟草花叶病毒(TobaccoMosaicVirus,TMV)具许多株系,国内外近十几年来主要在生物学、血清学、生物化学和分子生物学等方面进行株系鉴定的研究。文章就上述研究进展作一简要综述,并针对某些研究方面阐述了一些见解和评论。 展开更多
关键词 烟草 花叶病毒 株系 株系鉴定
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香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 被引量:21
4
作者 肖火根 胡晋生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期5-8,共4页
建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μ... 建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μg和0. 展开更多
关键词 香蕉 束顶病毒 免疫捕捉PCR 直接结合PCR
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番木瓜环斑病毒株系的生物学和血清学研究 被引量:9
5
作者 肖火根 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期50-54,共5页
本文对华南地区番木瓜环斑病毒(papayaRingspotvirus,PRV)的Ys、Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘... 本文对华南地区番木瓜环斑病毒(papayaRingspotvirus,PRV)的Ys、Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘关系方面,华南3个株系间的关系较密切,而与HA5-1株系的较疏远。在西葫芦植株体内增殖和运转方面,Sm株系病毒增殖和运转最快,在体内的浓度最高;Vb次之;Ys再次之;而HA5-1则更次之。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 株系 生物学
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番木瓜耐环斑病毒病检测方法的研究 被引量:3
6
作者 饶雪琴 宋世文 +2 位作者 张曙光 范怀忠 归树樟 《热带作物学报》 CSCD 2001年第1期66-70,共5页
用汁液磨擦接种法、局部枯斑法、间接ELISA法和过氧化物酶检测法研究了组培和杂交一代番木瓜对番木瓜环斑病毒(PRV)的耐病性。结果表明:前3种方法可以确定组培番木瓜的耐病性,第4种方法暂未能作出结论。
关键词 组织培养 番木瓜环班病毒 耐病性 检测方法
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香蕉束顶病毒复制酶和黄瓜花叶病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建 被引量:1
7
作者 郑耘 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期18-21,共4页
利用重组PCR技术将香蕉束顶病毒的复制酶基因和黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因融合重组,并与植物表达载体pBI121连接,构建了抗香蕉束顶病和香蕉花叶病的双价植物表达载体,通过冻融法转化载体入根癌农杆菌LBA4404,获得了工程农杆菌pBI121.F... 利用重组PCR技术将香蕉束顶病毒的复制酶基因和黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因融合重组,并与植物表达载体pBI121连接,构建了抗香蕉束顶病和香蕉花叶病的双价植物表达载体,通过冻融法转化载体入根癌农杆菌LBA4404,获得了工程农杆菌pBI121.FBC,从而为培育抗病转基因香蕉品种奠定了基础. 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 黄瓜花叶病毒 融合基因
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侵染甘蔗的高粱花叶病毒遗传多样性分析 被引量:11
8
作者 许东林 周国辉 +1 位作者 沈万宽 邓海华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1916-1920,共5页
为探明甘蔗花叶病的病原病毒之一高粱花叶病毒(sorghum mosaic virus,SrMV)在我国华南地区的发生情况,从广东广州、翁源、博罗及广西南宁等地甘蔗产区采集表现花叶症状的甘蔗叶片样品,采用1对病毒CP基因引物(P1:5′-ACAGCAGAWGCA... 为探明甘蔗花叶病的病原病毒之一高粱花叶病毒(sorghum mosaic virus,SrMV)在我国华南地区的发生情况,从广东广州、翁源、博罗及广西南宁等地甘蔗产区采集表现花叶症状的甘蔗叶片样品,采用1对病毒CP基因引物(P1:5′-ACAGCAGAWGCAACRGCACAAGC-3、P2:5′-CTCWCCGACATTCCCATCCAAGCC-3′,Y=C/T,W=T/A,K=G/T,R=A/G),进行一步法RT-PCR检测,结果表明48%的样品受到SrMV侵染。根据寄主类型和地理来源,选取10份代表性样品,对经P1、P2扩增获得的病毒CP基因片段进行直接测序,所得序列经Blast比对确认均为SrMVCP序列。为揭示SrMV种内的遗传多样性,采用Clustal W方法对本文鉴定的10个SrMV分离物与GenBank中已报道的全部18个SrMV株系或分离物的CP基因序列进行多序列联配,并计算核苷酸同一性,结果显示各个SrMV分离物之间的CP基因核苷酸同一性为76%~100%。基于病毒CP基因核苷酸同一性的遗传多样性分析,SrMV种内分化成2个遗传变异类群,即杂种甘蔗组(HS group)和高贵甘蔗组(Nsgroup),它们的分离物大多分别来自杂种甘蔗(hybrid sugarcane)寄主和高贵甘蔗(noble sugarcane)寄主。分离物之间的平均CP基因核苷酸同一性,在两组组内分别为87%和90%,两组间为80%。说明两组SrMV之间存在较大的遗传差异,寄主隔离是导致该病毒种内分化的主要因素。因此,在甘蔗花叶病的防治和抗病毒育种工作中,除需注意病原的种类和寄主类型外,还应充分考虑病原种内的遗传多样性。 展开更多
关键词 甘蔗花叶病 高粱花叶病毒 遗传分化
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应用DB-EIA技术快速检测甘蔗宿根矮化病研究 被引量:14
9
作者 沈万宽 邓海华 +1 位作者 周国辉 李奇伟 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期110-113,共4页
就甘蔗宿根矮化病DB-EIA检测技术、检测灵敏度、样品蔗汁保存方式及保存时间进行研究。结果表明DB-EIA检测甘蔗宿根矮化病具有操作简单、高效、重复性好、灵敏度高、对蔗汁新鲜度要求不高等优点。该方法检测灵敏度为1~1/10(稀释倍数);... 就甘蔗宿根矮化病DB-EIA检测技术、检测灵敏度、样品蔗汁保存方式及保存时间进行研究。结果表明DB-EIA检测甘蔗宿根矮化病具有操作简单、高效、重复性好、灵敏度高、对蔗汁新鲜度要求不高等优点。该方法检测灵敏度为1~1/10(稀释倍数);蔗汁保存于4℃或-20℃条件下3d,对检测结果无显著影响,-20℃条件下保存45d,大部分样品检测结果不受影响,少部分样品出现假阴性。 展开更多
关键词 甘蔗 宿根矮化病 DE—EIA
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广东番茄黄化曲叶病毒AC2基因的原核表达及抗血清制备 被引量:6
10
作者 赵芹 李华平 +4 位作者 何自福 佘小曼 谢大森 何晓明 彭庆务 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期53-56,共4页
利用PCR方法从广东番茄黄化曲叶病毒分离物G3(Tomato yellow leaf curl Guang dong virus-[G3],TYLCGuV-[G3])全长序列的重组质粒上扩增该病毒的AC2基因,将其构建至原核表达载体pET-28b(+)上,经IPTG诱导,在大肠埃希菌Rosetta(DE3)Ⅲ中... 利用PCR方法从广东番茄黄化曲叶病毒分离物G3(Tomato yellow leaf curl Guang dong virus-[G3],TYLCGuV-[G3])全长序列的重组质粒上扩增该病毒的AC2基因,将其构建至原核表达载体pET-28b(+)上,经IPTG诱导,在大肠埃希菌Rosetta(DE3)Ⅲ中高效表达.SDS-PAGE电泳结果显示,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为19 500.以诱导的融合蛋白为抗原,免疫注射新西兰大耳白兔制备抗血清,间接ELISA测定抗血清效价为1∶16 384.Western-blotting检测结果表明,制备的抗血清有较好的抗原-抗体识别反应,为专化性抗血清. 展开更多
关键词 广东番茄黄化曲叶病毒 AC2基因 原核表达 抗血清制备
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香蕉茎尖遗传转化法研究 被引量:21
11
作者 李华平 胡晋生 +1 位作者 王敏 范怀忠 《热带作物学报》 CSCD 2000年第4期33-38,共6页
通过对多茎尖繁殖方法和转基因研究,建立了香蕉茎尖外源基因的遗传转化方法。明确了卡那霉素或G-418在转化植株中所使用的合适浓度,即当使用卡那霉素时,其产梢的浓度为 100 mg/L,导根的浓度为 150 mg/L;但当使... 通过对多茎尖繁殖方法和转基因研究,建立了香蕉茎尖外源基因的遗传转化方法。明确了卡那霉素或G-418在转化植株中所使用的合适浓度,即当使用卡那霉素时,其产梢的浓度为 100 mg/L,导根的浓度为 150 mg/L;但当使用 G-418时,其产梢浓度则为 25 mg/L,其导根浓度则为 30 mg/L或35 mg/L。通过基因枪和农杆菌共培养法尝试将黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因转化香蕉组织,其结果表明:经过卡那霉素或G-418的筛选,仅有 5%-7%的芽能够存活下来。通过选择性继代培养,最后获得了73株转化植株;对其中的24株进行PCR检测,结果表明阳性率达 83.3%;进一步的 Southern blot检测表明:PCR检测阳性的81.8%植株含有外源衣壳蛋白基因。 展开更多
关键词 香蕉 茎尖 遗传转化 衣壳蛋白基因
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番木瓜畸型花叶病毒(PLDMV)调查鉴定 被引量:6
12
作者 贺国安 肖火根 +2 位作者 真冈哲夫 张曙光 范怀忠 《热带作物学报》 CSCD 2001年第2期38-42,共5页
对采自广州、景洪(云南)、海口(海南)的各17,24,13个番木瓜样品进行DAS-ELISA、RT-PCR和生物测定等分析鉴定,发现来自广州和海口的样品中有21个样品感染番木瓜环斑病毒(PRSV),而来自景洪的样品中... 对采自广州、景洪(云南)、海口(海南)的各17,24,13个番木瓜样品进行DAS-ELISA、RT-PCR和生物测定等分析鉴定,发现来自广州和海口的样品中有21个样品感染番木瓜环斑病毒(PRSV),而来自景洪的样品中未发现感染PRSV,在所有样品中都未发现感染有番木瓜畸型花叶病毒的。 展开更多
关键词 番木瓜 畸型花叶病毒 调查 鉴定 DAS-ELISA RT-PCR
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甘蔗宿根矮化病诊断方法比较研究 被引量:6
13
作者 沈万宽 邓海华 周国辉 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期561-565,共5页
甘蔗宿根矮化病(Ratoon stunting disease,RSD)是我国的一种主要甘蔗病害,没有明显的外部症状,我国常用的诊断方法是内部症状检查。为了探明内部症状(分为边部维管束和中部维管束)诊断的可靠性及实际应用价值,应用准确度高、灵敏度好的... 甘蔗宿根矮化病(Ratoon stunting disease,RSD)是我国的一种主要甘蔗病害,没有明显的外部症状,我国常用的诊断方法是内部症状检查。为了探明内部症状(分为边部维管束和中部维管束)诊断的可靠性及实际应用价值,应用准确度高、灵敏度好的斑点酶标免疫试验(Dot blot enzyme immunoassays,DB-EIA)与之比较。结果表明:边部维管束法与DB-EIA检测阳性一致率为30.4%(7/23)、阴性一致率为73.3%(11/15);中部维管束法与DB-EIA检测比较,阳性一致率为50%(5/10),阴性一致率为75%(6/8);2种内部症状诊断的准确性没有明显差异,但中部维管束法诊断准确性略高于边部维管束法。这一结果表明,与DB-EIA相比,内部症状诊断可靠性较差,是一种相当粗略的诊断方法,诊断结果仅能参考。 展开更多
关键词 甘蔗 宿根矮化病 斑点酶标免疫试验 内部症状
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香蕉线条病毒ORF I基因的原核表达及抗体制备 被引量:2
14
作者 何云蔚 陈秀 +3 位作者 阮小蕾 沈文锦 刘福秀 李华平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期18-21,共4页
利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的ORF I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以... 利用PCR方法从含香蕉线条病毒广东分离物(BSV-GD)部分基因组的质粒中扩增该病毒的ORF I基因,将其克隆到pET-28b(+)原核表达载体中进行了融合表达.SDS-PAGE电泳发现,目的融合蛋白与预期大小一致,相对分子质量约为23 000,表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在,将其变性溶解后利用N端的组氨酸标签进行纯化.以纯化产物为抗原免疫兔子制备了香蕉线条病毒的阳性兔抗血清,Western blot和ELISA分析表明,制备的兔抗血清为香蕉线条病毒的高效特异性抗血清,效价高达1∶51 200. 展开更多
关键词 香蕉线条病毒 ORF I 原核表达 抗血清
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香蕉束顶病毒NS株系DNA组分6的克隆及序列分析 被引量:2
15
作者 何自福 肖火根 +1 位作者 李华平 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期33-36,共4页
通过常规的基因克隆技术 ,对香蕉束顶病毒NS株系代表分离物的DNA组分 6进行了克隆和序列分析 ,并将该分离物这个组分的序列与先前报道的广州天河分离物 (属NSP株系 )的该组分序列进行比较 ,结果表明 :该组分全序列、ORF及其编码的氨基... 通过常规的基因克隆技术 ,对香蕉束顶病毒NS株系代表分离物的DNA组分 6进行了克隆和序列分析 ,并将该分离物这个组分的序列与先前报道的广州天河分离物 (属NSP株系 )的该组分序列进行比较 ,结果表明 :该组分全序列、ORF及其编码的氨基酸序列在 2个分离物间的变异率分别为 3 4%、1 7%和 2 6 % .表明该组分在 2个株系代表分离物间存在较显著差异 ,从而进一步支持了广东BBTV存在 2个株系的结论 .此外 ,NS株系代表分离物DNA组分 6的全序列、ORF及其编码的氨基酸序列与澳大利亚分离物的变异率分别为 14.4%、7.5 %和 7.1% . 展开更多
关键词 香蕉 束顶病毒 NS株系 基因克隆 序列分析 DNA组分
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侵染广东辣椒的黄瓜花叶病毒的CP及2b基因序列分析 被引量:3
16
作者 许东林 周国辉 宋晓兵 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-54,共4页
对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic wirus,CMV)的CP及2b基因进行序列分析,结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9%~93.8%和76.1%~76.9%。氨基酸同源率分别为92.... 对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic wirus,CMV)的CP及2b基因进行序列分析,结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9%~93.8%和76.1%~76.9%。氨基酸同源率分别为92.7%~97.7%和72.4%~78.1%;其2b基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ之间的核苷酸同源率分别为83.9%~90.2%和64.0%~67.7%,氨基酸同源率分别为79.3%~85.7%和50.5%~53.5%,由此确认该CMV分离物属于亚组Ⅰ成员.此外,CMV亚组Ⅰ成员的CP及2b基因中分别具有一段长为102bp及54bp的高度保守序列,这为转基因诱导寄主转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)CMV育种研究提供了参考. 展开更多
关键词 辣椒 黄瓜花叶病毒 CP基因 2b基因 序列分析
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水稻瘤矮病毒S9基因的生物信息学分析及原核表达蛋白的抗血清制备 被引量:3
17
作者 赵芹 邓永枢 +1 位作者 阮小蕾 李华平 《热带作物学报》 CSCD 2010年第12期2153-2158,共6页
以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的第9组分全长核苷酸序列。生物信息学分析表明,其基因结构特征与已报道的其他分离物基本一致。Pns9蛋白为细胞膜外蛋白,在植物呼... 以广东德庆市水稻瘤矮病的典型病株为材料,RT-PCR扩增并克隆了水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的第9组分全长核苷酸序列。生物信息学分析表明,其基因结构特征与已报道的其他分离物基本一致。Pns9蛋白为细胞膜外蛋白,在植物呼肠孤病毒属内没有发现同源蛋白,与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的入口蛋白(portal protein)及姜氏军团菌(Legionella drancourtii LLAP12)的假设蛋白(hypothetical protein LDG_3259)分别有33%和24%的氨基酸序列相似性,功能尚待确定。将S9基因克隆至原核表达载体pET-28b(+)得到高效表达,融合蛋白经亲和层析纯化后,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot和ELISA分析表明制备的兔抗为特异抗血清,效价为1∶13 1072。 展开更多
关键词 水稻瘤矮病毒 S9 原核表达 抗血清制备
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表达病毒CP基因的转基因南方烟草的攻毒试验 被引量:1
18
作者 邱国华 张建民 +2 位作者 叶长明 李宝健 高乔婉 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第S1期82-85,共4页
利用抗 C M V、 T M V 的抗血清对转 C M V、 T M V C P 基因的南方烟草的6 个株系即:2 T6 ,2 T20 ,2 T25 ,2 C31 , 2 C32 和2 T C100 进行了 E L I S A 和 Western blo... 利用抗 C M V、 T M V 的抗血清对转 C M V、 T M V C P 基因的南方烟草的6 个株系即:2 T6 ,2 T20 ,2 T25 ,2 C31 , 2 C32 和2 T C100 进行了 E L I S A 和 Western blot 分析, 证明了外源基因已在转基因烟草中得到表达. 经组织培养技术, 将表达外源基因的转基因烟草进行快繁, 然后进行温室的攻毒试验, 收集各抗病株系转基因烟草的套袋自交种子, 进行 F1 代植株的大田攻毒试验. 温室和大田攻毒试验都表明, 转 C M V、 T M V C P 基因的烟草能够抵抗病毒的侵袭, 且转 T M V C P 基因烟草的抗病能力较好, 可能是植物体内 T M V C P 展开更多
关键词 TMV基因 CMVCP基因 南方烟草品种 基因表达 温室攻毒 田间攻毒
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甘蔗宿根矮化病研究综述 被引量:15
19
作者 沈万宽 周国辉 邓海华 《中国糖料》 2007年第1期50-53,共4页
对甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease,RSD)的检测方法、经济损失评估、防治技术、抗病育种及我国大陆蔗区发生情况进行综述,并对存在的问题及今后的研究方向进行探讨。
关键词 甘蔗 宿根矮化病 进展
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番木瓜环斑病毒检测新技术的建立及其在病毒——原生质体体系探索中的初步应用 被引量:1
20
作者 陈枝楠 郑冠标 +3 位作者 林孔勋 范怀忠 张春霞 田波 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期75-77,共3页
为了有助于全面了解和评价番木瓜完整植株对番木瓜环斑病毒(PRV)的抗、感病性机制,建立单细胞侵染模型是一个重要途径。本研究首次建立了PRV-番木瓜原生质体实验体系;建立了检测 PRV的间接Dot-ELISA和检测PRV-RNA的 cDNA分子探针的方法... 为了有助于全面了解和评价番木瓜完整植株对番木瓜环斑病毒(PRV)的抗、感病性机制,建立单细胞侵染模型是一个重要途径。本研究首次建立了PRV-番木瓜原生质体实验体系;建立了检测 PRV的间接Dot-ELISA和检测PRV-RNA的 cDNA分子探针的方法和技术,并利用这2个检测技术对PRV在番木瓜原生质体中的行为动态进行了初步探索。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 原生质体
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