钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅡδRNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响 被引量：8

1

作者 刘娟娟 董伟 +3 位作者 戚孟春 冯晓洁 李任 孙红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期22-27,共6页

目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(Ca2+/Calmodulin dependent kinaseⅡδ,Ca MKⅡδ)RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法应用慢病毒构建Ca MKⅡδRNA干扰载体,并确定最佳感染... 目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(Ca2+/Calmodulin dependent kinaseⅡδ,Ca MKⅡδ)RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法应用慢病毒构建Ca MKⅡδRNA干扰载体,并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)值及转染效率。小鼠RAW264.7细胞分为对照组、空白载体组和干扰组。转染5 d后收获细胞,确定干扰效率;并检测RNA干扰对活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、非受体酪氨酸激酶(c-Src)基因表达及破骨细胞分化的影响。结果成功构建了Ca MKⅡδRNA干扰载体,最佳转染MOI值为30,转染效率可达78%(P<0.05)。重组病毒对Ca MKⅡδ的干扰效率在mRNA水平超过78%,在蛋白水平超过70%(P<0.01)。Ca MKⅡδRNA干扰显著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,与对照组、空白载体组比较,其mRNA水平下降分别超过了47.8%、43.3%和48.5%(P<0.05,P<0.01),蛋白相对水平分别超过了61.1%、48.2%和39.6%%(P<0.01);免疫荧光细胞化学检测也得到相似结果。Ca MKⅡδRNA干扰也显著降低了破骨细胞生成及骨吸收功能;与其他两组比较,干扰组破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积下降分别超过了49.8%、47.6%和61.3%(P<0.01)。结论 Ca MKⅡδRNA干扰可显著下调其下游NFATc1、TRAP、c-Src基因表达并抑制破骨细胞分化;Ca MKⅡδ在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。 展开更多

关键词 破骨细胞 钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ RNA干扰 活化T细胞核因子蛋白c1 抗酒石酸酸性磷酸酶 非受体酪氨酸激酶

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唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白、钙调磷酸酶表达的影响 被引量：7

2

作者 阴露佳 林珏杉 +4 位作者 温黎明 董伟 冯晓洁 孙红 戚孟春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期171-175,217,共6页

目的 :探讨唑来膦酸(zoledronate,ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白(calmodulin)和钙调磷酸酶(calcineurin)基因表达的影响。方法:小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组,均用100 ng/m L核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导4 d;B组细胞在RANKL诱... 目的 :探讨唑来膦酸(zoledronate,ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白(calmodulin)和钙调磷酸酶(calcineurin)基因表达的影响。方法:小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组,均用100 ng/m L核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导4 d;B组细胞在RANKL诱导第2天加入1×10-6mol/L ZOL处理48 h。RANKL诱导4 d后收获细胞,检测破骨细胞生成及calmodulin、calcineurin基因表达情况。结果 :B组多核破骨细胞数、吸收陷窝数目及面积分别为(8.8±2.3)个、(6.7±1.2)个和(997.1±14.8)μm^2,均显著低于A组的(19.7±2.9)个、(13.3±1.5)个和(1 676.9±24.9)μm^2(P<0.01)。B组calmodulin mRNA及蛋白水平较A组分别降低了51.0%和78.7%(P<0.05),calcineurin则分别下降了37.0%和69.5%(P<0.01)。免疫荧光细胞化学显示,B组calmodulin、calcineurin的荧光强度较A组也明显下降。结论:ZOL可显著抑制破骨细胞生成,并下调破骨细胞分化中calmodulin和calcineurin的m RNA和蛋白水平,而calmodulin、calcineurin可能参与了ZOL对破骨细胞形成和功能的抑制。 展开更多

关键词 唑来膦酸 破骨细胞 钙调蛋白 钙调磷酸酶 基因调控

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CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究 被引量：5

3

作者 陆大壮 刘娟娟 +3 位作者 戚孟春 温黎明 李任 孙红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1870-1874,共5页

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石酸酸性... 目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及骨磨片吸收陷窝检测评价破骨细胞生成情况;同时于诱导第0、1、3、5天末通过免疫荧光细胞化学、RT-q PCR和Western blot法检测Ca MKIIδ的mRNA及蛋白表达水平。结果:TRAP染色及骨吸收陷窝检测显示于诱导第5天有多核破骨细胞生成。第0、1、3、5天Ca MKIIδ的mRNA表达水平分别为1.028±0.041、2.478±0.087、10.524±1.284和42.914±2.667,蛋白相对水平分别为0.762、0.963、1.802和3.136,免疫荧光细胞化学检测显示Ca MKIIδ的荧光6强度呈时间依赖性递增。结论:Ca MKIIδ的表达随破骨细胞分化逐步增高,提示Ca MKIIδ在破骨细胞分化中可能起着关键调控作用。 展开更多

关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIδ 破骨细胞 核因子κB受体激活因子配体 抗酒石酸酸性磷酸酶

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沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响 被引量：3

4

作者 宋志强 董伟 +3 位作者 阴露佳 刘娟娟 孙红 戚孟春 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1084-1089,共6页

目的研究沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响。方法 36只大鼠随机分成A、B、C组,分别接受生理盐水、唑来膦酸、唑来膦酸+沙利度胺治疗。用药3周后,拔除大鼠左上颌第1磨牙。拔牙后4、8周,收获标本,评价颌骨坏死、微血管生成及细胞凋... 目的研究沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响。方法 36只大鼠随机分成A、B、C组,分别接受生理盐水、唑来膦酸、唑来膦酸+沙利度胺治疗。用药3周后,拔除大鼠左上颌第1磨牙。拔牙后4、8周,收获标本,评价颌骨坏死、微血管生成及细胞凋亡情况。结果拔牙后4、8周,大鼠上颌骨拔牙创处均无死骨裸露,但B组、C组部分标本可见一些小的瘘管。组织学检查显示,A组标本未见死骨,而B组、C组在拔牙窝周围可见小块死骨。B组、C组拔牙窝周围区域空骨陷窝百分比和死骨面积显著多于A组(P<0.01),而骨陷窝密度则显著下降。B组、C组微血管密度较A组也显著降低,在4周时分别下降了和25.87%和55.27%(P<0.01),在8周时分别下降了45.62%和72.84%(P<0.01);凋亡细胞数则在4周时分别增长了54.80%和87.89%(P<0.01),在8周分别增长了208.08%和250.58%(P<0.01)。结论沙利度胺加重了唑来膦酸诱发的早期阶段的颌骨坏死;沙利度胺和唑来膦酸对颌骨坏死的作用与微血管生成抑制有关。 展开更多

关键词 唑来膦酸 血管生成 双膦酸盐 颌骨坏死 沙利度胺

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CaMKⅡδ基因沉默对破骨细胞分化功能及c-fos/c-jun/CREB基因的影响 被引量：3

5

作者 张誉泓 戚孟春 +1 位作者 董伟 孙红 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期420-425,共6页

目的探索编码钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱδ的基因沉默对破骨细胞分化功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,转染至小鼠RAW264.7... 目的探索编码钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱδ的基因沉默对破骨细胞分化功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,转染至小鼠RAW264.7细胞,确定干扰效率。病毒转染细胞后,用50 ng·mL^-1核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导,5 d后收获,通过耐酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测、牛骨吸收陷窝检测沉默CaMKⅡδ基因对破骨细胞分化、骨吸收功能的影响;48 h后收获,利用实时聚合酶链式反应(PCR)、Westernblot等方法检测c-fos、c-jun、CREB的表达情况。结果 CaMKⅡδ RNA干扰在mRNA和蛋白质水平的干扰效率分别为70.6%和72.2%。 CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低 c-fos、c-jun和CREB的mRNA水平,下调幅度分别为74%、49%和24%,CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低c-Fos、c-Jun和CREB的水平,下调幅度分别为74.3%、61.3%和59.2%。结论 CaMKⅡδ RNA干扰可在mRNA和蛋白质水平显著抑制c-fos、c-jun、CREB的表达,其共同参与CaMKⅡδ对破骨细胞分化的调控。 展开更多

关键词 破骨细胞 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ C-FOS C-JUN 环腺苷酸反应原件结合蛋白

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唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ和Ⅳ基因表达的影响 被引量：3

6

作者 刘娟娟 李鹏 +4 位作者 董伟 冯晓洁 温黎明 孙红 戚孟春 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-23,I0002,共6页

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL... 目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导5d,ZOL组同时加用ZOL处理2d,第5天收集细胞后检测OC生成及CaMKⅡ、CaMKⅣ基因表达情况。结果:ZOL组中多核OC数、骨吸收陷窝数和面积分别为33.0±1.0、46.0±3.5和(4 125.9±674.8)μm2,明显低于对照组的66.6±3.2、86.0±9.2和(9 418.3±1 260.8)μm2(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,ZOL组细胞中CaMKⅡ和CaMKⅣ基因表达水平明显降低(P<0.05),CaMKⅡmRNA和蛋白表达水平分别下降了39.3%和58.9%,CAMKⅣmRNA和蛋白表达水平分别下降了51.7%和46.8%(P<0.01)。免疫荧光化学,与对照组比较,ZOL组细胞中CaMKⅡ、Ⅳ蛋白荧光强度明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:ZOL在OC多核化阶段可以明显抑制OC的生成和骨吸收功能,并下调CaMKⅡ和CaMKⅣ基因表达。信号分子CaMKⅡ和CaMKⅣ可能参与了唑来膦酸对OC形成和功能的抑制作用,并在该过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 唑来膦酸 破骨细胞 钙调蛋白依赖性激酶

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CREB和ERK1/2在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用 被引量：2

7

作者 王红美 董伟 +4 位作者 戚孟春 冯晓洁 陆大壮 李任 孙红 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期91-95,共5页

目的探索c AMP反应原件结合蛋白(CREB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)δ调控破骨细胞分化中的作用及分子机制。方法构建Ca MKⅡδR NA干扰载体并转染小鼠R AW264.7细胞,确定其干扰效率。病毒转染细胞... 目的探索c AMP反应原件结合蛋白(CREB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)δ调控破骨细胞分化中的作用及分子机制。方法构建Ca MKⅡδR NA干扰载体并转染小鼠R AW264.7细胞,确定其干扰效率。病毒转染细胞后,用50ng/ml核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导,于不同时间点检测CREB、ERK1/2蛋白磷酸化水平。应用ERK1/2信号阻断剂PD98059处理细胞,检测ERK1/2信号阻断对活化T细胞核因子c1(NFATc1)基因表达及破骨细胞分化的影响。结果 Ca MKⅡδ干扰载体在m RNA和蛋白水平的干扰效率分别为77.2%和70.2%。Ca MKⅡδ干扰可明显降低CREB、ERK1/2蛋白磷酸化水平,下调幅度分别为21%~55%和55%~64%。此外,ERK1/2信号阻断明显下调了NFATc1蛋白表达,使破骨细胞数目、骨吸收陷窝数目及面积分别下降了39.3%、50.0%和52.3%。结论 Ca MKⅡδRNA干扰可明显抑制CREB和ERK1/2蛋白磷酸化;CREB和ERK1/2参与了Ca MKⅡδ对破骨细胞分化的调控。 展开更多

关键词 破骨细胞 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ RNA干扰 cAMP反应原件结合蛋白 细胞外信号调节激酶1/2 活化T细胞核因子c1

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钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ RNA干扰载体构建及对破骨细胞分化和骨吸收的影响 被引量：3

8

作者 王艺睿 王会 +3 位作者 戚孟春 董伟 冯晓洁 孙红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期557-561,共5页

目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的... 目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的重组载体用于后续实验。细胞分为对照组、阴性载体组、干扰载体组;病毒转染5 d后通过TRAP染色及牙本质磨片骨吸收陷窝检测3组破骨细胞生成及骨吸收情况。结果成功构建了3个CaMKⅡγ重组干扰载体;最适MOI值为30,转染效率>80%。#3重组载体干扰效果最佳,干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.16%和67.02%(P <0.01)。3组细胞中,干扰载体组多核破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数和面积较对照组分别下降了59.99%、54.19%和57.94%(P <0.01),而阴性载体组和对照组比较差异无显著性(P> 0.05)。结论 CaMKⅡγ RNA干扰可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能。 展开更多

关键词 钙调蛋白依赖性激酶IIγ 破骨细胞 RNA干扰 慢病毒

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氟化钠对掺锶透钙磷石骨水泥成骨活性的影响 被引量：1

9

作者 张阳阳 王红美 +3 位作者 戚孟春 董伟 简永义 孙红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1824-1827,共4页

探究掺入不同质量氟化钠至锶透钙磷石骨水泥对理化性能及成骨活性的影响。以二水合磷酸氢钙与碳酸钙为原料制备β-磷酸三钙,以氯化锶为原料制备掺锶透钙磷石骨水泥,考察将氟化钠按不同质量比(0.5wt%、1.0wt%、1.5wt%)制备的掺氟锶透钙... 探究掺入不同质量氟化钠至锶透钙磷石骨水泥对理化性能及成骨活性的影响。以二水合磷酸氢钙与碳酸钙为原料制备β-磷酸三钙,以氯化锶为原料制备掺锶透钙磷石骨水泥,考察将氟化钠按不同质量比(0.5wt%、1.0wt%、1.5wt%)制备的掺氟锶透钙磷石骨水泥微观形貌、元素含量、物相形式及抗压强度,MTT法检测细胞增殖,并对其碱性磷酸酶(ALP)和骨保护素OPG mRNA表达进行检测。掺氟锶透钙磷石骨水泥抗压强度低于单一掺锶透钙磷石骨水泥(P>0.05),当氟化钠质量比为1.5wt%时促进MC3T3-E1的增殖及ALP效果最好,1.0wt%时显著促进OPG蛋白表达。 展开更多

关键词 氟化钠 锶 透钙磷石 骨水泥 成骨细胞

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CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的表达规律 被引量：1

10

作者 李瑛 戚孟春 +4 位作者 董伟 王会 冯晓洁 温黎明 孙红 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期240-245,共6页

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。方法:用50 ng/m L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(T... 目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。方法:用50 ng/m L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγm RNA和蛋白表达。结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多。分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγm RNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγm RNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P<0.01)。免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加。结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。 展开更多

关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ 破骨细胞 受体活化核因子-κB配体 抗酒石酸酸性磷酸酶染色

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CaMKⅡδ慢病毒过表达载体构建及其对破骨细胞分化的影响 被引量：1

11

作者 张艳波 戚孟春 +4 位作者 董伟 张广峰 冯晓洁 温黎明 孙红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第13期2123-2127,共5页

目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKⅡδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKⅡδ表达情况;并在分化诱导5 d后... 目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKⅡδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKⅡδ表达情况;并在分化诱导5 d后检测破骨细胞生成及骨吸收情况。结果 CaMKⅡδ转录本2和3在破骨细胞分化中高表达;用转录本2构建了过表达载体,建立了稳定转染株。过表达组CaMKⅡδ mRNA水平较对照组、空载体组分别上升107.8%和85.7%(P<0.05),蛋白水平分别上升37.2%和37.1%(P<0.05),证实重组CaMKⅡδ在细胞中得到有效表达。CaMKⅡδ过表达组破骨细胞数目、牙本质吸收陷窝数和面积与对照组和空载体组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CaMKⅡδ过表达对破骨细胞分化和骨吸收无明显影响。 展开更多

关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性激酶IIδ 基因重组 破骨细胞 慢病毒 核因子ΚB受体活化因子配体

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