利用高通量药物筛选系统研究葡聚糖衍生物的抗乳腺癌活性

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作者 石卫武 蒋明 +3 位作者 黄金麟 曹建华 黄思罗 刘剑峰 《医药导报》 CAS 2007年第10期1121-1123,共3页

目的研究葡聚糖衍生物对乳腺癌的作用。方法以肝素表达缺陷而稳定表达成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的F32细胞系和乳腺癌细胞系MCF-7、MCF-7 ras为模型,利用3H-thymidine摄入技术,研究人工合成的葡聚糖衍生物对细胞生长的影响,并初步探... 目的研究葡聚糖衍生物对乳腺癌的作用。方法以肝素表达缺陷而稳定表达成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的F32细胞系和乳腺癌细胞系MCF-7、MCF-7 ras为模型,利用3H-thymidine摄入技术,研究人工合成的葡聚糖衍生物对细胞生长的影响,并初步探讨其作用机制。结果葡聚糖衍生物能够有效作用于HS/FGF/FGFR复合物,但对两种乳腺癌细胞系具有完全相反的两种作用,即刺激MCF-7的生长而对MCF-7 ras则抑制生长。构效研究发现,磺酸基团和苯环是影响葡聚糖衍生物活性重要基团。结论葡聚糖衍生物与肝素具有相似的性质,对细胞生长具有双重性。 展开更多

关键词 葡聚糖衍生物 乳腺癌 碱性成纤维细胞生长因子

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家蝇蛆抗菌肽提取工艺研究 被引量：24

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作者 陆婕 钟雅 +2 位作者 柳林 付康 陈正望 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期106-112,共7页

蝇蛆抗菌肽多有广谱抗菌、抗癌等功能，是很好的天然抗菌药物来源，但由于得率较低，目前对其产品开发的研究较少。以家蝇Musca domestica干蝇蛆为原料，利用加热．层析法和海藻酸吸附法2种工艺提取蝇蛆抗菌肽。结果表明：加热．层析法... 蝇蛆抗菌肽多有广谱抗菌、抗癌等功能，是很好的天然抗菌药物来源，但由于得率较低，目前对其产品开发的研究较少。以家蝇Musca domestica干蝇蛆为原料，利用加热．层析法和海藻酸吸附法2种工艺提取蝇蛆抗菌肽。结果表明：加热．层析法快速、简便，抗菌肽提取得率达0．26％，是海藻酸吸附法提取抗菌肽得率的5．2倍。提取的家蝇抗菌肽主要是分子量6．2—17．2kD、等电点5．59—5．91的弱酸性小分子多肽，其热稳定性高，能杀灭枯草杆菌Bacillus subtilis等多种革兰氏阳性菌。加热．层析法能有效去除外源性蛋白酶，保证肽类产品的稳定性，同时还能提取出非蛋白类的抗菌成分，提示其对开发具有高附加值的抗菌产品将会有良好的应用前景。 展开更多

关键词 家蝇 抗菌肽 提取工艺 资源利用 抗菌产品

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基于奇值分解的三维光学切片显微图像恢复算法研究 被引量：3

3

作者 李睿凡 郭学彬 瞿安连 《光学精密工程》 EI CAS CSCD 2001年第3期212-215,共4页

阐述了光学切片显微技术的基本原理 ,分析了显微镜光学系统点扩展函数循环矩阵的奇异性造成荧光图像恢复质量大大降低所导致的病态问题 ,应用降质模糊矩阵的奇值分解方法 ,挑选出较大特征值 ,并将空域问题的求解通过傅立叶变换转到频率... 阐述了光学切片显微技术的基本原理 ,分析了显微镜光学系统点扩展函数循环矩阵的奇异性造成荧光图像恢复质量大大降低所导致的病态问题 ,应用降质模糊矩阵的奇值分解方法 ,挑选出较大特征值 ,并将空域问题的求解通过傅立叶变换转到频率域 ,使计算的复杂度降低 ,最终得到较为理想的复原图像。 展开更多

关键词 图像恢复 光学切片显微术 奇值分解 傅立叶变换 图像处理

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三维反卷积显微成像技术浅谈 被引量：1

4

作者 李睿凡 施发刚 瞿安连 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第6期1-3,共3页

三维宽场反卷积显微成像技术是应用光学切片方法获取三维标本的二维图像序列 ,然后通过反卷积图像处理方法进行图像恢复 ,进而进行三维重建的一种以光学技术和图像处理技术为核心的显微成像方法。本文讲述了光学切片的基本原理 ,给出了... 三维宽场反卷积显微成像技术是应用光学切片方法获取三维标本的二维图像序列 ,然后通过反卷积图像处理方法进行图像恢复 ,进而进行三维重建的一种以光学技术和图像处理技术为核心的显微成像方法。本文讲述了光学切片的基本原理 ,给出了反卷积处理中点扩展函数的理论模型和实验测试方法 ,然后对现存的反卷积算法做了对比。最后 ,文章对这一领域的发展趋势作了预测。 展开更多

关键词 光学切片显微技术 点扩展函数 三维反卷积 宽场荧光显微技术 亚细胞研究 显微成像

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线虫基因显微注射和整合技术——设备、操作与指南 被引量：1

5

作者 酒亚明 张蓉颖 吴政星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期648-652,共5页

秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)是研究动物遗传、个体发育和行为活动的重要模式生物,其主要优点是能够研究从分子细胞水平到整体系统水平的相关生命活动的作用机理.其中基因显微注射和整合是该领域的核心技术,广泛应用于研究线虫的... 秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)是研究动物遗传、个体发育和行为活动的重要模式生物,其主要优点是能够研究从分子细胞水平到整体系统水平的相关生命活动的作用机理.其中基因显微注射和整合是该领域的核心技术,广泛应用于研究线虫的基因表达、功能和基因间的相互作用等.显微注射技术使用尖端开口直径为微米级的玻璃微管,将所研究的目的DNA注射进线虫的性腺.注射的DNA被成熟的卵细胞吸收,以染色体外遗传物质的形式存在.但这种形式并不能稳定遗传,可采用基因整合技术将外源基因整合到染色体上,得到稳定遗传的线虫种系.显微注射是一项精细的实验技术,影响实验成功与否的因素较多,实际操作需要有一定的经验.在实践过程中逐步改进和完善了这项技术,在此主要介绍线虫显微注射技术的操作过程、创新方法以及注意细节. 展开更多

关键词 秀丽线虫 基因显微注射 基因整合

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大鼠背根神经节神经元上失活BK通道特性的研究

6

作者 李伟 万有 +2 位作者 韩济生 丁久平 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期408-412,共5页

大电导的电压和Ca2+激活的K+通道(BK通道)在哺乳动物的组织中广泛表达,起着多种多样的作用.目前只有少数组织中BK通道的性质被深入地研究,而且鲜见有失活的BK通道(BKi)的报道,尤其是在神经元中.发现在大鼠小直径的背根神经节(DRG)神经元... 大电导的电压和Ca2+激活的K+通道(BK通道)在哺乳动物的组织中广泛表达,起着多种多样的作用.目前只有少数组织中BK通道的性质被深入地研究,而且鲜见有失活的BK通道(BKi)的报道,尤其是在神经元中.发现在大鼠小直径的背根神经节(DRG)神经元中,普遍存在失活的BK通道.失活的BK电流成分是Ca2+敏感的,可以被大电导的BK通道特异阻断剂ChTX所阻断,而且木瓜蛋白酶可以从胞外改变通道失活的特性. 展开更多

关键词 背根神经节 BK通道 失活

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内质网上的蛋白质RCN2与STIM1-Orai1复合体相互作用(英文) 被引量：4

7

作者 占艺 高尚邦 +3 位作者 薛鹏 阳小飞 李正正 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1247-1253,共7页

膜蛋白质Orai1组成了一类被称为钙释放激活钙通道(CRAC)的离子通道,并且由相互作用的蛋白质STIM1作为其在内质网上的钙感受器.但是这类通道的调节机制还未研究透彻.通过串连亲和纯化STIM1-Orai1复合体,发现与之相互作用的内质网蛋白质RC... 膜蛋白质Orai1组成了一类被称为钙释放激活钙通道(CRAC)的离子通道,并且由相互作用的蛋白质STIM1作为其在内质网上的钙感受器.但是这类通道的调节机制还未研究透彻.通过串连亲和纯化STIM1-Orai1复合体,发现与之相互作用的内质网蛋白质RCN2.共聚焦显微术显示RCN2与STIM1在钙库排空前后完全共定位.对RCN2的EF hands结构突变体所作单细胞测钙,结果显示其对钙库操控通道电流特性有微弱影响.全内反射荧光显微术显示,RCN2以花环状围绕包围STIM1聚集堆,这提示RCN2在STIM1聚集中起到一种结构约束作用. 展开更多

关键词 RCN2 STIM1 Orai1 串连亲和纯化

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荧光测钙装置中单色激发光源的设计和应用 被引量：2

8

作者 周云燕 兰李 +2 位作者 杨志勇 瞿安连 徐涛 《光电工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期24-27,共4页

为了满足胞内荧光测钙实验的需要,设计了一种新型的单色激发光源。其中,短弧氙灯发出的光经椭球反射镜聚焦后采用抛物面反射镜准直成平行光,通过光栅的衍射分光后又经过会聚物镜把光能量会聚到光纤端面,光纤的另一端面输出单色光。采用... 为了满足胞内荧光测钙实验的需要,设计了一种新型的单色激发光源。其中,短弧氙灯发出的光经椭球反射镜聚焦后采用抛物面反射镜准直成平行光,通过光栅的衍射分光后又经过会聚物镜把光能量会聚到光纤端面,光纤的另一端面输出单色光。采用光路偏折的方法,有效地克服了灯源的噪声。结果显示,波长为340nm和380nm的光能量分别可达到30mW和120mW,能很好地满足荧光测钙实验的要求。 展开更多

关键词 单色光源 光学设计 光学系统 荧光测钙

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ATP调控大鼠胰腺β细胞胰岛素分泌的双重作用 被引量：1

9

作者 吴政星 谢丽 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1075-1080,共6页

实验以大鼠胰腺β细胞为研究对象,采用荧光测钙和全细胞膜片钳膜电容测量技术,研究ATP对胞内钙离子信号和细胞分泌的影响,并初步探讨了其作用机制.实验表明:胞外ATP刺激通过动员细胞内thapsigargin敏感的钙库Ca2+释放,使大鼠胰腺β细胞... 实验以大鼠胰腺β细胞为研究对象,采用荧光测钙和全细胞膜片钳膜电容测量技术,研究ATP对胞内钙离子信号和细胞分泌的影响,并初步探讨了其作用机制.实验表明:胞外ATP刺激通过动员细胞内thapsigargin敏感的钙库Ca2+释放,使大鼠胰腺β细胞内的游离钙离子浓度显著升高,细胞外的ATP信号对β细胞胰岛素分泌有双向调节作用,其一,主要通过降低去极化引起的钙电流而对β细胞胰岛素分泌产生较弱的抑制作用,其二,细胞在静息状态下,ATP通过动员胞内钙库的Ca2+释放使胞浆中的钙离子浓度显著增加,触发β细胞强烈分泌胰岛素.ATP的这种双向调节可能对胰岛素分泌的精确调控具有重要的生理意义. 展开更多

关键词 胞外ATP 胞内钙离了浓度 膜电容 胞吐 胰岛素

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硫氧还蛋白促使乳腺癌MCF-7细胞进入S期 被引量：1

10

作者 陈孝平 陈正望 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-157,共4页

目的研究硫氧还蛋白1(thioredoxin-1,Trx-1)对细胞周期的影响。方法用维生素C刺激乳腺癌细胞MCF-7,或者用pcDNA-Trx转染MCF-7使细胞中的Trx-1表达升高,另外在细胞培养液中加入不同浓度的Trx-1;用流式细胞仪检测细胞中进入S期细胞的比例... 目的研究硫氧还蛋白1(thioredoxin-1,Trx-1)对细胞周期的影响。方法用维生素C刺激乳腺癌细胞MCF-7,或者用pcDNA-Trx转染MCF-7使细胞中的Trx-1表达升高,另外在细胞培养液中加入不同浓度的Trx-1;用流式细胞仪检测细胞中进入S期细胞的比例。结果维生素C的刺激使细胞内Trx-1表达上升,更多的细胞进入到S期。转染pcDNA-Trx的细胞Trx-1的表达上升,进入S期的细胞比例明显增加。将Trx-1蛋白加入到培养液中后,进入S期的细胞比例明显地随Trx-1浓度提高而升高。结论无论在细胞外还是细胞内,Trx-1水平的上升均会促使细胞进入S期。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白 细胞周期 MCF-7细胞

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人同种异体移植炎症因子-1的基因克隆及其在小鼠成纤维细胞中的表达

11

作者 付康 程首超 +4 位作者 刘收 陈孝平 陆婕 柳欣 陈正望 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期663-666,共4页

目的构建人同种异体移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)基因的真核表达载体并在小鼠成纤维细胞系(NIH3T3)中表达,为进一步研究AIF-1蛋白的功能奠定基础。方法利用基因重组技术,构建带有AIF-1基因的2种重组真核表达... 目的构建人同种异体移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)基因的真核表达载体并在小鼠成纤维细胞系(NIH3T3)中表达,为进一步研究AIF-1蛋白的功能奠定基础。方法利用基因重组技术,构建带有AIF-1基因的2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1。利用脂质体法将2种重组质粒分别转染NIH3T3细胞,用荧光倒置显微镜及Western blot方法观察及鉴定AIF-1在细胞中的稳定表达及瞬时表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实,AIF-1基因片段被分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)与pEGFP-C1。荧光显微镜观察到NIH3T3细胞中有绿色荧光分布。Western blot结果表明,转染重组质粒的NIH3T3细胞中,AIF-1表达量明显增高。结论成功构建了2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1,经转染NIH3T3细胞株获得了AIF-1蛋白的瞬时表达及稳定表达。 展开更多

关键词 同种异体移植因子-1 NIH3T3细胞 转染 基因表达

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磷脂酰肌醇-3激酶不直接调控PC12细胞的分泌 被引量：1

12

作者 刘媛媛 赵平 +2 位作者 吴政星 瞿安连 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期734-739,共6页

磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是磷脂酰肌醇代谢过程中一种重要的酶,通过其代谢产物参与了对多种细胞生理活动的调节,如囊泡运输、细胞骨架重组、细胞存活、吞噬作用、细胞凋亡等.为研究其对细胞分泌功能的作用,使用磷脂酰肌醇-3激酶家族的特... 磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是磷脂酰肌醇代谢过程中一种重要的酶,通过其代谢产物参与了对多种细胞生理活动的调节,如囊泡运输、细胞骨架重组、细胞存活、吞噬作用、细胞凋亡等.为研究其对细胞分泌功能的作用,使用磷脂酰肌醇-3激酶家族的特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)阻断磷脂酰肌醇-3激酶的活性,以EGFP-2xFYVE融合蛋白与磷脂酰肌醇-3-磷酸(PtdIns-3-P)的结合为指征,使用荧光显微成像技术检测渥曼青霉素对磷脂酰肌醇-3激酶的抑制作用,采用膜片钳膜电容测量方法及光解钙离子释放技术检测渥曼青霉素对PC12细胞分泌功能的影响.实验结果表明,wortmannin阻断了磷脂酰肌醇-3激酶的活性,抑制了磷脂酰肌醇-3-磷酸(PtdIns-3-P)的产生,并使FYVE与PtdIns-3-P解离,但渥曼青霉素处理之前和处理30min后的PC12细胞分泌反应的幅度、动力学特性和分泌的钙依赖性均无显著差异,表明磷脂酰肌醇-3激酶对PC12细胞的分泌无显著的直接影响. 展开更多

关键词 磷酸酰肌醇-3激酶 渥曼青霉素 PC12细胞 分泌动力学 钙依赖性 钙离子光解释放技术 EGFP-2xFYVE融合蛋白

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膜片钳放大器的低噪声设计 被引量：3

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作者 康国新 邹寿彬 +2 位作者 陈良怡 杨岳峰 康华光 《电子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第9期42-45,共4页

本文论述用于测量细胞膜离子通道电流的放大器的电路方案 .因被测电流在 1pA到nA级的范围内 ,而输出电压要求达到计算机便于处理的数值 .故需采用多级放大电路 .被测电流属极微弱的信号 ,噪声问题是设计中的关键 .对于多级放大器来说 ,... 本文论述用于测量细胞膜离子通道电流的放大器的电路方案 .因被测电流在 1pA到nA级的范围内 ,而输出电压要求达到计算机便于处理的数值 .故需采用多级放大电路 .被测电流属极微弱的信号 ,噪声问题是设计中的关键 .对于多级放大器来说 ,前置放大级 (探头电路 )的低噪声设计至关重要 .文中分析放大电路中的主要元、器件的背景噪声 ,用噪声电流和噪声电压的功率密度谱 (PDS)SI(f)和Sv(f)来表征其特性 .给出了所设计的PC Ⅱ型膜片钳放大器的主要性能参数和记录的电流波形 . 展开更多

关键词 膜片钳 放大器 低噪声设计

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基于荧光显微镜单色光源系统的椭球反射镜的设计 被引量：3

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作者 秦泰然 瞿安连 《应用光学》 CAS CSCD 2007年第6期720-723,共4页

为了实现胞内钙离子浓度的检测,设计了一种新型的荧光显微镜单色光源系统。系统采用短弧氙灯作为发光源,利用椭球面反射镜聚焦后得到模拟的点光源,经过准直及闪耀光栅分光、汇聚后,耦合到光纤中形成单色光输出。在荧光显微镜照明激发系... 为了实现胞内钙离子浓度的检测,设计了一种新型的荧光显微镜单色光源系统。系统采用短弧氙灯作为发光源,利用椭球面反射镜聚焦后得到模拟的点光源,经过准直及闪耀光栅分光、汇聚后,耦合到光纤中形成单色光输出。在荧光显微镜照明激发系统中,单色光源的输出功率和光谱纯度是仪器的2个技术关键,其中非球面反射镜是设计的重点。通过优化算法和光学仿真模拟,对系统的光能效率进行了分析和计算,设计了用于单色光源系统的椭球面反射镜,并研制成整套系统。经实验验证,效果良好。 展开更多

关键词 椭球面反射镜 单色光源 优化算法 光学设计

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抗人硫氧还蛋白-1单克隆抗体的制备与鉴定及初步应用

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作者 唐文心 王建和 +1 位作者 陈正望 陈孝平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期597-600,共4页

目的:制备抗硫氧还蛋白-1(TRX-1)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以原核表达的TRX-1为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲... 目的:制备抗硫氧还蛋白-1(TRX-1)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以原核表达的TRX-1为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析,用Westernblot法对mAb的特异性进行鉴定。结果:得到筛选出3株能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株B6、D5和E3,免疫球蛋白亚类均为IgG1(κ),腹水mAb效价均在106以上,3株抗体分别针对不同抗原表位。用mAb建立的竞争抑制ELISA灵敏度达1.22μg/L。结论:获得3株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株,为研究TRX-1在人类细胞、血液、组织中的表达及定位提供了可能,并为探索相关炎症、癌症发病机制及新治疗方法提供了强有力的工具。 展开更多

关键词 人硫氧还蛋白-1 单克隆抗体 竞争抑制ELISA

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电压钳控制电流钳的设计

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作者 熊俊 樊枫 瞿安连 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第4期465-470,共6页

研究证明,传统膜片钳放大器在电流钳模式下记录到的快速电压信号会存在失真,且造成失真的根本原因是由于膜片钳的探头电路设计.为了克服这些缺陷重新设计了一种探头,新探头电路不仅能像传统的电压跟随器一样测量瞬态电压,而且适用于传... 研究证明,传统膜片钳放大器在电流钳模式下记录到的快速电压信号会存在失真,且造成失真的根本原因是由于膜片钳的探头电路设计.为了克服这些缺陷重新设计了一种探头,新探头电路不仅能像传统的电压跟随器一样测量瞬态电压,而且适用于传统的电压钳工作模式.此外,一种命名为电压钳控制的电流钳技术被应用来改进传统的膜片钳放大器.用可变的低通滤波器来调整电压钳模块的响应速度,从而在实现膜电位钳位的同时准确记录快速电压信号.桥平衡电路用来消除命令电流流过串联电阻时带来的电压误差.而传统膜片钳中的快电容补偿环节则被改进用来补偿电极分布电容和探头放大器输入电容并提高电流钳模式下系统的响应速度.细胞模型实验结果表明,改进后的膜片钳放大器能够满足电生理研究中快速电位变化测量的需要. 展开更多

关键词 膜片钳放大器 电流钳 电压钳控制电流钳 低通滤波器 桥平衡 电容补偿

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一种新的膜片钳放大器监测通路设计方法

17

作者 胡刚 瞿安连 《电子测量与仪器学报》 CSCD 2007年第2期66-69,共4页

为了准确的记录细胞离子通道电流信号,本文介绍了一种新的膜片钳放大器的监测通路设计方法,文章首先对前置放大器设计与其动态模型分析做出描述,通过新的电路设计配合软件算法实现了模拟信号的数字控制,自动实现了离子通道信号的重建,... 为了准确的记录细胞离子通道电流信号,本文介绍了一种新的膜片钳放大器的监测通路设计方法,文章首先对前置放大器设计与其动态模型分析做出描述,通过新的电路设计配合软件算法实现了模拟信号的数字控制,自动实现了离子通道信号的重建,而且用户可在任何需要时候方便的完成通路的调试和校准以确保了实验精度。标准细胞模型和噪声测试结果表明该通路设计性能良好,可满足全细胞与单通道实验要求。 展开更多

关键词 膜片钳放大器 前置放大器 频率补偿 低通滤波器

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