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ES细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究
被引量:
7
1
作者
胡安斌
蔡继业
+6 位作者
郑启昌
洪岸
何晓青
戴云
单于
潘运龙
李凌松
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期518-522,共5页
探讨了肝细胞在胚胎干细胞 (EScell)体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法 .利用TGF ,bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导 .利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫细胞化学 (ICC)和放...
探讨了肝细胞在胚胎干细胞 (EScell)体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法 .利用TGF ,bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导 .利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫细胞化学 (ICC)和放射免疫法 (RIA)动态检测肝细胞特异性基因和蛋白AFP ,ALB ,G6P ,TAT ,CK8,CK18等在培养体系中的表达 ,并测定肝细胞的尿素合成功能 ,最后测定肝细胞分化率 .结果 ,肝细胞特异基因AFP ,ALB ,G6P和TAT最早分别于第 3、 9、 11、 13天表达 ,肝细胞特异蛋白AFP ,CK8,CK18和ALB最早分别于第 7、 9、 9和 11天开始表达 .第 12天开始检测到尿素出现 ,浓度为 8 3μmol/L ,并随培养时间延长而浓度逐渐增加 .最后 ,测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为 32 % ,对照组肝细胞分化率为 8% .说明肝细胞可以在ES细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化 ,bFGF、HGF、OSM等可以明显提高细胞分化率和成熟度 ,有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望 .
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关键词
胚胎干细胞
肝细胞
定向分化
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职称材料
胚胎干细胞向肝实质细胞体外定向诱导分化过程中的肝卵圆细胞
被引量:
1
2
作者
银东智
蔡继业
+5 位作者
郑启昌
肇静娴
刘美莉
戴云
谢秋玲
洪岸
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第10期959-968,共10页
如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞——肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复.基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆...
如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞——肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复.基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型.但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型.选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化3天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)作定向诱导分化.其间用免疫细胞化学(ICC)检测肝卵圆细胞标志物A6等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行RT-PCR、透射电镜检测.所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行ICC和RT-PCR,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力.研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段.诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达6.11%左右.HGF和EGF能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成.流式细胞仪筛选Sca-1+/CD34+细胞占总细胞数的4.59%,其中A6阳性肝卵圆细胞占90.81%左右.使用流式细胞仪可获得高富集的A6+/Sca-1+/CD34+肝卵圆细胞.提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型.
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关键词
A6
肝卵圆细胞
胚胎干细胞
细胞分化
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职称材料
题名
ES细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究
被引量:
7
1
作者
胡安斌
蔡继业
郑启昌
洪岸
何晓青
戴云
单于
潘运龙
李凌松
机构
暨南
大学
生命科
学院
华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心
中山
大学
医学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期518-522,共5页
基金
国家重点基础研究发展规划项目(973)(2 0 0 1CB5 10 10 1)
国家自然科学基金(重点项目3 0 2 3 0 3 5 0
面上项目60 2 780 14)资助~~
文摘
探讨了肝细胞在胚胎干细胞 (EScell)体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法 .利用TGF ,bFGF、HGF等细胞生长因子进行BALB/c小鼠ES细胞向肝细胞方向的定向诱导 .利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫细胞化学 (ICC)和放射免疫法 (RIA)动态检测肝细胞特异性基因和蛋白AFP ,ALB ,G6P ,TAT ,CK8,CK18等在培养体系中的表达 ,并测定肝细胞的尿素合成功能 ,最后测定肝细胞分化率 .结果 ,肝细胞特异基因AFP ,ALB ,G6P和TAT最早分别于第 3、 9、 11、 13天表达 ,肝细胞特异蛋白AFP ,CK8,CK18和ALB最早分别于第 7、 9、 9和 11天开始表达 .第 12天开始检测到尿素出现 ,浓度为 8 3μmol/L ,并随培养时间延长而浓度逐渐增加 .最后 ,测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为 32 % ,对照组肝细胞分化率为 8% .说明肝细胞可以在ES细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化 ,bFGF、HGF、OSM等可以明显提高细胞分化率和成熟度 ,有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望 .
关键词
胚胎干细胞
肝细胞
定向分化
Keywords
ES cells
hepatocytes
differentiation
分类号
Q254 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
胚胎干细胞向肝实质细胞体外定向诱导分化过程中的肝卵圆细胞
被引量:
1
2
作者
银东智
蔡继业
郑启昌
肇静娴
刘美莉
戴云
谢秋玲
洪岸
机构
暨南
大学
生命科
学院
华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心
华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科中心
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005年第10期959-968,共10页
基金
国家重点基础研究发展规划(973)项目(2001CB510101)
国家自然科学基金重点项目(30230350)
+1 种基金
国家自然科学基金项目(60278014)
广东省自然科学基金项目(36704)~~
文摘
如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因(肝毒性物质、致癌物质的作用)抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体/干细胞——肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复.基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型.但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型.选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化3天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)作定向诱导分化.其间用免疫细胞化学(ICC)检测肝卵圆细胞标志物A6等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行RT-PCR、透射电镜检测.所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行ICC和RT-PCR,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力.研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段.诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达6.11%左右.HGF和EGF能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成.流式细胞仪筛选Sca-1+/CD34+细胞占总细胞数的4.59%,其中A6阳性肝卵圆细胞占90.81%左右.使用流式细胞仪可获得高富集的A6+/Sca-1+/CD34+肝卵圆细胞.提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型.
关键词
A6
肝卵圆细胞
胚胎干细胞
细胞分化
Keywords
A6, hepatic oval cells, embryonic stem cells, cell differentiation
分类号
Q254 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ES细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究
胡安斌
蔡继业
郑启昌
洪岸
何晓青
戴云
单于
潘运龙
李凌松
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004
7
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职称材料
2
胚胎干细胞向肝实质细胞体外定向诱导分化过程中的肝卵圆细胞
银东智
蔡继业
郑启昌
肇静娴
刘美莉
戴云
谢秋玲
洪岸
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
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