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miR-362-3p调控垂体肿瘤转化基因1抑制口腔鳞状细胞癌侵袭及增殖的研究 被引量:3
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作者 丁啸 陈嘉雯 +4 位作者 曲鹏宇 孙晨雨 李洪利 胡温庭 范欣 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期46-55,共10页
目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PT... 目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PTTG1在Cal-27、HN-30以及HOK细胞系中的表达。划痕愈合实验、Transwell侵袭实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测PTTG1对Cal-27、HN-30细胞迁移、侵袭、增殖的影响。生物信息学在线数据库预测PTTG1的上游miRNA,双荧光素酶实验检测结合情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该miRNA在组织中的表达。结果ENCORI数据库结果显示PTTG1在OSCC组织中表达上调;Western blot实验显示Cal-27、HN-30细胞中PTTG1表达量较HOK细胞中高。转染Si-PTTG1质粒的Cal-27、HN-30细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞增殖能力均较对照组降低(P<0.05)。通过网站预测出PTTG1的上游miRNA为miR-362-3p,双荧光素酶实验检测出PTTG1与miR-362-3p存在结合位点;qRT-PCR检测结果显示miR-362-3p在OSCC肿瘤组织中相对于正常组织表达下调(P<0.05);并且敲低miR-362-3p的表达后能够促进敲低PTTG1后的Cal-27、HN-30侵袭和增殖。结论miR-362-3p可通过靶向PTTG1抑制Cal-27、HN-30细胞侵袭、增殖。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 垂体肿瘤转化基因1 微小RNA 侵袭 增殖
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Sirtuins家族和线粒体未折叠蛋白反应在疾病中的研究进展 被引量:1
2
作者 徐常玮(综述) 张涓(综述) +2 位作者 申亮亮(综述) 吴元明(审校) 张静(审校) 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期559-562,共4页
线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)是一种适应性细胞内应激机制,通过促进编码线粒体伴侣蛋白和蛋白酶的基因转录来响应应激信号。随着研究的深入,UPRmt在疾病中的作用机制已逐渐明确。沉默信息调节因子(Sirtuins)是一类进化上高度保守的NAD+... 线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)是一种适应性细胞内应激机制,通过促进编码线粒体伴侣蛋白和蛋白酶的基因转录来响应应激信号。随着研究的深入,UPRmt在疾病中的作用机制已逐渐明确。沉默信息调节因子(Sirtuins)是一类进化上高度保守的NAD+依赖性组蛋白去酰基酶,是多种生物过程中的关键信号通路。近年来Sirtuins在衰老和代谢中的多种调节功能相继报道,也有研究明确了UPRmt和Sirtuins家族之间存在着重要联系。该文总结了Sirtuins与UPRmt的最新研究成果,并归纳了两者在衰老、肿瘤以及代谢性疾病中的作用机制,阐明了Sirtuins与UPRmt在疾病中的研究进展。 展开更多
关键词 SIRTUINS 线粒体未折叠蛋白反应 衰老 肿瘤 线粒体 代谢性疾病
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PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究 被引量:7
3
作者 陈为一 李小龙 +5 位作者 齐岳亮 李洪利 尹崇高 刘晓丽 张宝刚 郭文君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期329-332,共4页
背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用... 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87)中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。 展开更多
关键词 胶质瘤 侵袭 垂体肿瘤转化基因1 ARK5 SIRNA
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靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究 被引量:4
4
作者 张丽娜 刘菲 +6 位作者 孙磊 田慧玲 陈为一 李洪利 张宝刚 尹崇高 郭文君 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期345-348,共4页
目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法... 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance p rotein,LRP)的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail,采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。Snail下降后,Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果:Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73.1%、53.8%、51.9%,P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因;A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论:在NSCLC中,Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关;阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。 展开更多
关键词 非小细胞肺 转录因子 SNAIL 上皮一间质转化 P-gp LRP
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CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究 被引量:3
5
作者 陈萍萍 田红艳 +4 位作者 李洪利 史立宏 任甜甜 翟丽敏 张宝刚 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期921-925,共5页
背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶... 背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。 展开更多
关键词 胶质瘤 Nir1 AKT 侵袭 SIRNA
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Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究 被引量:5
6
作者 孙磊 刘雨清 +4 位作者 李小龙 刘菲 张丽娜 李洪利 张宝刚 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期551-554,共4页
目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及... 目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 ARK5 Gab2 LN-229细胞 小RNA干扰 侵袭
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肿瘤 miRNAs 调控机制的研究进展与展望 被引量:18
7
作者 黄辰 刘利英 +1 位作者 倪磊 宋土生 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期429-434,共6页
微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是一类不同于mRNA的非蛋白编码的小RNA,其通过结合靶mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR),抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA。miRNA在肿瘤发生、生长、迁移与侵袭过程中发挥了重要作用。miRNA的... 微小RNA(micro RNAs,miRNAs)是一类不同于mRNA的非蛋白编码的小RNA,其通过结合靶mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR),抑制靶mRNA的翻译或降解靶mRNA。miRNA在肿瘤发生、生长、迁移与侵袭过程中发挥了重要作用。miRNA的调控与其在肿瘤中的功能密切相关。竞争性内源性RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)及RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)参与了miRNA靶基因的表达调控,可能是miRNA在不同肿瘤组织及细胞中功能多样化与复杂化的原因之一。研究miRNA在特定细胞中网络调控机制的新技术是未来的新方向。 展开更多
关键词 sncRNA MIRNA 表达调控 肿瘤
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无花果枝提取物体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究 被引量:4
8
作者 解美娜 李锋杰 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2010年第2期219-222,共4页
为探讨新鲜无花果枝提取物(FBE)对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响,用不同浓度FBE处理胃癌BGC-823细胞,采用细胞形态学观察,细胞活力测定(MTT法)及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况来评价FBE对BGC-823细... 为探讨新鲜无花果枝提取物(FBE)对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响,用不同浓度FBE处理胃癌BGC-823细胞,采用细胞形态学观察,细胞活力测定(MTT法)及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况来评价FBE对BGC-823细胞体外增殖的影响,应用流式细胞术的膜联蛋白V/碘化丙啶技术(Annexin V/PI法)检测FBE诱导BGC-823细胞体外凋亡的情况。形态学观察发现中高剂量(>0.5mg/mL)组处理4h细胞出现明显凋亡,24h检测到中高剂量(>0.5mg/mL)组细胞增殖活力和增殖细胞核抗原表达显著降低(P<0.05),流式细胞仪检测到FBE处理4h所有剂量组细胞平均凋亡率(9.76%,10.87%,14.29%,49.67%,71.37%)均高于对照组(6.1%)(P<0.05或P<0.01),以上作用效果呈现剂量依赖性。以上结果说明无花果枝提取物能够通过诱导胃癌BGC-823细胞凋亡从而抑制其体外的生长与增殖。 展开更多
关键词 无花果枝提取物 胃癌细胞 增殖 凋亡
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基于单细胞和转录物组测序筛选结直肠癌双硫死亡相关诊疗靶标
9
作者 杨洋 马意轩 +5 位作者 樊欣悦 赵文雪 祁一鸣 高宁 赵菊梅 杜娟 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第10期1529-1540,共12页
双硫死亡状态与肿瘤患者炎症反应、免疫抑制和药物敏感性相关。然而,其在结直肠癌诊疗中的价值尚不清楚。基于此,研究使用单细胞测序数据和细胞特异性标记基因分析双硫死亡与不同结直肠癌细胞类型的相关性,发现结直肠癌高双硫死亡区域... 双硫死亡状态与肿瘤患者炎症反应、免疫抑制和药物敏感性相关。然而,其在结直肠癌诊疗中的价值尚不清楚。基于此,研究使用单细胞测序数据和细胞特异性标记基因分析双硫死亡与不同结直肠癌细胞类型的相关性,发现结直肠癌高双硫死亡区域集中于上皮类细胞中。结合程序性细胞死亡蛋白1抑制剂治疗结直肠癌患者的肿瘤组织差异基因表达数据,建立双硫死亡相关预后模型分析发现,高双硫死亡水平结直肠癌患者风险较低,免疫治疗敏感性高。结合空间转录物组学分析发现,双硫死亡相关基因泛醇细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ(ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1,UQCRC1)是潜在的结直肠癌诊疗靶点,其表达在上皮类结直肠癌细胞中较高,与结直肠癌免疫浸润区域存在共定位。进一步的生信分析和实验检测显示,UQCRC1在结直肠癌组织中低表达,过表达UQCRC1可抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移,是潜在的结直肠癌诊疗靶点。 展开更多
关键词 泛醇细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ 双硫死亡 结直肠癌
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脱脂乳发酵体系中混合乳酸菌的HPLC研究 被引量:2
10
作者 张天亮 王霞 饶平凡 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第6期19-21,25,共4页
研究了对脱脂乳发酵体系中Hansen DVS发酵后混合乳酸菌的HPLC分析过程中,不同色谱条件对分离效果的影响。确立了最佳色谱条件:样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以浓度为0.02 mol/L哌嗪-HC1缓冲液平衡,洗脱盐... 研究了对脱脂乳发酵体系中Hansen DVS发酵后混合乳酸菌的HPLC分析过程中,不同色谱条件对分离效果的影响。确立了最佳色谱条件:样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以浓度为0.02 mol/L哌嗪-HC1缓冲液平衡,洗脱盐浓度为1.0 mol/L的NaC1,洗脱梯度为0~0.75 mol/L的NaCl线性梯度洗脱30 min,再经浓度为0.75~1 mol/L的NaCl线性梯度洗脱10 min以及浓度为1 mol/L的NaC1洗脱10 min,流速定为1 mL/min;并对脱脂乳中不同培养时间的Hansen DVS混合乳酸菌进行了色谱表征。首次对脱脂乳发酵体系中混合乳酸菌的HPLC分析最佳色谱条件的建立,为深入研究发酵过程中乳酸菌混合菌群的动态变化提供了一种快速有效的方法。 展开更多
关键词 发酵 乳酸菌 HPLC 色谱条件
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miR-185-5p影响小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移的研究 被引量:1
11
作者 刘璐 赵燕乔 +4 位作者 王晓娜 王坤 尹崇高 刘清华 李洪利 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1126-1132,共7页
目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术... 目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡能力的影响;利用C57BL/6小鼠建立皮下肿瘤模型和肺转移模型,观察过表达miR-185-5p对体内肿瘤增殖能力以及肺部转移情况的变化。结果 EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术结果分别显示,敲低miR-185-5p使PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著增强,抑制细胞凋亡;而过表达miR-185-5p抑制PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡;C57BL/6小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-185-5p减缓C57BL/6小鼠体内肿瘤生长速度;肺转移实验显示,过表达miR-185-5p抑制C57BL/6小鼠肺转移能力。结论 miR-185-5p作为抑癌基因抑制小鼠乳腺癌PY8119细胞体内外增殖、侵袭迁移的能力。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-185-5p 增殖 侵袭 皮下肿瘤模型
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miRNA及其靶位点多态性的研究进展 被引量:7
12
作者 刘利英 徐纪茹 +1 位作者 宋土生 黄辰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1091-1096,共6页
微RNA(microRNA,miRNA)是一类进化上保守、长度为21~23nt的非编码单链小RNA,参与个体发育、器官形成、细胞增殖、分化和细胞凋亡等生物学过程,并在其中发挥重要的调节作用。近年来研究发现,miRNA及其靶位点的多态将引起不同类型的疾患... 微RNA(microRNA,miRNA)是一类进化上保守、长度为21~23nt的非编码单链小RNA,参与个体发育、器官形成、细胞增殖、分化和细胞凋亡等生物学过程,并在其中发挥重要的调节作用。近年来研究发现,miRNA及其靶位点的多态将引起不同类型的疾患。文章主要从miRNA及其靶位点的多态类型,以及由多态性引起的相关疾病等方面来阐述miRNA的最新进展。 展开更多
关键词 MIRNA 基因多态性 疾病
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miR-186-5p调控PRKAA2促进肺腺癌细胞铁死亡的机制研究 被引量:1
13
作者 刘璐 管欣 +4 位作者 赵燕乔 王晓娜 尹崇高 刘清华 李洪利 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期813-821,共9页
背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁... 背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。方法前期研究获得肺癌中表达显著下调的miRNA,即miR-186-5p;生物信息学方法预测其下游铁死亡相关靶蛋白并查询其在肺腺癌中的表达水平及对患者生存预后的影响;双荧光素酶验证两者结合位点;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测过表达miR-186-5p后PRKAA2的基因和蛋白表达情况;EdU、Transwell、划痕实验验证miR-186-5p在A549、H1299细胞中的增殖、侵袭迁移能力的影响以及miR-186-5p对Fer-1抑制铁死亡敏感性的作用机制;活性氧(reactive oxygen species,ROS)实验检测miR-186-5p对肺腺癌细胞ROS含量的影响;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞铁死亡指标变化的影响;脂质ROS(lipid ROS,L-ROS)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞L-ROS含量的影响。结果PRKAA2在肺腺癌中表达上调;过表达miR-186-5p使PRKAA2的基因和蛋白表达量下降;过表达miR-186-5p通过调控PRA2促进铁死亡抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力;miR-186-5p能够增加A549细胞ROS含量;过表达miR-186-5p和敲低PRKAA2上调肺腺癌细胞MDA含量,下调还原型GSH含量;miR-186-5p通过靶向PRKAA2增加肺腺癌细胞L-ROS含量,促进肺腺癌细胞铁死亡敏感性。结论miR-186-5p通过靶向调控PRA2促进肺腺癌A549、H1299细胞铁死亡,从而抑制肺腺癌增殖、侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 肺肿瘤 miR-186-5p PRKAA2 增殖 侵袭 迁移 铁死亡
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p42^MAPK siRNA诱导HeLa细胞凋亡的相关基因表达研究 被引量:2
14
作者 刘利英 黄辰 +4 位作者 李宗芳 宋土生 倪磊 罗禹 赵小鸽 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期129-132,共4页
目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默HeLa细胞MAPK p42,研究其诱导细胞凋亡的分子机制。方法将筛选的MAPK p42靶向小干扰RNA(p42MAPKsiRNA)用脂质体转染至HeLa细胞。激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA处理的细胞内钙变化,免疫组织化学法检测细胞B... 目的应用小干扰RNA(siRNA)沉默HeLa细胞MAPK p42,研究其诱导细胞凋亡的分子机制。方法将筛选的MAPK p42靶向小干扰RNA(p42MAPKsiRNA)用脂质体转染至HeLa细胞。激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA处理的细胞内钙变化,免疫组织化学法检测细胞Bcl-2和Bax的表达,流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的活性。结果小干扰RNA-1和小干扰RNA-2均可诱导HeLa细胞内钙升高,导致Bcl-2表达下调和Bax表达上调,但是Caspase-3未参与细胞凋亡过程。结论MAPK p42小干扰RNA介导的HeLa细胞凋亡与Bcl-2/Bax通路有关。 展开更多
关键词 MAPK P42 小干扰RNA Bcl-2 Bax 细胞凋亡 HELA细胞
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中国特有金钱槭属植物物种分化研究 被引量:2
15
作者 柏国清 李思锋 +3 位作者 李为民 李忠虎 杨娟 赵桂仿 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1123-1128,共6页
金钱槭属(Dipteronia Oliv.)隶属于槭树科(Aceraceae),是北温带植物区系中古老、残遗的木本属之一,为中国特有属,属下仅包括金钱槭(D.sinensis Oliv.)和云南金钱槭(D.dyerana Henry)2个物种。本实验从形态学、分子遗传学及基因序列分析... 金钱槭属(Dipteronia Oliv.)隶属于槭树科(Aceraceae),是北温带植物区系中古老、残遗的木本属之一,为中国特有属,属下仅包括金钱槭(D.sinensis Oliv.)和云南金钱槭(D.dyerana Henry)2个物种。本实验从形态学、分子遗传学及基因序列分析等方面对金钱槭(D.sinensis Oliv.)和云南金钱槭(D.dyerana Henry)进行对比研究,探讨其物种间分化程度。结果表明:(1)形态学研究显示两物种形态性状存在显著差异,表明其在形态上发生了显著分化;(2)基因组DNA的AFLP标记分析表明,两物种间存在极显著遗传分化(ΦST=0.390 4),在物种水平及群体水平,两物种遗传多样性及遗传变异水平皆有明显差异(金钱槭>云南金钱槭);(3)从GenBank数据库中选出2物种已知的叶绿体基因(psbM-trnD、trnD-trnT、trnL、trnL-trnF、rpl16)和核基因ITS(ITS1、5.8SRNA、ITS2)进行序列进化比对分析,t-test检验表明,2物种叶绿体基因序列间有极显著差异。研究结果表明:金钱槭和云南金钱槭两物种间产生了极显著的分化,推测可能由于长期的地理隔离所致。 展开更多
关键词 金钱槭 云南金钱槭 形态学 分子遗传学 种间分化
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东亚七筋姑的传粉生物学研究 被引量:1
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作者 柏国清 杨娟 +3 位作者 黄兆辉 郭志刚 刘占林 赵桂仿 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1170-1175,共6页
以陕西镇坪化龙山地区的东亚七筋姑自然居群为对象,通过重力玻片法、套袋法和人工授粉对其进行连续的传粉生物学观察和研究,以明确其散粉规律和繁育系统.结果表明,东亚七筋姑的花期在五月中下旬,单花花期2~3d,整个花序的花期随花序大... 以陕西镇坪化龙山地区的东亚七筋姑自然居群为对象,通过重力玻片法、套袋法和人工授粉对其进行连续的传粉生物学观察和研究,以明确其散粉规律和繁育系统.结果表明,东亚七筋姑的花期在五月中下旬,单花花期2~3d,整个花序的花期随花序大小的不同而异,一般为3~7d;东亚七筋姑为虫媒传粉,其访花昆虫大多为小型昆虫,主要种类有小型甲虫、蚁类和蝇类等;东亚七筋姑自花传粉是可育的,存在异花传粉,不存在无融合生殖,自然条件下结籽率为58%,人工异株异花授粉结籽率为82%.可见,东亚七筋姑的繁育系统为兼性异交类型,需要传粉者. 展开更多
关键词 东亚七筋姑 传粉生物学 传粉 访花昆虫 繁育系统 结籽率
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全脂乳中2种乳酸菌的HPLC研究
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作者 张天亮 王霞 饶平凡 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第7期8-11,共4页
研究了可应用于高效液相离子交换色谱分析的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌的培养方法,同时探讨了全脂乳中培养的乳酸菌HPLC上样菌悬液的制备方法。对全脂乳中培养不同时间的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌进行色谱表征,并首次发现保加利亚乳... 研究了可应用于高效液相离子交换色谱分析的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌的培养方法,同时探讨了全脂乳中培养的乳酸菌HPLC上样菌悬液的制备方法。对全脂乳中培养不同时间的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌进行色谱表征,并首次发现保加利亚乳杆菌在全脂乳培养过程中菌体形态变化与色谱表征的一致性。 展开更多
关键词 嗜热链球菌 保加利亚乳杆菌 全脂乳 色谱
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LncRNA SNHG12与EPHB 3竞争性结合miR-326促进乳腺癌的进展
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作者 李勇 全翊宁 +2 位作者 王坤 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第9期1310-1319,共10页
乳腺癌(breast cancer,BRCA)的高转移与复发率使其成为全球癌症相关死亡的主要原因之一,探索其分子机制就显得尤为重要。课题组前期研究已证明,miR-326调控EPHB 3抑制BRCA细胞的进展。本研究进一步探讨LncRNA通过竞争性内源RNA(competin... 乳腺癌(breast cancer,BRCA)的高转移与复发率使其成为全球癌症相关死亡的主要原因之一,探索其分子机制就显得尤为重要。课题组前期研究已证明,miR-326调控EPHB 3抑制BRCA细胞的进展。本研究进一步探讨LncRNA通过竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)机制与EPHB 3竞争性结合miR-326影响BRCA进展的分子机制。通过生物信息学分析筛选出与miR-326具有潜在结合位点的LncRNA SNHG12,结果显示,SNHG12在BRCA组织中显著高表达,且与miR-326之间存在表达水平的负相关趋势,与EPHB3之间存在正相关趋势,提示其可能参与ceRNA调控网络。核质分离实验表明,SNHG12主要定位于胞质,双荧光素酶报告实验验证了其可直接结合miR-326。功能实验表明,敲低SNHG12可显著抑制BRCA细胞的增殖、侵袭与迁移;而抑制miR-326则会逆转此效应。此外,生物素标记的miRNA下拉检测结果显示,SNHG12和EPHB3在miR-326的下拉产物中显著富集,提示二者可与miR-326直接结合。Western印迹和挽救实验表明,SNHG12通过吸附miR-326解除其对EPHB 3的抑制作用,进而上调EPHB 3表达,促进BRCA细胞的增殖、侵袭与迁移能力。综上,本研究首次阐明LncRNA SNHG12通过ceRNA机制调控miR-326/EPHB3轴在BRCA中发挥促癌作用。提示SNHG12/miR-326/EPHB 3通路可能成为BRCA分子诊断与靶向治疗的潜在新靶点。 展开更多
关键词 乳腺癌 长非编码RNA SNHG12 miR-326 EPH受体B3 竞争性内源性RNA 侵袭 迁移
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miR-185-5p靶向负调控TM9SF1对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响
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作者 王晓娜 龚秀莹 +5 位作者 赵苗苗 刘清华 李勇 王坤 尹崇高 李洪利 《解放军医学杂志》 北大核心 2025年第5期566-574,共9页
目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRT... 目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRTarbase和DIANA-microT-CD预测miR-185-5p靶向结合的蛋白,使用HADb网站下载自噬相关蛋白,将4个数据库所得结果取交集,通过StarBase数据库分析交集结果VEGFA和TM9SF1的生存曲线。分别将TM9SF13'UTR(WT)或TM9SF1 3'UTR(MUT)报告质粒与miR-185-5p对照质粒(CON)或miR-185-5p过表达质粒(over-miR-185-5p)共转染HEK-293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-185-5p与TM9SF1的结合位点及荧光素酶活性。采用Western blotting检测转染miR-185-5p过表达质粒后A549细胞中TM9SF1蛋白的表达情况。将A549细胞分为3组:(1)CON+NC组,转染miR-185-5p对照质粒和TM9SF1对照质粒;(2)over-miR-185-5p+NC组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1对照质粒;(3)over-miR-185-5p+over-TM9SF1组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1过表达质粒。采用EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验验证miR-185-5p靶向结合TM9SF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。分别采用stubRFPsensGFP-LC3自噬流检测慢病毒和JC-1实验检测肺腺癌细胞自噬流和线粒体膜电位(MMP)的改变。结果 GSE51853数据集中,miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达水平明显低于正常肺组织(P<0.01);qRT-PCR检测结果显示,miR-185-5p在肺腺癌细胞NCI-H1299、A549中的表达水平低于正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。在线数据库miRTargetLink、miRTarbase、DIANA-microT-CD和HADb预测结果显示,miR-185-5p可靶向调控自噬相关蛋白TM9SF1。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting检测结果分别显示,miR-185-5p可直接与TM9SF1 mRNA的3'UTR区结合,过表达miR-185-5p后靶蛋白TM9SF1的表达水平降低(P<0.05)。EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,过表达miR-185-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力,过表达TM9SF1能够削弱miR-185-5p对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的抑制作用(P<0.05)。stub RFP-sens GFP-LC3自噬流检测慢病毒结果显示,过表达mi R-185-5p后A549细胞中自噬流加快,而同时过表达mi R-185-5p和TM9SF1后A549细胞中自噬流减慢;JC-1实验结果显示,过表达miR-185-5p后A549细胞中MMP水平降低,同时过表达miR-185-5p和TM9SF1后A549细胞中MMP水平升高。结论 miR-185-5p可能通过靶向负调控TM9SF1的表达影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和自噬能力。 展开更多
关键词 肺腺癌 miR-185-5p TM9SF1 增殖 迁移 自噬
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RH株弓形虫颅内定位注射建立急性弓形虫脑炎小鼠模型的研究
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作者 司开卫 刘建新 +5 位作者 吴锋 李小其 付子豪 巩锦华 王军阳 程彦斌 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期746-754,共9页
目的观察RH株弓形虫定位感染小鼠海马引起的组织病变,以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型。方法利用颅内定位注射技术,将定量(100、500、1000个)RH株弓形虫滋养体,定位注射入小鼠海马CA1区,观察小鼠的生存状况;Giemsa染色方法观察小鼠腹水和... 目的观察RH株弓形虫定位感染小鼠海马引起的组织病变,以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型。方法利用颅内定位注射技术,将定量(100、500、1000个)RH株弓形虫滋养体,定位注射入小鼠海马CA1区,观察小鼠的生存状况;Giemsa染色方法观察小鼠腹水和脑组织匀浆中弓形虫数量的变化;尼氏染色和HE染色观察小鼠海马神经组织的病理改变;用免疫组化ABC法观察弓形虫在脑组织的分布。结果RH株弓形虫感染各组小鼠在感染第4天表现出明显的弓背、竖毛、腹胀、头颅细微震颤、偏瘫等症状。定量100感染组小鼠生存时间较长,腹水中未发现弓形虫滋养体,脑组织匀浆在96 h后发现少量的假包囊,小鼠死亡后则有较多滋养体;尼氏染色和HE染色则在144 h发现较多的组织坏死灶,CA1区神经细胞缺失;随感染时间的延长而脑组织损伤加重。而定量500感染组和定量1000感染组小鼠腹水和脑匀浆中均发现弓形虫滋养体;尼氏染色发现海马区神经元丢失和大量坏死;HE染色发现组织坏死灶及炎性细胞浸润,脑组织损伤均较定量100感染组小鼠显著加重;免疫组化证实坏死灶中有弓形虫的分布。结论定位感染RH株弓形虫100个滋养体小鼠存活时间较长,脑组织病理变化逐渐加重,损伤局限于脑组织内,小鼠表现典型的弓形虫脑炎症状。因此定位感染100个弓形虫滋养体可以构建急性弓形虫脑炎小鼠模型,可为弓形虫对脑神经的损伤机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 颅内定位注射 海马 弓形虫脑炎
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