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蒺藜苜蓿MtZHD4基因克隆、亚细胞定位及表达分析
1
作者 杨春 王晓倩 +1 位作者 王红军 晁跃辉 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期244-254,共11页
【目的】对蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtZHD4基因进行克隆和表达特征分析,以深入了解其功能,为蒺藜苜蓿生长发育和植物内源激素合成、调控及信号传导等方面提供理论基础。【方法】以蒺藜苜蓿‘R108’为材料,克隆得到MtZHD4基因,对... 【目的】对蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtZHD4基因进行克隆和表达特征分析,以深入了解其功能,为蒺藜苜蓿生长发育和植物内源激素合成、调控及信号传导等方面提供理论基础。【方法】以蒺藜苜蓿‘R108’为材料,克隆得到MtZHD4基因,对其进行生物信息学分析和亚细胞定位,利用实时荧光定量PCR技术对MtZHD4基因在不同组织、不同激素和胁迫处理下的表达模式进行分析。【结果】MtZHD4基因开放阅读框为1092 bp,编码363个氨基酸,蛋白保守结构域预测发现MtZHD4含有2个ZF-HD蛋白结构域,分别属于ZF-HD dimmer和homeo ZF-HD超家族。亚细胞定位结果显示,MtZHD4定位于细胞核和细胞质。启动子顺式作用元件分析表明,MtZHD4基因启动子中含有参与植物生长发育、激素响应、光响应等多个顺式作用元件。组织特异性表达分析结果显示,MtZHD4基因在根中表达量最高,在叶和荚果中较低。经不同激素和胁迫处理后,MtZHD4基因的表达量在ABA诱导下出现上调趋势,IAA诱导下呈现下调趋势,在6-BA、MeJA和SA诱导下表现为先上升后下降;在盐胁迫下,MtZHD4基因的表达量呈上升趋势,而在干旱胁迫下,表达量则先上升后下降。【结论】MtZHD4基因对不同激素和非生物胁迫具有响应,可能通过相关激素信号转导调控蒺藜苜蓿的生长发育,并在盐和干旱胁迫下起正向调控作用。 展开更多
关键词 蒺藜苜蓿 ZF-HD转录因子 生物信息学分析 亚细胞定位 组织差异 激素处理 盐胁迫 干旱胁迫
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基于转录组测序的紫花苜蓿根系特异性基因筛选
2
作者 刘晋囡 王晓倩 +2 位作者 张驰昊 艾晔 晁跃辉 《中国草地学报》 北大核心 2025年第8期1-9,共9页
为挖掘调控紫花苜蓿根系生长的特异性基因,以品种‘中苜一号’为材料,利用转录组测序技术比较其地上茎叶部分与地下根系部分的差异表达基因并对其功能进行分析。结果显示:与地上茎叶部分相比,地下根系部分共获得15258个差异表达基因,其... 为挖掘调控紫花苜蓿根系生长的特异性基因,以品种‘中苜一号’为材料,利用转录组测序技术比较其地上茎叶部分与地下根系部分的差异表达基因并对其功能进行分析。结果显示:与地上茎叶部分相比,地下根系部分共获得15258个差异表达基因,其中上调基因5095个,下调基因10163个。GO功能注释结果显示,这些差异基因主要在细胞过程、代谢调控过程、催化活性等条目富集;KEGG代谢通路富集结果显示其在卟啉与叶绿素代谢、光合作用-天线蛋白合成以及光合生物的固碳作用等通路显著富集。筛选6个差异性较为显著的候选上调基因,采用实时荧光定量PCR技术对其基因表达量的变化进行检测,结果显示其基因表达趋势与转录组测序数据呈高度一致性。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 根系 转录组测序 差异表达基因 实时荧光定量PCR
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蒺藜苜蓿MtCIM基因结构和功能分析 被引量：1
3
作者 谢宏 周丽莹 +3 位作者 李舒文 王梦迪 艾晔 晁跃辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期262-269,共8页
【目的】CIM(cytokinin induce messager)属于Expansin蛋白家族,该蛋白是一类在植物生长和发育过程中起关键作用的蛋白质。为分析蒺藜苜蓿MtCIM基因结构、表达、亚细胞定位及在植物生长和发育过程中的功能。【方法】利用生物信息学工具... 【目的】CIM(cytokinin induce messager)属于Expansin蛋白家族,该蛋白是一类在植物生长和发育过程中起关键作用的蛋白质。为分析蒺藜苜蓿MtCIM基因结构、表达、亚细胞定位及在植物生长和发育过程中的功能。【方法】利用生物信息学工具对其进行深入分子量、理论等电点、不稳定系数及蛋白质结构预测和分析;同时,利用RT-qPCR方法,对不同激素处理(IAA、ABA、GA3)下的基因表达进行了检测;并通过融合蛋白瞬时表达及酵母表达方法鉴定其亚细胞定位及转录自激活情况;对MtCIM转基因植株进行低磷环境的适应分析。【结果】生物信息学分析显示,CIM蛋白的相对分子量为29.563 kD,理论等电点为5.54,不稳定系数为41.62,其蛋白质性质不稳定。二级及三级结构预测表明,该蛋白主要由无规则卷曲构成。外施IAA能够显著提高MtCIM的表达,外施ABA和GA3后,MtCIM表达呈现先升高后降低的趋势。亚细胞定位结果显示,其定位于细胞质中。对MtCIM进行转录自激活活性分析显示,蒺藜苜蓿MtCIM不存在自激活活性。对获得的20株转基因株系进行分析表明,转基因株系叶片细胞壁更厚;转基因植株对低磷环境具有更好的适应能力。【结论】对蒺藜苜蓿MtCIM的全面分析,揭示了其作为Expansin蛋白家族成员在植物生长和发育中的关键作用,并提高了植物在低磷环境中适应能力。 展开更多
关键词 蒺藜苜蓿 MtCIM基因 自激活检测 表达分析 亚细胞定位 低磷响应
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PEO基固态聚合物电解质膜的静电纺丝制备及性能 被引量：1
4
作者 曹倩 杨晶晶 +3 位作者 陈卫星 王趁红 吴新明 雷亚萍 《材料工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第10期148-156,共9页
PEO基固态聚合物电解质被认为是目前固态锂电池领域极具产业化前景的固态电解质。为适应工业化生产,采用静电纺丝技术制备PEO/LiClO_(4)固态聚合物电解质(SPE),研究纺丝电压、纺丝液质量浓度和锂盐含量对SPE纤维膜形貌和直径的影响。通... PEO基固态聚合物电解质被认为是目前固态锂电池领域极具产业化前景的固态电解质。为适应工业化生产,采用静电纺丝技术制备PEO/LiClO_(4)固态聚合物电解质(SPE),研究纺丝电压、纺丝液质量浓度和锂盐含量对SPE纤维膜形貌和直径的影响。通过扫描电子显微镜观察SPE中纤维的形貌,利用Image J软件分析SPE纤维的直径。通过DSC,XRD,FTIR-ATR和拉伸测试等手段对静电纺丝制备的SPE纤维膜的组成、结构、性能等进行研究。结果表明:当纺丝电压为15 kV、PEO/LiClO_(4)纺丝液质量浓度为6%、[EO]∶[Li^(+)]=10∶1(摩尔比)时,静电纺丝方法制备的PEO/LiClO_(4) SPE纤维膜具有较好的纤维形貌,平均直径为557 nm,分布均一;当[EO]∶[Li^(+)]=10∶1时,SPE纤维膜中PEO的熔点仅为53.8℃,结晶度低至18.9%;电解质在30℃时的离子电导率达到5.16×10^(-5)S·cm^(-1),同时具备良好的电化学稳定性和界面稳定性。 展开更多
关键词 固态聚合物电解质 聚氧化乙烯 静电纺丝 纤维 离子电导率
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(±)-去甲肾上腺素盐酸盐合成工艺改进 被引量：1
5
作者 常存一 魏来 +1 位作者 焦淑清 张杰 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期851-854,共4页
以章鱼胺盐酸盐为原料,经氨基保护,氧化和脱保护合成了(±)-去甲肾上腺素盐酸盐,总收率为69.3%,其结构经1H-NMR、13C-NMR和MS确证。该路线起始原料廉价易得,反应条件温和,操作简单易控,所制备得到的原料药更符合最新药物申报法规的... 以章鱼胺盐酸盐为原料,经氨基保护,氧化和脱保护合成了(±)-去甲肾上腺素盐酸盐,总收率为69.3%,其结构经1H-NMR、13C-NMR和MS确证。该路线起始原料廉价易得,反应条件温和,操作简单易控,所制备得到的原料药更符合最新药物申报法规的要求,是一条适合工业化生产的合成路线。 展开更多
关键词 去甲肾上腺素 章鱼胺 合成 工艺改进
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紫花苜蓿MsMYB33基因克隆、亚细胞定位及转录自激活检测 被引量：2
6
作者 王欣怡 王晓倩 +1 位作者 刘亚玲 晁跃辉 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1331-1337,共7页
MYB(V-myb Avian myeloblastosis viral Oncogene Homolog)转录因子数量较多、功能多样,在植物的发育过程中起着十分重要的作用。为了探究紫花苜蓿(Medicago sativa)中MsMYB33基因的亚细胞定位及自激活特性,本研究从紫花苜蓿中克隆MsMY... MYB(V-myb Avian myeloblastosis viral Oncogene Homolog)转录因子数量较多、功能多样,在植物的发育过程中起着十分重要的作用。为了探究紫花苜蓿(Medicago sativa)中MsMYB33基因的亚细胞定位及自激活特性,本研究从紫花苜蓿中克隆MsMYB33基因,该基因开放阅读框为1641 bp,编码多肽含有546个氨基酸。遗传进化树显示MsMYB33蛋白与鹰嘴豆(Cicer arietinum)中的CaMYB33蛋白同源关系最高。将MsMYB33与黄色荧光蛋白(Yellow fluorescent protein,YFP)进行融合表达,结果显示:MsMYB33蛋白定位于细胞核。通过DNA重组技术成功构建pGBKT7-MYB33酵母表达载体,并转化到Y2HGold酵母菌中。酵母自激活检测结果显示,MsMYB33具有自激活活性,进一步分析发现激活区域位于C端。本研究为进一步研究紫花苜蓿MsMYB33基因及MYB转录因子家族提供了科学依据。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MsMYB33基因 核定位 自激活活性
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FLAG标签纳米抗体的筛选、表达及验证
7
作者 王欣怡 王晓倩 +1 位作者 王红军 晁跃辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期323-331,共9页
纳米抗体是一种新型的蛋白质工程抗体,其体积小、稳定性强、亲和力高等特性为科学研究提供了新的可能性。FLAG标签是一种广泛应用于生物学研究中的短肽标签,在生物学研究中具有重要的作用。为了制备FLAG标签的纳米抗体,利用酵母双杂交... 纳米抗体是一种新型的蛋白质工程抗体,其体积小、稳定性强、亲和力高等特性为科学研究提供了新的可能性。FLAG标签是一种广泛应用于生物学研究中的短肽标签,在生物学研究中具有重要的作用。为了制备FLAG标签的纳米抗体,利用酵母双杂交技术筛选出具有高亲和力的纳米抗体,并对制备的FLAG纳米抗体进行性能检验。通过DNA重组技术,构建包含FLAG的诱饵载体,利用酵母双杂交技术,在驼源纳米抗体酵母文库中,筛选针对FLAG标签纳米抗体。在酵母文库中筛选出5个单一的候选抗体DNA序列,为了排除载体本身表达蛋白序列对抗体筛选带来的干扰,通过“点对点”验证方法排除非特异性杂交的可能,通过该操作确认所筛选的5株纳米抗体均能与FLAG标签发生特异性亲和反应。为了制备纳米抗体,构建了5个纳米抗体原核表达载体,并利用大肠杆菌体系进行表达。通过SDS-PAGE和Western杂交(WB)分析,结果显示,成功获得2株可溶性表达的抗FLAG标签蛋白纳米抗体。对这2株纳米抗体与商品化的常规FLAG标签抗体进行效果比对,结果显示制备的2株纳米抗体与商品化抗体均能够识别FLAG多肽及含有FLAG标签的融合蛋白,且在特异性上没有明显区别,表明制备的FLAG纳米抗体具有较好的应用前景。基于酵母双杂交技术,成功筛选并制备了FLAG标签纳米抗体,这一成果不仅丰富了纳米抗体的类型,也为抗体开发及应用提供了新的途径。该研究为进一步研究FLAG标签在生物学研究中的应用,以及纳米抗体在生物工程中的应用提供有力支持。 展开更多
关键词 FLAG标签 纳米抗体 酵母双杂 筛选 表达 特异性 免疫沉淀
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具有抗炎活性的中药对脂肪酸合酶的抑制作用 被引量：1
8
作者 黄文元 王红军 +2 位作者 AMANTAY Alzhan 田维熙 马晓丰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2020年第8期809-817,共9页
随着肥胖及其相关疾病的患病率不断上升,肥胖并发的慢性炎症已成为一个不容忽视的公共卫生问题,迫切需要针对肥胖相关慢性炎症新的治疗方案和干预策略.脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)是一种多功能复合酶,是治疗肥胖、糖尿病、非... 随着肥胖及其相关疾病的患病率不断上升,肥胖并发的慢性炎症已成为一个不容忽视的公共卫生问题,迫切需要针对肥胖相关慢性炎症新的治疗方案和干预策略.脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)是一种多功能复合酶,是治疗肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝、炎症和癌症的潜在靶点.持续的炎症反应是潜在的危险因素.一些关键的炎症标志物与肥胖密切相关,其中特别是FAS抑制剂的研究受到越来越多的关注.在我国,中药已广泛被应用于炎症的治疗,其中有多种中药对FAS表现出强抑制作用.本文综述了中药FAS抑制剂的结构和活性特点,对于研发中药FAS抑制剂治疗炎症提供了依据. 展开更多
关键词 脂肪酸合酶 抑制剂 炎症 肥胖 中药
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