猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究 被引量：3

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作者 刘新月 栗利芳 +7 位作者 王振豹 张文亮 张欣 赵洪涛 李鹏宇 郑昊天 肖进 齐鹏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1068-1080,共13页

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定... 【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验结果显示,免疫后,ISA 61 VG和GEL 02 PR组保护效果明显优于其他佐剂,其制备的疫苗产生的ELISA抗体和中和抗体水平均明显高于其他组,同时还可刺激产生更高水平的细胞因子γ-干扰素(IFN-γ);攻毒后,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组疫苗的仔猪相对日增重显著高于其他佐剂组(P<0.05),且实时荧光定量PCR和免疫组化结果显示,上述疫苗组可显著降低仔猪体内病毒载量(P<0.05)。临床症状观察显示,ISA 61 VG和GEL 02 PR疫苗组无体温升高或被毛粗乱等现象,病理切片表明这2个疫苗组组织病变较轻。【结论】油佐剂ISA 61 VG佐剂和水佐剂GEL 02 PR制备的PCV2合成肽疫苗对预防PCV2感染具有较好的免疫保护作用,试验结果为PCV2合成肽疫苗的研究提供了数据基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 合成肽疫苗 佐剂筛选 免疫保护

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禽网状内皮组织增生症病毒和A亚群禽白血病病毒共感染对疫苗免疫鸡生长性能和免疫器官的影响 被引量：4

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作者 黄小洁 刘丹 +7 位作者 孔冬妮 张兵 吴华伟 薛麒 杨飞 侯力丹 薛青红 李俊平 《中国兽药杂志》 2022年第2期9-18,共10页

为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群... 为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群、1日龄活疫苗免疫鸡群进行REV与ALV-A单感染或共感染,于不同日龄称重,采集免疫器官,对生长性能、免疫器官比重进行比较和分析。结果显示,1日龄鸡单感染或共感染REV和ALV-A均会引起发病、死亡及体重下降,REV、ALV-A单感染组及共感染组平均病死率依次为27.6%、11.6%及31.9%,表明,疫苗免疫刺激增强了REV与ALV-A感染的致病性。10日龄鸡REV、ALV-A单感染及共感染于81日内病死率分别为13.3%、6.7%及20%,低于1日龄感染各相应组,体重下降程度也低于1日龄感染鸡,表明鸡的日龄越高对REV、ALV-A感染的抵抗力越强。活疫苗与灭活疫苗免疫的比较显示,两种疫苗免疫应激均能引起鸡体重下降明显,且活疫苗免疫对体重的抑制作用更明显。REV单感染和共感染对生长发育的抑制作用高于ALV-A单感染,尤其是共感染对鸡体重的抑制作用最明显。对免疫器官比重的影响方面,1日龄感染时,共感染组胸腺比重显著降低,10日龄感染影响不显著,表明鸡日龄越大对病毒感染的抵抗力越强;常规免疫可引起法氏囊比重下降,但对法氏囊的影响是可恢复的,而REV单感染和共感染会加重常规免疫对法氏囊的损伤,且损伤更持久或不可恢复;ALV-A单感染对法氏囊的损伤影响不明显;单感染和共感染对脾脏比重的影响均不显著。本研究为深入研究REV和ALV-A单感染或者共感染诱导鸡群发生免疫抑制机制积累了重要的实验数据。 展开更多

关键词 REV ALV-A 共感染 生长性能 免疫器官

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应用LSDV-ELISA抗体检测试剂盒检测羊痘疫苗免疫牛血清抗体水平 被引量：3

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作者 朱真 李静 +5 位作者 张蕾 董春娜 李鹏宇 杜吉革 肖进 陈小云 《中国奶牛》 2023年第3期25-29,共5页

目前国内尚无商品化的牛结节性皮肤病疫苗,对于该病的防控,我国采用羊痘疫苗进行紧急免疫。为了验证牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒对羊痘疫苗免疫血清抗体水平检测的适用性,本研究采用实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗... 目前国内尚无商品化的牛结节性皮肤病疫苗,对于该病的防控,我国采用羊痘疫苗进行紧急免疫。为了验证牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒对羊痘疫苗免疫血清抗体水平检测的适用性,本研究采用实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒和病毒中和试验对羊痘病毒活疫苗免疫血清、在研牛结节性皮肤病灭活疫苗(山羊痘AV41株)免疫血清进行抗体水平评价。结果显示,对于羊痘活疫苗免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对免疫15d抗体阳性率分别为84.4%和75.6%,免疫30d抗体阳性率分别为100%和95.6%,免疫60d抗体阳性率分别为97.8%和91.1%;与病毒中和试验符合率为86.1%。对于牛结节性皮肤病灭活疫苗(山羊痘AV41株)免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对一免28d抗体阳性率分别为64%和56%,二免28d抗体阳性率分别为94%和88%,二免42d阳性率均为100%;与病毒中和试验符合率为86.5%。试验证明,实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验符合率较高,检测结果较为一致,且本试剂盒敏感性高于病毒中和试验。因此本试剂盒可用于牛结节性皮肤病抗体水平检测。 展开更多

关键词 LSDV ELISA 羊痘疫苗 抗体水平检测

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猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定及其对小鼠的免疫原性分析 被引量：1

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作者 孙瑶 韩伟 +5 位作者 赵辉 杨小蓉 常昊天 付秀花 吴珊珊 王贵华 《中国动物检疫》 2025年第1期103-110,共8页

为获得猪圆环病毒2型(PCV2)候选疫苗株,对疑似PCV2感染猪的淋巴结、脾脏等组织病料进行检测,对阳性病料进行PCV2分离纯化、鉴定、全基因测序和遗传进化分析,并制成PCV2灭活疫苗,进行小鼠免疫原性分析。结果显示;从PCV2阳性病料中成功分... 为获得猪圆环病毒2型(PCV2)候选疫苗株,对疑似PCV2感染猪的淋巴结、脾脏等组织病料进行检测,对阳性病料进行PCV2分离纯化、鉴定、全基因测序和遗传进化分析,并制成PCV2灭活疫苗,进行小鼠免疫原性分析。结果显示;从PCV2阳性病料中成功分离得到1株PCV2毒株,病毒含量不低于10^(6.0) FAID_(50)/mL,间接免疫荧光试验可见绿色荧光;该毒株基因全长约1767 bp,全基因核酸序列与PCV2参考序列ON012565.1、KU960933.1同源性最高为99.9%,与PCV3参考序列PP566974.1同源性最低为45.9%,与多数PCV2参考毒株序列同源性在92%以上,经进化树分析属于PCV2d基因亚型;用该分离毒株制成灭活疫苗免疫小鼠后,测得特异性抗体,且效价较高。结果说明,该分离株具有良好的免疫原性,可作为PCV2疫苗研发的候选毒株。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 遗传变异 免疫原性分析 疫苗研发

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3种口蹄疫O型抗体检测试剂盒对疫苗免疫牛血清抗体检测的比较试验 被引量：5

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作者 董春娜 马爱荣 +6 位作者 张蕾 李静 巴利民 王振豹 齐鹏 汪明 肖进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期38-40,共3页

为了提供检测结果准确且操作便捷的试剂盒,本试验应用两种商品化试剂盒和本实验室研制的一种基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒同时对口蹄疫疫苗免疫后14、21和28 d的150份免疫牛血清进行口蹄疫O型抗体水平的检测,并对3种试剂盒测定... 为了提供检测结果准确且操作便捷的试剂盒,本试验应用两种商品化试剂盒和本实验室研制的一种基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒同时对口蹄疫疫苗免疫后14、21和28 d的150份免疫牛血清进行口蹄疫O型抗体水平的检测,并对3种试剂盒测定结果的符合程度、重复性和便捷性进行了比较。试验结果表明3种试剂盒测得的抗体水平检测结果之间高度符合,且3种试剂盒各自的检测结果重复性良好,基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒在操作便捷性方面优势明显。 展开更多

关键词 牛 口蹄疫 ELISA 试剂盒

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猪SLA-1分子结合多肽特性分析及功能验证 被引量：1

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作者 巴利民 王振豹 +3 位作者 齐鹏 汪明 肖进 喻长远 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期46-48,共3页

本文利用软件对我国商品猪群中表达频率较高的SLA-1*080101等位基因进行分析,找出了该等位基因所呈递的多肽抗原的第2位和第9位氨基酸的偏好性,确定该等位基因的结合多肽残基基序为:X-(L/V/I/T/M)-X-X-X-X-X-X-(Y/F/M)。再结合表位预测... 本文利用软件对我国商品猪群中表达频率较高的SLA-1*080101等位基因进行分析,找出了该等位基因所呈递的多肽抗原的第2位和第9位氨基酸的偏好性,确定该等位基因的结合多肽残基基序为:X-(L/V/I/T/M)-X-X-X-X-X-X-(Y/F/M)。再结合表位预测软件,预测了6条口蹄疫病毒CTL表位,并通过动物试验验证,确定其中2条具有较强的细胞免疫反应(P1和P4)。本试验结果为开发口蹄疫细胞免疫疫苗,完善现有产品保护性能提供了科学依据。 展开更多

关键词 猪 SLA-1 口蹄疫 结合多肽残基基序 CTL表位

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牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1

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作者 张蕾 肖进 +7 位作者 董春娜 巴利民 栗利芳 宋芳 王楠 周强 齐鹏 汪明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第3期22-24,共3页

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别... 根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%-9.8%和3.5%-10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。 展开更多

关键词 牛 口蹄疫 合成肽 ELISA

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猪SLA-1体外表达及其结合多肽的筛选 被引量：1

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作者 巴利民 王振豹 +3 位作者 齐鹏 汪明 肖进 喻长远 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期32-35,共4页

本文将猪群中表达频率较高的SLA-1*1301胞外区及SLA-β2 m基因序列片段合成后连接到pET21a(+)原核表达载体上,构建出pET21a-SLA-1*1301和pET21a-SLA-β2m重组表达质粒。通过IPTG诱导大肠杆菌刺激产生大量的相关目标产物,再将所获得的质... 本文将猪群中表达频率较高的SLA-1*1301胞外区及SLA-β2 m基因序列片段合成后连接到pET21a(+)原核表达载体上,构建出pET21a-SLA-1*1301和pET21a-SLA-β2m重组表达质粒。通过IPTG诱导大肠杆菌刺激产生大量的相关目标产物,再将所获得的质量比较高的SLA-1*1301胞外区表达蛋白、SLA-β2m蛋白分别与6条软件预测的口蹄疫细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位多肽进行蛋白复性和纯化,通过蛋白纯化仪分析,结果显示,其中4条预测口蹄疫CTL表位多肽可以形成稳定的SLA I-β2m-表位多肽复合体,表明该4条多肽可能为口蹄疫的CTL表位肽,对将来开发细胞免疫疫苗和相关免疫增强剂有重要的指导意义。 展开更多

关键词 猪 SLA-1 口蹄疫 CTL表位

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猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立 被引量：2

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作者 董春娜 肖进 +4 位作者 张蕾 巴利民 栗利芳 宋芳 齐鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期39-42,共4页

根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为... 根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为99.1%,批内与批间重复试验变异系数小于10.0%。比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2%,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7%。该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平。 展开更多

关键词 口蹄疫 合成肽 抗体 ELISA

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猪圆环病毒2型合成肽间接ELISA抗体检测方法的建立和评估

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作者 栗利芳 刘新月 +4 位作者 张蕾 董春娜 肖进 汪明 郭鑫 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期16-21,26,共7页

本试验根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白表位,结合文献报道及软件预测,设计合成肽抗原;再用PCV2阳性血清进行筛选,优选出4条肽的混合肽段作为包被抗原;继而通过最适条件摸索,建立PCV2合成肽间接ELISA抗体检测方法,并从该方法的敏感性、... 本试验根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白表位,结合文献报道及软件预测,设计合成肽抗原;再用PCV2阳性血清进行筛选,优选出4条肽的混合肽段作为包被抗原;继而通过最适条件摸索,建立PCV2合成肽间接ELISA抗体检测方法,并从该方法的敏感性、特异性、重复性及其他试剂盒进行比对试验等关键性指标进行评估。结果显示,间接ELISA的敏感性为95.0%,特异性为97.5%,批内变异系数在3.4%~7.2%,批间重复性变异系数在4.8%~8.6%。比对试验结果显示,本间接ELISA与PCV2 Cap蛋白包被试剂盒符合率为91.5%;与猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒(锐捷)符合率为94.6%。因此,本试验建立的猪圆环合成肽间接ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强和重复性好,可用于临床PCV2血清抗体检测及作为疫苗免疫效果评价的技术手段。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 合成肽 间接ELISA 抗体检测

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猪乙型脑炎传代细胞活疫苗保护剂的效力试验 被引量：2

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作者 韩伟 刘艳彬 +2 位作者 蒋利 潘春刚 周建民 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第7期72-77,共6页

为了提高活疫苗的稳定性,便于活疫苗的保存和运输,本试验将猪乙型脑炎病毒分别与耐热冻干保护剂和传统冻干保护剂进行配比、冻干,制备活疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其病毒含量,同时进行25℃、37℃耐老化试验和小鼠免疫原性试... 为了提高活疫苗的稳定性,便于活疫苗的保存和运输,本试验将猪乙型脑炎病毒分别与耐热冻干保护剂和传统冻干保护剂进行配比、冻干,制备活疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其病毒含量,同时进行25℃、37℃耐老化试验和小鼠免疫原性试验。结果显示,疫苗在2~8℃条件下保存24个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降超过3.0 Log PFU/mL;25℃常温保存2个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,而使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降约2.0 Log PFU/mL;37℃保存10 d,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.5 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗下降超过1.5 Log PFU/mL。使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗和使用传统冻干保护剂制备的活疫苗对小鼠的免疫原性相当,半数有效剂量分别为10^(-3.12)/0.1 mL和10^(-3.11)/0.1 mL。试验结果表明,耐热冻干保护剂对病毒的保护效力明显优于传统冻干保护剂,具有良好的热稳定性,使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒(JEV) 疫苗滴度 冻干 耐热冻干保护剂 活疫苗

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鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

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作者 黄小洁 吴华伟 +6 位作者 张兵 杨承槐 孔冬妮 侯力丹 杨飞 薛麒 刘丹 《中国兽药杂志》 2022年第9期14-21,共8页

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件:包被抗原的浓度为8μg/m L,标准阴、阳性血清的稀释度为1∶400,封闭液选用10%马血清,... 为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件:包被抗原的浓度为8μg/m L,标准阴、阳性血清的稀释度为1∶400,封闭液选用10%马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1∶15000,最佳抗原稀释液为0.01 mol/L PBS(p H7.2),抗原最佳包被条件为4℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37℃60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD_(450nm)≥0.288判为阳性,反之判为阴性。结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为95.7%。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 抗体 VP2 间接ELISA

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ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验对临床牛血清样本中牛结节性皮肤病病毒抗体的检测比对 被引量：2

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作者 朱真 李静 +6 位作者 张蕾 董春娜 李鹏宇 杜吉革 石守定 肖进 陈小云 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期58-62,67,共6页

病毒中和试验是血清学检测的金标准。为了评估中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒的检测效果,本研究用3批牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验同时对260份牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感... 病毒中和试验是血清学检测的金标准。为了评估中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒的检测效果,本研究用3批牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验同时对260份牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛血清和200份健康牛血清进行比对检测。结果显示,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA试剂盒阳性检出率为86.9%(226/260),病毒中和试验阳性检出率为81.9%(213/260),二者对260份LSDV感染牛血清的检测符合率为85.8%(223/260),对200份健康牛血清的检测符合率为100%(200/200)。结果表明,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒敏感性高、特异性好、检测结果准确度较高。 展开更多

关键词 ELISA 病毒中和试验 比对

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UPLC-Q-TOF-MS测定酒石酸泰万菌素可溶性粉中的泰万菌素 被引量：9

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作者 吴家鑫 尚飞 +7 位作者 张国栋 刘敏 张传良 徐金雷 赵梅仙 宋敏 齐鹏 陶蓓蓓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第9期108-110,共3页

本试验建立了酒石酸泰万菌素可溶性粉中泰万菌素含量的超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱检测方法（UPLC-Q-TOF-MS）,并对二级质谱中的离子碎片进行了比对分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2 mmol/L乙酸铵）为流... 本试验建立了酒石酸泰万菌素可溶性粉中泰万菌素含量的超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱检测方法（UPLC-Q-TOF-MS）,并对二级质谱中的离子碎片进行了比对分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2 mmol/L乙酸铵）为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃。质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为正离子全扫描模式,外标法定量。结果表明,药物浓度与峰面积在100-2 000μg/L范围内相关系数R2=0.9992;泰万菌素的检出限为3μg/L,定量限为10μg/L;添加回收率在98.9%-104.7%之间,批内变异系数为1.27%-1.81%,批间变异系数为1.04%-1.59%。利用Molecular Structure correlator对碎片进行了分析比对,为泰万菌素的结构验证提供了依据。 展开更多

关键词 超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱 泰万菌素 可溶性粉

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牛主要组织相容性复合物BoLA基因研究进展 被引量：1

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作者 向王震 肖进 +4 位作者 王璐瑶 李静 巴利民 齐鹏 汪明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期72-75,共4页

牛主要组织相容性复合体MHC（BoLA）与移植排斥反应和免疫反应密切相关,是免疫学研究的重要内容。本文简述了牛BoLA分布、结构及其功能,介绍BoLA与疾病易感性,免疫应答调控之间的关系及表达产物结构方面的研究。1简介主要组织相容性复... 牛主要组织相容性复合体MHC（BoLA）与移植排斥反应和免疫反应密切相关,是免疫学研究的重要内容。本文简述了牛BoLA分布、结构及其功能,介绍BoLA与疾病易感性,免疫应答调控之间的关系及表达产物结构方面的研究。1简介主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex,MHC）是动物体内由紧密连锁、高度多态的基因座位所组成的一个基因家族。 展开更多

关键词 BoLA 基因座位 免疫学研究 免疫应答 移植排斥反应 疾病易感性 基因研究 紧密连锁 免疫反应 表达产物

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利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱鉴别预混剂中黄霉素 被引量：5

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作者 吴家鑫 刘敏 +3 位作者 尚飞 齐鹏 张国栋 梁景乐 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第5期24-28,共5页

利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱对预混剂中的黄霉素5种组分进行鉴别分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(含2 mmol/L乙酸铵)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃;质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为负... 利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱对预混剂中的黄霉素5种组分进行鉴别分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(含2 mmol/L乙酸铵)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃;质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为负离子全扫描模式,通过保留时间、精确分子量和二级质谱特征碎片完成对黄霉素的5种组分的鉴别。与高效液相色谱方法比较,本方法具有判断准确、检测快速的特点,具有很好的应用价值。 展开更多

关键词 鉴别 黄霉素 超高效液相色谱 高分辨四极杆飞行时间质谱

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亲水作用液相色谱法测定注射液中泰地罗新含量 被引量：2

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作者 吴家鑫 刘敏 +4 位作者 尚飞 张传良 宋敏 齐鹏 梁景乐 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期231-234,共4页

采用XBridge-BEH Amide(150 mm×4. 6 mm,5μm)亲水作用色谱柱,建立了泰地罗新的检测方法。确定了检测波长,考察了流动相pH、流动相盐体系、流动相洗脱方式对保留时间、对称因子和理论塔板数的影响。结果表明,采用亲水作用色谱柱分... 采用XBridge-BEH Amide(150 mm×4. 6 mm,5μm)亲水作用色谱柱,建立了泰地罗新的检测方法。确定了检测波长,考察了流动相pH、流动相盐体系、流动相洗脱方式对保留时间、对称因子和理论塔板数的影响。结果表明,采用亲水作用色谱柱分离,以乙腈(含10 mmol/L甲酸铵、0. 125%甲酸、5%水)-0. 125%甲酸水溶液(含10 mmol/L甲酸铵)为流动相梯度洗脱,流速为1. 0 m L/min,柱温为30℃,紫外检测波长为280 nm,在此条件下泰地罗新可以获得良好的分离效果。泰地罗新药物质量浓度与峰面积在6. 25～100μg/m L范围内线性关系良好,相关系数R=0. 999 9,检出限为0. 05μg/m L,定量限为0. 14μg/m L,批内添加回收率在97. 8%～102. 1%之间,批内变异系数为1. 69%～3. 12%;批间添加回收率在96. 9%～104. 3%之间,批间变异系数为3. 39%～4. 05%。该方法能够快速、准确地检测泰地罗新含量,且成本低廉,可应用于药物生产中泰地罗新的质量控制。 展开更多

关键词 亲水作用色谱 泰地罗新 定量检测

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超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法快速筛选鉴别猪血浆中的大环内酯类抗生素 被引量：3

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作者 吴家鑫 刘敏 +7 位作者 尚飞 宋敏 张传良 张刚 徐金雷 齐鹏 肖进 郭丽清 《中国兽药杂志》 2018年第9期46-52,共7页

采用超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOP-MS)结合大环内酯类抗生素数据库,建立快速筛查鉴别猪血浆中常见大环内酯类抗生素的方法。猪血浆经甲醇提取,通过UPLC-Q-TOP-MS正离子模式全扫描分析,采用Agilent Extend-... 采用超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOP-MS)结合大环内酯类抗生素数据库,建立快速筛查鉴别猪血浆中常见大环内酯类抗生素的方法。猪血浆经甲醇提取,通过UPLC-Q-TOP-MS正离子模式全扫描分析,采用Agilent Extend-C18色谱柱(50×2.1 mm,1.8μm)分离,以乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃,得到猪血浆中大环内酯类抗生素准分子离子峰精确质量数、主要碎片峰的精确质量数和保留时间后,结合大环内酯类抗生素数据库筛查,实现猪血浆中大环内酯类抗生素的快速定性识别。所建数据库包含26种常见猪血浆中大环内酯类抗生素的准分子离子峰精确质量数、主要碎片峰的精确质量数和保留时间,其中13种常见大环内酯类抗生素的检测限在1.00~8.00ng/g范围内。该方法分离度高、检测灵敏,可以作为快速筛查鉴别猪血浆中大环内酯类抗生素的有效方法。 展开更多

关键词 超高效液相色谱 高分辨四极杆飞行时间质谱 猪血浆 大环内酯类抗生素 筛选 鉴别

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基于非洲猪瘟病毒特异性单克隆抗体建立的阻断ELISA方法 被引量：2

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作者 董春娜 张蕾 +3 位作者 李静 李鹏宇 齐鹏 肖进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期36-40,共5页

为了建立一种能够检测非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性抗体的单抗阻断ELISA方法,本试验首先构建了非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达载体,进而制备并筛选出1株能特异性识别p30蛋白的高亲和力单克隆抗体,采用昆虫杆状病毒表达系统Bac-to-Bac进行... 为了建立一种能够检测非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性抗体的单抗阻断ELISA方法,本试验首先构建了非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达载体,进而制备并筛选出1株能特异性识别p30蛋白的高亲和力单克隆抗体,采用昆虫杆状病毒表达系统Bac-to-Bac进行该单克隆抗体的表达。以p30重组蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体作为阻断抗体建立了一种非洲猪瘟病毒特异性抗体的检测方法,并验证其敏感性、特异性以及与商品化试剂盒的符合率。结果显示,该方法敏感性为100%,特异性为100%,与商品化试剂盒比较,符合率为98.7%。结果表明,本试验基于非洲猪瘟病毒特异性单克隆抗体建立的阻断ELISA方法敏感性好、特异性强,结果准确可靠,可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 阻断ELISA

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11株禽腺病毒遗传变异分析 被引量：2

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作者 杨小蓉 王楠 +5 位作者 王天恺 王增福 李晓冉 潘文 孟凡磊 马良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期15-18,23,共5页

为了分析2019年禽腺病毒(FAdV)遗传变异情况,通过PCR分段扩增、测序,获得11株FAdV Hexon基因序列。经分析发现,11株腺病毒Hexon基因高变区核苷酸序列同源性为66.1%~100.0%,推导编码的氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%;与参考株核苷酸序... 为了分析2019年禽腺病毒(FAdV)遗传变异情况,通过PCR分段扩增、测序,获得11株FAdV Hexon基因序列。经分析发现,11株腺病毒Hexon基因高变区核苷酸序列同源性为66.1%~100.0%,推导编码的氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%;与参考株核苷酸序列同源性为65.4%~100%,与参考株氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%。其中9株序列基因长度均为738 nt,编码246个氨基酸;GX-1901001毒株序列基因长度均为750 nt,编码250个氨基酸;HB-1911039毒株序列基因长度均为756 nt,编码252个氨基酸。与目前流行株相比,本试验获得的11株腺病毒Hexon基因存在不同程度的变异或缺失,在进化树中已形成多个小分支。表明我国FAdV在流行过程中已出现变异。本试验结果为监测和分析我国FAdV的变异和演化提供了有价值的基因信息数据。 展开更多

关键词 禽腺病毒 Hexon基因 序列测定 变异分析

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