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用于细胞核钙成像的新型钙指示剂的构建与鉴定(英文)
1
作者
齐特
杨华乾
+4 位作者
范雪新
赵天
郭运波
丁卫
叶海虹
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期592-598,共7页
细胞核钙离子是基因转录等细胞核反应过程重要的调控因子.然而,细胞核内钙离子信号的调控机制尚不清楚.缺乏稳定的、敏感的细胞核钙指示剂,是导致其调控机制难以研究的重要原因之一.针对这一问题,设计了能够在细胞核内特异性表达的、具...
细胞核钙离子是基因转录等细胞核反应过程重要的调控因子.然而,细胞核内钙离子信号的调控机制尚不清楚.缺乏稳定的、敏感的细胞核钙指示剂,是导致其调控机制难以研究的重要原因之一.针对这一问题,设计了能够在细胞核内特异性表达的、具有核定位功能的钙指示剂.以基因编码钙指示剂(GECIs)家族成员GCa MP6为模板,首先融合了对钙离子不敏感的红色荧光蛋白td Tomato来对局部的钙信号进行量化,其次融合了核定位信号(NLS),使GCa MP6能够特异定位于细胞核中.结果表明,NLS-GCa MP6-td Tomato能够在细胞核中有效发挥作用,并且在钙敏感性与动力学上,也与GCa MP6相当.这一新型细胞核钙指示剂将为研究细胞核钙离子的功能及其调控机制提供新的方法与途径.
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关键词
细胞核钙离子
钙成像
基因编码钙指示剂
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职称材料
双光子显微镜用于在体监测小鼠视交叉上核Ca^(2+)动态变化的方法学研究
被引量:
1
2
作者
王聪
马腾飞
+2 位作者
张晨
王元银
王烈成
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2017年第11期1583-1587,共5页
目的通过颅底暴露手术联合双光子荧光成像技术实现在体记录视交叉上核(SCN)神经元钙离子活动信号并研究其活动规律的新型方法。方法对麻醉小鼠实行颅底暴露手术,通过双光子荧光显微镜对已注射钙指示剂的活体小鼠SCN核团钙信号进行实时...
目的通过颅底暴露手术联合双光子荧光成像技术实现在体记录视交叉上核(SCN)神经元钙离子活动信号并研究其活动规律的新型方法。方法对麻醉小鼠实行颅底暴露手术,通过双光子荧光显微镜对已注射钙指示剂的活体小鼠SCN核团钙信号进行实时动态测定。结果成功建立一套小鼠颅底暴露SCN核团手术方法,术后应用双光子显微镜清晰地检测到SCN核团钙离子荧光信号,也能够实现稳定的在体细胞钙离子成像,并发现不同自发反应细胞中钙离子活动规律差异。结论通过颅底暴露手术,利用双光子显微镜成功实现了实时监测SCN区域神经元钙离子信号。
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关键词
双光子
荧光成像技术
在体
钙成像
视交叉上核
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职称材料
足底电击诱导树鼠句条件恐惧记忆模型的建立及抹除
被引量:
1
3
作者
郭呈斌
张晨
王烈成
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第10期1426-1430,共5页
目的探索足底电击诱导树鼩条件恐惧记忆模型的建立及抹除方法。方法测定在无刺激条件下,树鼩在明暗箱中的活动规律;然后用梯度刺激实验测定合适的足底电击电压;最后用合适的电压通过足底电击诱导并建立实验组树鼩条件恐惧记忆模型并抹...
目的探索足底电击诱导树鼩条件恐惧记忆模型的建立及抹除方法。方法测定在无刺激条件下,树鼩在明暗箱中的活动规律;然后用梯度刺激实验测定合适的足底电击电压;最后用合适的电压通过足底电击诱导并建立实验组树鼩条件恐惧记忆模型并抹除其记忆。结果正常条件下,树鼩(n=4)在暗箱中的停留时间明显多于明箱中的停留时间(P<0.01);在两明箱中,足底电压梯度刺激实验显示,随着刺激电压的增加,树鼩(n=6)在有刺激的隔间中的停留时间逐渐减少。12 V以后树鼩在有刺激隔间与无刺激隔间的停留时间差异有统计学意义[12 V(P<0.05)、16 V(P<0.01)、20 V(P<0.01)];实验组(n=4)暗箱用16 V刺激电压足底电击能够形成明显的恐惧记忆(P<0.001)。在形成明显的恐惧记忆后,在明箱中给予相应的足底电击4 d,实验组(n=4)树鼩在明箱中停留的时间逐渐减少,与对照组比较差异无统计学意义。结论树鼩更趋于停留在暗箱中;16V为较为适合的足底电击电压;条件恐惧记忆能够被诱导并且被新的刺激完全抹除。
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关键词
树鼩
足底电击
条件恐惧记忆形成和抹除
明暗箱
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职称材料
高浓度葡萄糖促进人二倍体成纤维细胞迅速衰老
被引量:
2
4
作者
高云飞
周建军
+4 位作者
陈曦
赵允
苏小琴
刘诚
翟中和
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期572-575,共4页
利用光学显微镜观察和酸性 β 半乳糖苷酶染色技术研究了高浓度葡萄糖对人二倍体成纤维细胞 2BS细胞衰老进程的影响 ,并用流式细胞仪检测了此过程中活性氧和线粒体膜电位差的变化。结果表明 :2 0 0mmol L的葡萄糖对 2BS细胞有生长抑制作...
利用光学显微镜观察和酸性 β 半乳糖苷酶染色技术研究了高浓度葡萄糖对人二倍体成纤维细胞 2BS细胞衰老进程的影响 ,并用流式细胞仪检测了此过程中活性氧和线粒体膜电位差的变化。结果表明 :2 0 0mmol L的葡萄糖对 2BS细胞有生长抑制作用 ,能引起活性氧含量的变化 ,导致线粒体膜电位差显著下降 ,并诱导了细胞的衰老。这为氧化损伤假说提供了新的证据 ,并为研究活性氧和复制衰老之间的关系提供了较好的体系。
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关键词
葡萄糖
细胞衰老
人二倍体成纤维细胞
活性氧
ROS
流式细胞术
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职称材料
人白细胞抗原-G1对NK92效靶识别过程的影响
5
作者
田兴辉
周建军
+3 位作者
方贞付
娄黎明
汪蕴
丰美福
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期904-909,共6页
人白细胞抗原G (humanleukocyteantigen G ,HLA G)属非经典的主要组织相容性复合体 (majorhistocompatibilitycomplex ,MHC)Ⅰ类分子 ,为自然杀伤细胞 (naturalkiller,NK)抑制性受体的识别配体 ,可以向NK细胞传递抑制性信号 ,从而抑制N...
人白细胞抗原G (humanleukocyteantigen G ,HLA G)属非经典的主要组织相容性复合体 (majorhistocompatibilitycomplex ,MHC)Ⅰ类分子 ,为自然杀伤细胞 (naturalkiller,NK)抑制性受体的识别配体 ,可以向NK细胞传递抑制性信号 ,从而抑制NK细胞的细胞毒作用 .为了研究HLA G对NK与靶细胞识别作用的影响机制 ,采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术对全长HLA G1的表达和功能进行了探讨 ,并对效靶识别过程中靶细胞 [Ca2 + ]i (胞内自由钙离子浓度 )进行了实时检测 .结果发现 ,全长的HLA G1表达于K5 6 2、JAR和CHO细胞的胞浆和胞膜上 ,它能够部分地抑制NK92的细胞毒作用 .NK92与CHO和GFP CHO细胞作用后 ,靶细胞 [Ca2 + ]i 出现了明显的升高 ,HLA G1的表达则抑制了靶细胞 [Ca2 + ]i的升高 .结果提示 :靶细胞[Ca2 + ]i 的升高是有效的细胞杀伤作用的必要条件 ,HLA
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关键词
人白细胞抗原-G1
NK92
效靶识别过程
影响
胞内钙离子
免疫抑制
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职称材料
羊心蒲氏纤维两个水平的早后去极化及其离子机制
6
作者
徐坚
王知青
+1 位作者
王忠民
刘泰甦
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第4期517-524,共8页
用双电极电压箝制技术研究了羊心蒲氏纤维早后去极化 (Earlyafterdepolarization ,EAD)的发生及其离子机制。在低钾生理溶液 (2 .5mmol/LK+ )灌流下 ,于自发活动基础上可诱发出 2个膜电位水平 (- 2 5与 - 55mV)的EAD。低电位水平的发放...
用双电极电压箝制技术研究了羊心蒲氏纤维早后去极化 (Earlyafterdepolarization ,EAD)的发生及其离子机制。在低钾生理溶液 (2 .5mmol/LK+ )灌流下 ,于自发活动基础上可诱发出 2个膜电位水平 (- 2 5与 - 55mV)的EAD。低电位水平的发放可被硝苯吡啶 (2 .0 μmol/L)消除 ,而高电位的发放可由利多卡因 (10 μmol/L)或低温 (30℃ )所抑制。在正常钾浓度 (5.0mmol/L)灌流下 ,无论用阶梯法或斜坡法进行电压钳制 ,羊心蒲氏纤维的背景电流I V曲线 ,均呈外向整流特性。而在低钾灌流条件下 ,该曲线在 - 55及 - 2 5mV处分别形成跨越 (crossover) ,即出现一个内向电流区。在低钾灌流并伴有EAD的情况下 ,于动作电位复极相的低及高电位处 (- 2 5与 - 55mV)分别进行电压钳制。研究发现 :当电压钳制在 - 2 5mV时出现一个与ICa相似的慢内向偏转 ,随之为一缓慢的IK样电流。当电压钳制在 - 55mV时 ,出现的内向电流与If 类似。由以上结果可以推测 ,产生羊心蒲氏纤维EAD的 2个膜电位平台是基于背景电流I V曲线上跨越区 (即 - 2 5mV及 - 55mV)的两个零电流点。低电位水平的触发发放基于ICa,而高电位水平的发放基于If及慢失活INa。
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关键词
羊心蒲氏纤维
动物电位
早后去极后
电生理学
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职称材料
题名
用于细胞核钙成像的新型钙指示剂的构建与鉴定(英文)
1
作者
齐特
杨华乾
范雪新
赵天
郭运波
丁卫
叶海虹
机构
首都医科
大学
基础医
学院
医学遗传学系
北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期592-598,共7页
基金
Supported by National Natural Science Foundation of China(No.31270033)
Beijing Natural Science Foundation(No.5132003)
the Importation and Development of High-Caliber Talents Project of Beijing Municipal Institutions(No.CIT&TCD20130339)~~
文摘
细胞核钙离子是基因转录等细胞核反应过程重要的调控因子.然而,细胞核内钙离子信号的调控机制尚不清楚.缺乏稳定的、敏感的细胞核钙指示剂,是导致其调控机制难以研究的重要原因之一.针对这一问题,设计了能够在细胞核内特异性表达的、具有核定位功能的钙指示剂.以基因编码钙指示剂(GECIs)家族成员GCa MP6为模板,首先融合了对钙离子不敏感的红色荧光蛋白td Tomato来对局部的钙信号进行量化,其次融合了核定位信号(NLS),使GCa MP6能够特异定位于细胞核中.结果表明,NLS-GCa MP6-td Tomato能够在细胞核中有效发挥作用,并且在钙敏感性与动力学上,也与GCa MP6相当.这一新型细胞核钙指示剂将为研究细胞核钙离子的功能及其调控机制提供新的方法与途径.
关键词
细胞核钙离子
钙成像
基因编码钙指示剂
Keywords
nuclear calcium
calcium imaging
genetically-encoded calcium indicator
分类号
Q243 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
双光子显微镜用于在体监测小鼠视交叉上核Ca^(2+)动态变化的方法学研究
被引量:
1
2
作者
王聪
马腾飞
张晨
王元银
王烈成
机构
安徽医科
大学
基础医
学院
生理学教研室
安徽医科
大学
口腔医
学院
北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2017年第11期1583-1587,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81571293)
中国科学院脑功能与脑疾病重点实验室开放课题(编号:2013-1)
文摘
目的通过颅底暴露手术联合双光子荧光成像技术实现在体记录视交叉上核(SCN)神经元钙离子活动信号并研究其活动规律的新型方法。方法对麻醉小鼠实行颅底暴露手术,通过双光子荧光显微镜对已注射钙指示剂的活体小鼠SCN核团钙信号进行实时动态测定。结果成功建立一套小鼠颅底暴露SCN核团手术方法,术后应用双光子显微镜清晰地检测到SCN核团钙离子荧光信号,也能够实现稳定的在体细胞钙离子成像,并发现不同自发反应细胞中钙离子活动规律差异。结论通过颅底暴露手术,利用双光子显微镜成功实现了实时监测SCN区域神经元钙离子信号。
关键词
双光子
荧光成像技术
在体
钙成像
视交叉上核
Keywords
two-photon
fluorescence imaging
in vivo
calcium imaging
suprachiasmatic nucleus
分类号
R319.9 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
足底电击诱导树鼠句条件恐惧记忆模型的建立及抹除
被引量:
1
3
作者
郭呈斌
张晨
王烈成
机构
安徽医科
大学
基础医
学院
生理学教研室
北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2015年第10期1426-1430,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81071075)
生物膜与膜生物工程国家重点实验室开放课题
文摘
目的探索足底电击诱导树鼩条件恐惧记忆模型的建立及抹除方法。方法测定在无刺激条件下,树鼩在明暗箱中的活动规律;然后用梯度刺激实验测定合适的足底电击电压;最后用合适的电压通过足底电击诱导并建立实验组树鼩条件恐惧记忆模型并抹除其记忆。结果正常条件下,树鼩(n=4)在暗箱中的停留时间明显多于明箱中的停留时间(P<0.01);在两明箱中,足底电压梯度刺激实验显示,随着刺激电压的增加,树鼩(n=6)在有刺激的隔间中的停留时间逐渐减少。12 V以后树鼩在有刺激隔间与无刺激隔间的停留时间差异有统计学意义[12 V(P<0.05)、16 V(P<0.01)、20 V(P<0.01)];实验组(n=4)暗箱用16 V刺激电压足底电击能够形成明显的恐惧记忆(P<0.001)。在形成明显的恐惧记忆后,在明箱中给予相应的足底电击4 d,实验组(n=4)树鼩在明箱中停留的时间逐渐减少,与对照组比较差异无统计学意义。结论树鼩更趋于停留在暗箱中;16V为较为适合的足底电击电压;条件恐惧记忆能够被诱导并且被新的刺激完全抹除。
关键词
树鼩
足底电击
条件恐惧记忆形成和抹除
明暗箱
Keywords
tree shrew
foot-shock
fear conditioning memory formation and erasing
light/dark box
分类号
R338.2 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
高浓度葡萄糖促进人二倍体成纤维细胞迅速衰老
被引量:
2
4
作者
高云飞
周建军
陈曦
赵允
苏小琴
刘诚
翟中和
机构
北京大学
生命科学
学院
细胞
生物
学与遗传学系
北京大学生命科学学院生物膜与膜生物工程国家重点实验室
Chiron Corparation
出处
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期572-575,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划项目 (G19990 5 39)
文摘
利用光学显微镜观察和酸性 β 半乳糖苷酶染色技术研究了高浓度葡萄糖对人二倍体成纤维细胞 2BS细胞衰老进程的影响 ,并用流式细胞仪检测了此过程中活性氧和线粒体膜电位差的变化。结果表明 :2 0 0mmol L的葡萄糖对 2BS细胞有生长抑制作用 ,能引起活性氧含量的变化 ,导致线粒体膜电位差显著下降 ,并诱导了细胞的衰老。这为氧化损伤假说提供了新的证据 ,并为研究活性氧和复制衰老之间的关系提供了较好的体系。
关键词
葡萄糖
细胞衰老
人二倍体成纤维细胞
活性氧
ROS
流式细胞术
Keywords
glucose
cellular senescence
HDF
ROS
flow cytometry
分类号
Q255 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
人白细胞抗原-G1对NK92效靶识别过程的影响
5
作者
田兴辉
周建军
方贞付
娄黎明
汪蕴
丰美福
机构
中国
科学
院动物研究所
北京大学
生命科学
学院
北京
师范
大学
生命科学
学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期904-909,共6页
基金
生物膜与膜生物工程国家重点实验室资助项目~~
文摘
人白细胞抗原G (humanleukocyteantigen G ,HLA G)属非经典的主要组织相容性复合体 (majorhistocompatibilitycomplex ,MHC)Ⅰ类分子 ,为自然杀伤细胞 (naturalkiller,NK)抑制性受体的识别配体 ,可以向NK细胞传递抑制性信号 ,从而抑制NK细胞的细胞毒作用 .为了研究HLA G对NK与靶细胞识别作用的影响机制 ,采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术对全长HLA G1的表达和功能进行了探讨 ,并对效靶识别过程中靶细胞 [Ca2 + ]i (胞内自由钙离子浓度 )进行了实时检测 .结果发现 ,全长的HLA G1表达于K5 6 2、JAR和CHO细胞的胞浆和胞膜上 ,它能够部分地抑制NK92的细胞毒作用 .NK92与CHO和GFP CHO细胞作用后 ,靶细胞 [Ca2 + ]i 出现了明显的升高 ,HLA G1的表达则抑制了靶细胞 [Ca2 + ]i的升高 .结果提示 :靶细胞[Ca2 + ]i 的升高是有效的细胞杀伤作用的必要条件 ,HLA
关键词
人白细胞抗原-G1
NK92
效靶识别过程
影响
胞内钙离子
免疫抑制
Keywords
HLA G1,NK92 cells,target cells,intracellular Ca 2+ ,immunoinhibition
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
羊心蒲氏纤维两个水平的早后去极化及其离子机制
6
作者
徐坚
王知青
王忠民
刘泰甦
机构
北京大学
生命科学
学院
出处
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第4期517-524,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目!(39770 2 78)
文摘
用双电极电压箝制技术研究了羊心蒲氏纤维早后去极化 (Earlyafterdepolarization ,EAD)的发生及其离子机制。在低钾生理溶液 (2 .5mmol/LK+ )灌流下 ,于自发活动基础上可诱发出 2个膜电位水平 (- 2 5与 - 55mV)的EAD。低电位水平的发放可被硝苯吡啶 (2 .0 μmol/L)消除 ,而高电位的发放可由利多卡因 (10 μmol/L)或低温 (30℃ )所抑制。在正常钾浓度 (5.0mmol/L)灌流下 ,无论用阶梯法或斜坡法进行电压钳制 ,羊心蒲氏纤维的背景电流I V曲线 ,均呈外向整流特性。而在低钾灌流条件下 ,该曲线在 - 55及 - 2 5mV处分别形成跨越 (crossover) ,即出现一个内向电流区。在低钾灌流并伴有EAD的情况下 ,于动作电位复极相的低及高电位处 (- 2 5与 - 55mV)分别进行电压钳制。研究发现 :当电压钳制在 - 2 5mV时出现一个与ICa相似的慢内向偏转 ,随之为一缓慢的IK样电流。当电压钳制在 - 55mV时 ,出现的内向电流与If 类似。由以上结果可以推测 ,产生羊心蒲氏纤维EAD的 2个膜电位平台是基于背景电流I V曲线上跨越区 (即 - 2 5mV及 - 55mV)的两个零电流点。低电位水平的触发发放基于ICa,而高电位水平的发放基于If及慢失活INa。
关键词
羊心蒲氏纤维
动物电位
早后去极后
电生理学
Keywords
purkinje fibers
action potential
early afterdepolarization
low K\++
nifedipine
lidocaine
I Ca
I f
分类号
Q424 [生物学—神经生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用于细胞核钙成像的新型钙指示剂的构建与鉴定(英文)
齐特
杨华乾
范雪新
赵天
郭运波
丁卫
叶海虹
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
2
双光子显微镜用于在体监测小鼠视交叉上核Ca^(2+)动态变化的方法学研究
王聪
马腾飞
张晨
王元银
王烈成
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2017
1
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职称材料
3
足底电击诱导树鼠句条件恐惧记忆模型的建立及抹除
郭呈斌
张晨
王烈成
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2015
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
高浓度葡萄糖促进人二倍体成纤维细胞迅速衰老
高云飞
周建军
陈曦
赵允
苏小琴
刘诚
翟中和
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2002
2
在线阅读
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职称材料
5
人白细胞抗原-G1对NK92效靶识别过程的影响
田兴辉
周建军
方贞付
娄黎明
汪蕴
丰美福
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
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职称材料
6
羊心蒲氏纤维两个水平的早后去极化及其离子机制
徐坚
王知青
王忠民
刘泰甦
《北京大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2000
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