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体外诱导人脐血CD34^+细胞向肝细胞的分化 被引量:1
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作者 张芳婷 叶静 +4 位作者 万汇涓 龙霞 聂李平 于洁 房家智 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期143-146,共4页
目的探讨在体外培养条件下人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化。方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含50 mL/L FBS,1×ITS,4.7 mg/L亚油酸,10-4mol/L 2-磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,并以FGF4(100μg/L)、HGF(20μg... 目的探讨在体外培养条件下人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化。方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含50 mL/L FBS,1×ITS,4.7 mg/L亚油酸,10-4mol/L 2-磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,并以FGF4(100μg/L)、HGF(20μg/L)进行诱导。分别于生长因子刺激前和刺激8、16 d时留取细胞。通过RT-PCR对ALB、AFP、GATA-4等mRNA的表达水平进行检测;用免疫细胞化学染色检测ALB蛋白的表达,并收集培养液测定ALB的质量浓度。结果流式细胞仪检测结果显示CD34+细胞的平均分离纯度>90%,达到分离要求。RT-PCR检测到诱导后的CD34+细胞表达ALB、AFP、GATA4 mRNA。免疫细胞化学染色可见诱导16 d的CD34+细胞出现ALB阳性表达细胞,ELISA检测表明诱导组8、16 d培养液中的ALB质量浓度明显增高,与诱导前和未诱导组相比均有显著差异(P<0.01)。结论在体外培养条件下,脐血CD34+造血干细胞可分化为表达白蛋白的类肝细胞。 展开更多
关键词 脐血CD34^+细胞 肝细胞 分化
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轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析 被引量:1
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作者 陈卫东 李建新 房家智 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期13-14,i0001,共3页
目的对临床诊断为轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析。方法用PCR法对β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其单核苷酸多态性。结果β-珠蛋白基因分析片段中共发现3个位点存在单核苷酸多... 目的对临床诊断为轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析。方法用PCR法对β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其单核苷酸多态性。结果β-珠蛋白基因分析片段中共发现3个位点存在单核苷酸多态性,分别是外显子1第59位的T/C多态性、内含子2第-16位的G/C多态性及内含子2第-74位的T/G多态性。结论同国外报道的正常人群相比,轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因单核苷酸多态性位点显著减少,各位点的碱基频率也有不同。 展开更多
关键词 Β-珠蛋白基因 单核苷酸多态性 轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血 DNA测序
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不含佛波醇酯和霍乱毒素条件下黑素细胞的培养 被引量:6
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作者 李建军 郑锦芬 +4 位作者 江智茂 张芳婷 钟绮丽 马刚 程滨珠 《岭南皮肤性病科杂志》 2006年第5期336-339,共4页
目的:建立不含佛波醇酯(TPA)和霍乱毒素(CT)培养液培养人类正常表皮黑素细胞的方法,避免TPA的致瘤危险和霍乱毒素的毒性。方法:临床环切包皮经中性酶-胰酶(D ispaseⅡ-Trypsin)两步消化后,获得表皮基底细胞悬液,于不含TPA和CT的KC-SFM... 目的:建立不含佛波醇酯(TPA)和霍乱毒素(CT)培养液培养人类正常表皮黑素细胞的方法,避免TPA的致瘤危险和霍乱毒素的毒性。方法:临床环切包皮经中性酶-胰酶(D ispaseⅡ-Trypsin)两步消化后,获得表皮基底细胞悬液,于不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞无血清培养基培养,用差速贴壁法及胰酶差速消化法去除角质形成细胞,用两段法去除成纤维细胞污染,观察黑素细胞的增殖情况和树突伸展状态,采用多巴(Dopa)染色和免疫组化对黑素细胞进行鉴定。结果:经过7天的培养,黑素细胞达到70%汇合,细胞呈双极、三极或多极的树突状。经1-2次传代,黑素细胞纯度达98%以上,Dopa染色和抗S-100单抗染色阳性。结论:用不含TPA和CT的KC-SFM角质形成细胞培养基可以获得大量高纯度黑色素细胞。 展开更多
关键词 皮肤 黑素细胞 细胞培养
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新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究
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作者 张芳婷 于洁 +4 位作者 蔡志明 房家智 万汇涓 叶静 尹美珺 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期220-223,共4页
目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2 d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物,... 目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2 d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物,通过常规染色和电镜技术对生精小管中生精细胞组成和形态进行观察;以薄层明胶水解法检测精子顶体蛋白酶活性;采用ISCI技术检测移植物中具有成熟形态精子的受精能力。结果移植物的HE染色发现,新生小鼠睾丸组织在裸鼠体内已启动并进行精子发生过程,生精小管中含有包括精子在内的所有类型生精细胞;移植物组织经处理后,可计数到具有镰刀头状的长尾精子约1×103个/mg移植物;透射电镜标本中观察到的精原细胞和精母细胞均具有正常超微结构;薄层明胶水解法检测可观察到顶体蛋白酶呈阳性反应的精子;ICSI结果显示,单纯ICSI处理组与ICSI+电激活组均有受精和卵裂现象发生。结论仅含有原始生精细胞的新生小鼠睾丸组织在异体异位移植到裸鼠体内后,可以产生形态正常并具有受精能力的精子。 展开更多
关键词 睾丸组织 异体异位移植 精子 卵胞浆内单精子显微注射 新生小鼠
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5氮杂脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞中抑癌基因p16 mRNA表达的影响
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作者 叶静 范昭 +9 位作者 胡慧 李明华 万汇涓 于洁 YE Jing FAN Zhao HU Hui LI Ming hua WAN Hui juan YU Jie 《临床荟萃》 CAS 2012年第6期489-491,494,共4页
目的探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响。方法分别用5-aza-cdr 5、10和20μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因... 目的探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响。方法分别用5-aza-cdr 5、10和20μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因甲基化检测;绿色荧光染料实时反转录聚合酶链反应(SYBR GreenqRT-PCR)检测p16mRNA表达。结果在未处理的MCF-7细胞中(对照)p16基因呈完全甲基化状态,随着5-aza-cdr浓度增加,甲基化水平逐渐减弱,至5-aza-cdr 20μmol/L时p16基因甲基化状态完全被逆转;p16mRNA表达水平也随着药物剂量的递增逐渐增加,5-aza-cdr 20μmol/L处理组与5、10μmol/L处理组以及未处理组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论乳腺癌细胞MCF-7中p16基因的甲基化能被5-aza-cdr逆转,去甲基化后可以促进p16mRNA表达。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 DNA甲基化 基因 p16 聚合酶链反应
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生活方式的管理对新诊断2型糖尿病患者肠道菌群的影响 被引量:5
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作者 洪小瑜 戴亚丽 +7 位作者 林秋讯 庄常水 韩令川 卢东晖 刘虹丽 薛冬梅 谢谦 林远 《罕少疾病杂志》 2021年第2期99-102,共4页
目的对于新诊的2型糖尿病患者可首选生活方式管理,本研究探讨仅通过生活方式的管理(饮食以及运动控制)对新诊的2型糖尿病患者肠道菌群的影响,以及对体重、血糖(空腹以及餐后2小时)、糖化血红蛋白(Hb A1C%)、胰岛素、血脂、胰岛素抵抗指... 目的对于新诊的2型糖尿病患者可首选生活方式管理,本研究探讨仅通过生活方式的管理(饮食以及运动控制)对新诊的2型糖尿病患者肠道菌群的影响,以及对体重、血糖(空腹以及餐后2小时)、糖化血红蛋白(Hb A1C%)、胰岛素、血脂、胰岛素抵抗指数等的影响。方法对2018年2月至2019年7月就诊于北京大学深圳医院内分泌科的新诊的2型糖尿病患者共30例(入组34例,脱落4例),进行小班化的生活方式教育,使糖尿病患者掌握正确的生活方式。入组前检测糖尿病相关指标(体重、BMI、空腹以及75g OGTT2小时血糖和胰岛素,Hb A1C%,胰岛素抵抗指数,血脂等),留取大便标本,使用16S rDNA实时荧光定量PCR技术检测肠道菌群。在随诊的12周中,患者仅生活方式管理(饮食+运动),每月检测指尖血糖,12周后重复检测上述生化指标,再留取大便标本,用同样方法再次检测肠道菌群。结果采用SPSS 23.0软件进行统计学分析,通过3个月生活方式的管理,30名新诊的2型糖尿病患者体重下降(3.4±1.8)kg,Hb A1C%下降(0.9±0.3)%,空腹血糖下降(1.9±0.4)mmol/L,75g OGTT 2h血糖下降(2.6±0.2)mmol/L,胆固醇(TC)下降(0.5±0.1)mmol/L,胰岛素抵抗指数下降0.9±0.8(以上P值均<0.05);经过3个月生活方式管理,梭杆菌(Fusobacteria)在2型糖尿病肠道菌群中减少(P值<0.05)。空腹胰岛素,OGTT2小时胰岛素,TG、HDL、LDL均较入组前无明显改善(P>0.05)。结论生活方式管理可以通过减少梭杆菌改善2型糖尿病患者肠道菌群,减轻体重并改善患者血糖以及胰岛素抵抗,是2型糖尿病患者有效的治疗方法。 展开更多
关键词 生活方式管理 2型糖尿病 肠道菌群 胰岛素抵抗指数
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外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道灌洗液中细胞因子的表达 被引量:1
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作者 张永科 谢君 法萍萍 《中国实用医药》 2018年第22期36-38,共3页
目的检测并分析阴道灌洗液中白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)等细胞因子的浓度,探讨局部免疫因素在外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)及复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)发病中的作用。方法选取育龄期在妇科门诊就诊的34例VV... 目的检测并分析阴道灌洗液中白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)等细胞因子的浓度,探讨局部免疫因素在外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)及复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)发病中的作用。方法选取育龄期在妇科门诊就诊的34例VVC患者作为VVC组,12例RVVC患者作为RVVC组,同期育龄期健康体检女性50例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)对三组阴道灌洗液中IL-2、IL-6、IL-8的浓度进行检测,并进行比较。结果 VVC组、RVVC组IL-2浓度分别为(6.24±0.45)、(6.30±1.62)pg/ml,均低于对照组的(8.12±0.23)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。VVC组、RVVC组IL-8浓度分别为(8.31±0.23)、(8.55±0.49)pg/ml,均高于对照组的(5.92±1.02)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。VVC组、RVVC组IL-6浓度分别为(0.86±0.02)、(0.95±0.11)pg/ml,与对照组的(0.74±0.17)pg/ml比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RVVC与VVC患者存在阴道局部免疫失衡,调节阴道内免疫稳态可能对治疗该两种疾病有积极意义。 展开更多
关键词 外阴阴道假丝酵母菌病 复发性外阴阴道假丝酵母菌病 阴道灌洗液 细胞因子
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