牛胎肺间充质干细胞体外培养及生物学特性研究

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作者 李霞云 侯玲玲 +3 位作者 马月辉 李向臣 王开功 关伟军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10473-10475,10479,共4页

[目的]建立牛胎肺间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外培养体系并对其进行生物学特性研究。[方法]取3～5月龄牛胎儿肺脏,得到MSCs。通过控制胰酶消化时间,去除难消化的上皮样贴壁细胞,获得纯化的牛肺MSCs,研究其形态、增殖... [目的]建立牛胎肺间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外培养体系并对其进行生物学特性研究。[方法]取3～5月龄牛胎儿肺脏,得到MSCs。通过控制胰酶消化时间,去除难消化的上皮样贴壁细胞,获得纯化的牛肺MSCs,研究其形态、增殖情况及体外诱导分化潜能。[结果]牛胎肺MSCs可在体外扩增培养,传至24代以上,表达CD29、CD44和CD166,不表达CD34、CD45和BOLA-DR,并具有向成骨细胞诱导分化的潜能。[结论]从牛胎肺中可以分离出MSCs,可以在体外培养,并可诱导分化为成骨细胞。 展开更多

关键词 肺 间充质干细胞 分离培养 鉴定 分化能力

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北京油鸡肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化状态检测与分析 被引量：9

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作者 李金龙 唐韶青 +2 位作者 赵萌 王海潮 徐青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1784-1792,共9页

以17周龄北京油鸡为试验材料,应用甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)方法检测肌肉和卵巢组织的基因组DNA甲基化模式和程度,进而分析肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化的差异。结果表明,应用12对选... 以17周龄北京油鸡为试验材料,应用甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)方法检测肌肉和卵巢组织的基因组DNA甲基化模式和程度,进而分析肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化的差异。结果表明,应用12对选择性扩增引物共产生4 297条清晰可辨的扩增条带,平均每个个体每对引物组合可获得10~20个条带。在检测的个体中,肌肉组织的甲基化水平为35.86%,卵巢组织为31.50%,2种组织的甲基化水平差异显著(P<0.01)。北京油鸡体重与肌肉组织的甲基化水平存在极显著负相关(P<0.01),与卵巢组织的甲基化水平的相关性未达到显著水平(P>0.05)。分离鉴定了5个组织特异性的甲基化片段。结果显示,北京油鸡肌肉和卵巢组织的基因组DNA的甲基化状态存在差异,而肌肉组织的甲基化状态对北京油鸡的体重具有重要作用。 展开更多

关键词 甲基化 组织 体重 北京油鸡 MSAP

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基于血液代谢组筛选奶牛血氧饱和度相关代谢物及通路

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作者 龙怡舟 娄文琦 +6 位作者 黄上真 师睿 陈功 李斌 次桑卓玛 徐青 王雅春 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期621-632,共12页

旨在基于奶牛血氧饱和度(blood oxygen saturation,BOS)高、低组的血液代谢物,尝试筛选BOS相关差异代谢物及通路。本研究所用血样及个体信息采集自西藏地区两个规模化牧场的60头荷斯坦牛。使用质子核磁共振光谱(proton nuclear magnetic... 旨在基于奶牛血氧饱和度(blood oxygen saturation,BOS)高、低组的血液代谢物,尝试筛选BOS相关差异代谢物及通路。本研究所用血样及个体信息采集自西藏地区两个规模化牧场的60头荷斯坦牛。使用质子核磁共振光谱(proton nuclear magnetic resonance spectroscopy,1H NMR)绝对定量法测定BOS高、低组各30头荷斯坦牛的43种血液代谢物图谱,经差异倍数分析、t检验和变量投影重要性3种方法筛选BOS相关差异代谢物并进行富集分析。结果,共筛选到17种差异代谢物,其中与低BOS组相比,高BOS组血液中甘氨酸、甘露醇和尿素浓度更高(P<0.05),柠檬酸盐、甲酸盐、丙酮酸盐等14种指标浓度更低(P<0.05)。这些差异代谢物富集到乙醛酸和二羧酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等16条显著的代谢通路。差异代谢物与奶牛机体氨基酸和有机酸等多种代谢有关,起到保护组织、治疗损伤、调节细胞稳态、缓解低氧应激等积极作用。综上,本研究筛选到BOS水平相关的差异代谢物以及通路,为后续深入研究奶牛高原适应机制和缓解高原低氧应激提供了参考。 展开更多

关键词 荷斯坦牛 血氧饱和度 血液代谢物 高原低氧应激

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毛发皮质醇激素作为慢性应激评定指标的研究进展 被引量：2

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作者 窦金焕 李钟淑 +1 位作者 徐青 王雅春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第9期2405-2410,共6页

将毛发皮质醇激素作为反映慢性应激程度的黄金标准具有前瞻性和创新性。毛发皮质醇激素不仅可用于检测及估计动物慢性应激程度,且有助于了解动物体生理病理过程,并及时制定行之有效的健康管理策略。血液、唾液、尿液及乳汁中皮质醇激素... 将毛发皮质醇激素作为反映慢性应激程度的黄金标准具有前瞻性和创新性。毛发皮质醇激素不仅可用于检测及估计动物慢性应激程度,且有助于了解动物体生理病理过程,并及时制定行之有效的健康管理策略。血液、唾液、尿液及乳汁中皮质醇激素含量作为反映急性应激程度的模型,被用于检测和建立持续的皮质醇激素昼夜循环规律研究。而毛发作为一个很好的补充模型却可以回顾性地反映慢性应激程度。毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标不仅具有采样应激小、检测灵敏、方便的优点,而且是可遗传性状(h2=0.31),可以作为下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)活性标记,进而利用其解释遗传变异对慢性应激中HPA轴活性变化的影响程度。作者综述了皮质醇激素与动物体健康的关系,慢性应激下机体调节机理及遗传适应改变,慢性应激评定指标研究进展,毛发作为皮质醇激素研究模型的研究进展,以及毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标的限制与未来面对的挑战。 展开更多

关键词 慢性应激 毛发皮质醇激素 检测分析 限制 挑战

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液相色谱-质谱在阿尔茨海默病研究中的应用

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作者 田士军 彭向雷 +2 位作者 郑妍鹏 何金生 洪涛 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1154-1160,共7页

液相色谱-质谱联用(LC-MS)作为集高效分离与定性定量检测为一体的联用技术,近年来在化学、医学、药学和生物化学等领域获得了长足的发展,特别是由科研领域拓展到临床诊断,开启了疾病诊断技术的新篇章。阿尔茨海默病(Alzheimer’s diseas... 液相色谱-质谱联用(LC-MS)作为集高效分离与定性定量检测为一体的联用技术,近年来在化学、医学、药学和生物化学等领域获得了长足的发展,特别是由科研领域拓展到临床诊断,开启了疾病诊断技术的新篇章。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),又称老年性痴呆症,是现代社会第四大致死疾病。随着我国人口的快速老龄化,重视对AD的防治是实现健康老龄化以及国民经济持续发展的重要保障之一。本文对LC-MS的新进展进行了简介,并详细综述了近3年来其在AD研究中的应用,以期相关方法获得更好的理解与更多的关注。 展开更多

关键词 液相色谱-质谱 阿尔茨海默病 临床化学 综述

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表皮干细胞分化调控的研究进展

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作者 黄林生 刘英杰 +2 位作者 侯玲玲 关伟军 马月辉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第16期9723-9724,9727,共3页

表皮干细胞(Epidermal stem cells,ESCs)主要是位于表皮基底层及毛囊外根鞘隆突部,具有自我更新和增殖分化能力的细胞。通过体外分离表皮干细胞、培养皮肤器官样组织和利用细胞工程等方法研究ESCs的增殖、分化调控过程,加深了对ESCs生... 表皮干细胞(Epidermal stem cells,ESCs)主要是位于表皮基底层及毛囊外根鞘隆突部,具有自我更新和增殖分化能力的细胞。通过体外分离表皮干细胞、培养皮肤器官样组织和利用细胞工程等方法研究ESCs的增殖、分化调控过程,加深了对ESCs生物学特征的了解。就近几年来ESCs分化调控机制进行了综述。 展开更多

关键词 表皮干细胞 分化调控 研究进展

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基于SNP芯片信息分析西藏四个本地牛种的血统组成

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作者 马龙刚 刘楠 +9 位作者 尼玛群宗 王欣 陆健 毛华明 陈功 旦增欧珠 拉巴次仁 张楠 于福清 王雅春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4377-4390,共14页

旨在探究西藏4个本地牛种的遗传结构和血统组成。本研究以22头高原荷斯坦牛与20头高原娟姗牛以及45头美国婆罗门牛、46头云南瘤牛和11头婆罗门牛为参照标准品种,待测样品为4个西藏本地品种的177头牛。通过Illumina GGP100K芯片杂交获取... 旨在探究西藏4个本地牛种的遗传结构和血统组成。本研究以22头高原荷斯坦牛与20头高原娟姗牛以及45头美国婆罗门牛、46头云南瘤牛和11头婆罗门牛为参照标准品种,待测样品为4个西藏本地品种的177头牛。通过Illumina GGP100K芯片杂交获取所有待测个体的SNPs数据,利用MEGA X和Admixture等软件对SNPs进行遗传结构与血统组成分析。结果表明,西藏牛较其他西藏本地牛种与高原荷斯坦牛和高原娟姗牛有更近的遗传关系;部分樟木牛和阿沛甲咂牛将西藏牛分为两个大群;日喀则驼峰牛与云南瘤牛遗传关系更近。在日喀则驼峰牛群体中,高原牛血统比例超过90%,在阿沛甲咂牛与西藏牛群体中,高原牛血统也超过了50%,仅在樟木牛群体中,高原牛血统比例为33.15%。其次,在樟木牛群体中,瘤牛血统占比高达18.27%,在阿沛甲咂牛、西藏牛与日喀则驼峰牛群体中,瘤牛血统较少(5%)。在阿沛甲咂牛群体内有高达35.94%的普通牛血统,在樟木牛群体内,奶牛血统高达48.58%。本研究对西藏本地牛种今后的杂交扩繁和横交固定提供了重要指导作用,也为阿沛甲咂牛与樟木牛两个濒危品种的资源保护和利用提供了理论参考。 展开更多

关键词 阿沛甲咂牛 樟木牛 西藏牛 日喀则驼峰牛 SNPs数据 遗传结构 血统组成

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重度冷应激对三河牛血液生化指标及相关基因表达的影响 被引量：12

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作者 李玮 刘蕤 +6 位作者 马尧 李金龙 吴宏军 刘爱荣 俞英 徐青 王雅春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1463-1470,共8页

本研究旨在检测与牛冷应激反应相关的生化指标,筛选参与牛冷应激反应的相关基因。以内蒙古三河牛为研究对象,对30头青年牛进行室外-32℃冷应激处理3h,采集冷应激前后试验个体血样,检测血液生化指标及基因表达量的变化。冷应激3h后,试验... 本研究旨在检测与牛冷应激反应相关的生化指标,筛选参与牛冷应激反应的相关基因。以内蒙古三河牛为研究对象,对30头青年牛进行室外-32℃冷应激处理3h,采集冷应激前后试验个体血样,检测血液生化指标及基因表达量的变化。冷应激3h后,试验个体T3、T4及ACTH3个血液生化指标极显著升高(P<0.01)。mRNA差异显示方法(DDRT)检测到基因LIN54和KLF12在冷应激后表达量降低,荧光定量RT-PCR验证了冷应激后2个基因表达下调(LIN54下调显著(P<0.05),KLF12下调极显著(P<0.01))的结果。筛选到的2个基因分别属于LINC和KLF家族,LINC参与有丝分裂基因的活化,KLF参与细胞增殖和凋亡。T3、T4及ACTH 3项生化指标可以初步作为衡量三河牛冷应激反应强弱的侯选指标在大群体中进行验证,筛选到的2个基因,可作为参与三河牛冷应激反应的重要侯选基因,进一步研究2个基因在牛冷应激反应中的作用机制,综合这些生化指标及侯选基因表达的变化,用于评价个体冷应激反应的强度,在三河牛抗冷应激育种中将具有更广泛的应用价值。 展开更多

关键词 冷应激 三河牛 生化指标 基因表达 MRNA差异显示

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靶向树突状细胞的呼吸道合胞病毒F重组蛋白的构建与体外活性分析

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作者 华颖 彭向雷 +3 位作者 付远辉 郑妍鹏 洪涛 何金生 《北京交通大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期127-133,共7页

分析以人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)为抗原靶向DEC205/CD205受体策略对重组F蛋白表达及活性的影响.F蛋白是RSV的重要中和抗原,克隆RSV F蛋白胞外区的编码基因至可识别鼠... 分析以人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)为抗原靶向DEC205/CD205受体策略对重组F蛋白表达及活性的影响.F蛋白是RSV的重要中和抗原,克隆RSV F蛋白胞外区的编码基因至可识别鼠树突状细胞(Dendritic cells,DCs)DEC205受体的单链抗体(single chain antibody of anti-DEC205,scDEC)的C端,构建可表达重组F蛋白(scDECF)的质粒pVAX1/scDECF,Western blot方法检测scDECF的表达,免疫荧光法和流式细胞术检测表达的scDECF与DEC205受体的结合活性.经Western blot证实在pVAX1/scDECF转染的293T细胞成功表达了scDECF.将所获得的细胞培养上清与表达鼠DEC205受体的细胞CHOmDEC205孵育,用免疫荧光和流式细胞术证实:与作为对照的重组F蛋白scISOF相比,所获得的scDECF与CHOmDEC205细胞呈现明显的结合.本研究成功表达了重组蛋白scDECF,且所获得的重组蛋白scDECF具有与表达DEC205受体的细胞特异性结合的活性. 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 融合糖蛋白 DEC205 树突状细胞 靶向疫苗

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高原地区奶牛血液指标的影响因素分析 被引量：7

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作者 黄上真 马龙刚 +8 位作者 娄文琦 宁景扬 张海亮 胡丽蓉 扎琼 李斌 徐青 巴桑罗布 王雅春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1964-1978,共15页

旨在探究我国高原地区奶牛血液指标的群体规律及其影响因素。本研究测定了拉萨地区不同纯度的荷斯坦牛共435头健康泌乳个体的18项血常规、3项血气、4项电解质和2项生化指标,进行表型相关性分析,并综合牛场、月龄、泌乳阶段、体况评分、... 旨在探究我国高原地区奶牛血液指标的群体规律及其影响因素。本研究测定了拉萨地区不同纯度的荷斯坦牛共435头健康泌乳个体的18项血常规、3项血气、4项电解质和2项生化指标,进行表型相关性分析,并综合牛场、月龄、泌乳阶段、体况评分、荷斯坦牛血统比例和测定时间等影响因素进行方差分析。结果表明,高原地区奶牛群体白细胞计数、红细胞计数(red blood cells,RBC)和血小板计数分别为(7.66±2.14)×10^(9)个·L^(-1)、(6.94±0.74)×10^(12)个·L^(-1)和(405.73±224.48)×10^(9)个·L^(-1),氧分压(partial pressure of oxygen,PO_(2))和二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PCO_(2))分别为(11.28±1.61)kPa和(3.39±0.38)kPa。在27项血液指标中,平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)、血小板分布宽度、血液酸碱度(pH)、钠离子浓度(Na+)和氯离子浓度在个体间变异较小,其变异系数小于5%。相关分析中,PCO_(2)与PO_(2)和pH的相关系数分别为-0.53和-0.55,呈中度负相关,血红蛋白浓度(hemoglobin,HGB)与红细胞压积(hematocrit,HCT)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)与平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、血小板计数与血小板压积呈高度正相关关系(相关系数≥0.95)。方差分析中,月龄显著影响(P<0.05)15个血常规指标,体况评分和泌乳阶段显著影响除MCHC外的6个红细胞系统指标(P<0.05),HGB、HCT、MCV和MCH与荷斯坦牛血统比例呈显著负相关关系(P<0.05)。泌乳中期RBC最高,而MCV和MCH在此阶段最低。测定时间对PCO_(2)、Na+、钙离子浓度(Ca^(2+))、葡萄糖浓度(glucose,GLU)、乳酸浓度(lactic acid,LAC)和动脉血HCT有显著影响(P<0.05),其中PCO_(2)、Ca^(2+)和HCT均在12∶41-14∶10时出现极值。泌乳阶段对PCO_(2)、pH、钾离子浓度、GLU、LAC和动脉血HCT有显影响(P<0.05),泌乳初期动脉血GLU和LAC最低,PCO_(2)最高,碱性最弱。综上,血液指标不同程度地受到奶牛生理状态和外界因素的影响,利用血液指标开展高原牧场奶牛健康检测具有重要意义,并应考虑泌乳阶段、月龄、体况等因素的影响,并注意测定时间的选择。 展开更多

关键词 血常规 血气 电解质 生化指标 高原 奶牛

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牛表皮祖细胞的体外分离培养

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作者 黄林生 侯玲玲 +2 位作者 李向臣 关伟军 马月辉 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第18期11111-11113,11191,共4页

[目的]探索和建立牛表皮祖细胞体外分离与培养体系。[方法]无菌取3个月龄的胎牛皮肤组织,用组织块法培养获得细胞,用L-DMEM培养基(添加5%FBS,0.05 mmol/L CaCl2,20 ng/ml EGF,20 ng/mlbFGF,1%B-27,0.4μg/ml hydrocortisone)置细胞培养... [目的]探索和建立牛表皮祖细胞体外分离与培养体系。[方法]无菌取3个月龄的胎牛皮肤组织,用组织块法培养获得细胞,用L-DMEM培养基(添加5%FBS,0.05 mmol/L CaCl2,20 ng/ml EGF,20 ng/mlbFGF,1%B-27,0.4μg/ml hydrocortisone)置细胞培养箱内培养。在显微镜下观察细胞的克隆形成能力,免疫细胞化学染色鉴定α6、β1整合素。[结果]获得的细胞有很高的克隆形成能力,α6、β1整合素免疫细胞化学染色阳性。RT-PCR检测结果表明,P3代时Oct4基因有表达,但传代超过P11代时,Oct4基本不表达。[结论]该研究可为进一步采用组织工程技术构建皮肤组织奠定基础。 展开更多

关键词 牛表皮祖细胞 分离 培养

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