小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析 被引量：8

1

作者 赵文华 杨仕标 +4 位作者 蒋梅 朱建波 李华春 肖雷 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期8-11,共4页

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF... 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 N M F及H基因 逆转录-聚合酶链反应 同源性 疫苗株

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小RNA病毒基因表达调控研究进展 被引量：3

2

作者 姜明国 信爱国 杨立芳 《动物医学进展》 CSCD 2006年第3期54-58,共5页

小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该科... 小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该科病毒的致病机理和研究真核生物的基因表达调控提供可借鉴的资料。 展开更多

关键词 小RNA病毒 基因表达 内部核糖体进入位点 RNA结构元件

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禽流感病毒免疫研究进展 被引量：5

3

作者 信爱国 宋学林 高华峰 《上海畜牧兽医通讯》 2006年第1期16-18,共3页

关键词 禽流感病毒 免疫研究 负链RNA病毒 A型流感病毒 自然宿主 病毒感染 野生水禽 哺乳动物 正粘病毒科 virus

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亚洲1型口蹄疫病毒RS株非结构蛋白P3区基因特征分析

4

作者 信爱国 李华春 +4 位作者 李乐 朱建波 杨永钦 廖德芳 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2007年第2期1-5,共5页

经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征。结果表明,该毒株P3基因含有2721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459... 经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征。结果表明,该毒株P3基因含有2721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459bp,编码153个氨基酸;3个3B(VPg)基因长度分别是69、72、72bp,分别编码23、24、24个氨基酸;3C基因长度为639bp,编码213个氨基酸;3D基因长度为1410bp,编码470个氨基酸。氨基酸序列比较分析显示,3A基因C末端比其他基因更容易变异,根据3A基因构建的系统进化分析提示该流行毒株与YNBS/58和IND 321/01亲缘关系较近,属同一亚系谱。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 P3区基因 序列分析

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亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达 被引量：2

5

作者 信爱国 李华春 +5 位作者 廖德芳 李乐 高林 杨永钦 张念祖 陈保善 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期500-504,共5页

目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳... 目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C蛋白酶基因,构建转移载体pDual-P1-2A-3C并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-P1-3C。在脂质体介导下将rBacmid-P1-3C转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在Sf9昆虫细胞中共表达P1-2A和3C蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA试验鉴定重组蛋白。结果目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达蛋白与抗亚洲1型FMDV血清发生特异性反应,有良好的抗原性。结论成功在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统 表达

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非洲马瘟病毒群特异性RT-PCR检测方法的研究 被引量：14

6

作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 王金萍 李富祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期204-207,共4页

非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)为双股RNA病毒,感染所有马科动物。设计2对位于AHSV基因组S7片段的引物,经RT-PCR扩增,证实2对引物对6种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,且能对同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿出血热病毒(EH... 非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)为双股RNA病毒,感染所有马科动物。设计2对位于AHSV基因组S7片段的引物,经RT-PCR扩增,证实2对引物对6种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,且能对同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿出血热病毒(EHDV)进行区别诊断。经序列测定及Blast,证实所扩增的条带确为AHSV S7相应位置核苷酸序列,表明已初步建立AHSV群特异性RT-PCR检测方法。 展开更多

关键词 非洲马瘟病毒 S7基因片段 RT-PCR 序列测定

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链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA 被引量：2

7

作者 王继华 信爱国 +5 位作者 朱明旺 苗海生 胡骑 廖德芳 李乐 李华春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期130-133,144,共5页

旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒... 旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 链特异性RT-PCR 复制中间体 负链RNA 感染

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口蹄疫病毒致病性及抗原变异研究进展 被引量：1

8

作者 信爱国 苗海生 《上海畜牧兽医通讯》 2011年第4期14-17,共4页

口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）可以感染各种偶蹄动物,出现不同严重程度的临床症状。虽然近年来在口蹄疫病毒的复制、细胞识别、病毒结构-功能之间的关系等研究方面取得重要进展,但对病毒的致病机理仍然不完全清楚，... 口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）可以感染各种偶蹄动物,出现不同严重程度的临床症状。虽然近年来在口蹄疫病毒的复制、细胞识别、病毒结构-功能之间的关系等研究方面取得重要进展,但对病毒的致病机理仍然不完全清楚，对病毒的致病性、毒力因子与宿主细胞受体等的相互作用以及宿主对感染或免疫接种应答的免疫生物学的认识，对病毒抗原变异，逃避宿主的体液或细胞免疫应答反应，造成病毒的持续感染机理有待进一步深入研究。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 抗原变异 致病性 免疫应答反应 感染机理 细胞识别 virus 结构-功能

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小反刍兽疫研究进展 被引量：86

9

作者 信爱国 杨仁标 向文彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期152-155,共4页

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种严重的烈性、接触性的重大跨国动物疫病。本文从病原学 ,流行病学 ,诊断学和预防控制等方面 ,综述了该病研究现状和研究进展。目前该病在印度等南亚邻近国家存在 ,对我国构成潜在的威胁 。

关键词 小反刍兽疫 病原学 流行病学 诊断 预防 控制

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用乙基环丙沙星重建受猪鼻支原体污染的BHK-21细胞的研究 被引量：3

10

作者 高林 廖德芳 +4 位作者 姚俊 肖雷 李华春 张念祖 李志华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期45-49,共5页

为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体... 为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体污染已被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受支原体污染的细胞提供了参考。 展开更多

关键词 乙基环丙沙星 猪鼻支原体 BHK-21细胞 清除污染

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用乙基环丙沙星重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞 被引量：2

11

作者 高林 廖德芳 +3 位作者 姚俊 张念祖 李华春 李志华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期214-217,共4页

为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠... 为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠杆菌的安全浓度。然后用含该浓度乙基环丙沙星的MEM生长液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理。经过3次循环处理,再传3代后,确认大肠杆菌污染已经被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受细菌污染的细胞提供了参考。 展开更多

关键词 乙基环丙沙星 大肠杆菌 BHK-21细胞 清除污染

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小反刍兽疫血清学监测研究 被引量：1

12

作者 杨仕标 赵文华 蒋梅 《中国动物保健》 2008年第11期63-65,共3页

本文报告对我国西藏自治区阿里发生小反刍兽疫情血清学监测研究结果,从小反刍兽疫确诊病例采集羊血清24份、接触牦牛血清9份和疑似病例羊血清25份,经应用国际标准化c-ELISA方法检测,小反刍兽疫感染羊血清学阳性率达阳性率91.67%,接触牦... 本文报告对我国西藏自治区阿里发生小反刍兽疫情血清学监测研究结果,从小反刍兽疫确诊病例采集羊血清24份、接触牦牛血清9份和疑似病例羊血清25份,经应用国际标准化c-ELISA方法检测,小反刍兽疫感染羊血清学阳性率达阳性率91.67%,接触牦牛血清学阳性率11.11%,表明本病群感染的倾向性以及接触牦牛可能呈隐性感染。流行病学调查表明,本次疫情系输入性的,通过寄养、共享草地和水源、活畜作为礼品赠送、或者活畜非法贸易等方式传入。国内受威胁地区需要加强监测,实施有效的防疫措施,防范本病的再次入侵。 展开更多

关键词 血清学监测 小反刍兽疫 ELISA方法 隐性感染 疑似病例 西藏自治区 国际标准化 羊血清

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单细胞克隆技术提纯分化的IBRS-2细胞研究

13

作者 高林 李乐 +2 位作者 廖德芳 朱明旺 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期87-90,共4页

IBRS-2细胞出现分化变异影响使用,为不影响正常的科学研究,本研究采用单细胞克隆的方法重新提纯,用96孔板经过3周的独立培养后,将具有代表性的4株进行扩增,然后用已知毒价的口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FM-DV)弱毒分别对... IBRS-2细胞出现分化变异影响使用,为不影响正常的科学研究,本研究采用单细胞克隆的方法重新提纯,用96孔板经过3周的独立培养后,将具有代表性的4株进行扩增,然后用已知毒价的口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FM-DV)弱毒分别对其进行接毒试验和TCID50测定。结果表明,B1株克隆细胞的病变最为理想,其TCID50为7.60,比提纯前的4.52更接近实际毒价7.85,且和实际毒价无显著差异。 展开更多

关键词 单细胞克隆 IBRS-2细胞 分化 提纯

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小反刍兽疫灭活抗原RT-PCR检测方法的建立及其相关序列分析 被引量：6

14

作者 赵文华 杨仕标 +3 位作者 朱建波 肖雷 李华春 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2008年第11期16-19,共4页

以灭活的检测用抗原为材料,抽提灭活小反刍兽疫病毒的基因组RNA作为模板,根据参考文献及GenBank下载的序列,设计3对位于F基因的引物(2对为套式引物),进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,所设计引物单独或套式RT-... 以灭活的检测用抗原为材料,抽提灭活小反刍兽疫病毒的基因组RNA作为模板,根据参考文献及GenBank下载的序列,设计3对位于F基因的引物(2对为套式引物),进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,所设计引物单独或套式RT-PCR对模板均有预期大小的片段扩增;扩增片段经核苷酸序列测定和分析,表明所扩增片段为小反刍兽疫病毒的F基因片段。且所设计引物对同属牛瘟病毒、犬瘟热病毒无扩增,证明所用引物为小反刍兽疫病毒特异性引物,此3对引物可用于小反刍兽疫与牛瘟等同属病毒的鉴别诊断。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 F基因 RT—PCR 鉴别诊断

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