UPLC-Q-TOF-MS测定酒石酸泰万菌素可溶性粉中的泰万菌素 被引量：9

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作者 吴家鑫 尚飞 +7 位作者 张国栋 刘敏 张传良 徐金雷 赵梅仙 宋敏 齐鹏 陶蓓蓓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第9期108-110,共3页

本试验建立了酒石酸泰万菌素可溶性粉中泰万菌素含量的超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱检测方法（UPLC-Q-TOF-MS）,并对二级质谱中的离子碎片进行了比对分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2 mmol/L乙酸铵）为流... 本试验建立了酒石酸泰万菌素可溶性粉中泰万菌素含量的超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱检测方法（UPLC-Q-TOF-MS）,并对二级质谱中的离子碎片进行了比对分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液（含2 mmol/L乙酸铵）为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃。质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为正离子全扫描模式,外标法定量。结果表明,药物浓度与峰面积在100-2 000μg/L范围内相关系数R2=0.9992;泰万菌素的检出限为3μg/L,定量限为10μg/L;添加回收率在98.9%-104.7%之间,批内变异系数为1.27%-1.81%,批间变异系数为1.04%-1.59%。利用Molecular Structure correlator对碎片进行了分析比对,为泰万菌素的结构验证提供了依据。 展开更多

关键词 超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱 泰万菌素 可溶性粉

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利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱鉴别预混剂中黄霉素 被引量：5

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作者 吴家鑫 刘敏 +3 位作者 尚飞 齐鹏 张国栋 梁景乐 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第5期24-28,共5页

利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱对预混剂中的黄霉素5种组分进行鉴别分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(含2 mmol/L乙酸铵)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃;质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为负... 利用超高效液相色谱-高分辨四极杆飞行时间质谱对预混剂中的黄霉素5种组分进行鉴别分析。采用C18色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(含2 mmol/L乙酸铵)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃;质谱条件为电喷雾离子源,检测方式为负离子全扫描模式,通过保留时间、精确分子量和二级质谱特征碎片完成对黄霉素的5种组分的鉴别。与高效液相色谱方法比较,本方法具有判断准确、检测快速的特点,具有很好的应用价值。 展开更多

关键词 鉴别 黄霉素 超高效液相色谱 高分辨四极杆飞行时间质谱

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亲水作用液相色谱法测定注射液中泰地罗新含量 被引量：2

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作者 吴家鑫 刘敏 +4 位作者 尚飞 张传良 宋敏 齐鹏 梁景乐 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期231-234,共4页

采用XBridge-BEH Amide(150 mm×4. 6 mm,5μm)亲水作用色谱柱,建立了泰地罗新的检测方法。确定了检测波长,考察了流动相pH、流动相盐体系、流动相洗脱方式对保留时间、对称因子和理论塔板数的影响。结果表明,采用亲水作用色谱柱分... 采用XBridge-BEH Amide(150 mm×4. 6 mm,5μm)亲水作用色谱柱,建立了泰地罗新的检测方法。确定了检测波长,考察了流动相pH、流动相盐体系、流动相洗脱方式对保留时间、对称因子和理论塔板数的影响。结果表明,采用亲水作用色谱柱分离,以乙腈(含10 mmol/L甲酸铵、0. 125%甲酸、5%水)-0. 125%甲酸水溶液(含10 mmol/L甲酸铵)为流动相梯度洗脱,流速为1. 0 m L/min,柱温为30℃,紫外检测波长为280 nm,在此条件下泰地罗新可以获得良好的分离效果。泰地罗新药物质量浓度与峰面积在6. 25～100μg/m L范围内线性关系良好,相关系数R=0. 999 9,检出限为0. 05μg/m L,定量限为0. 14μg/m L,批内添加回收率在97. 8%～102. 1%之间,批内变异系数为1. 69%～3. 12%;批间添加回收率在96. 9%～104. 3%之间,批间变异系数为3. 39%～4. 05%。该方法能够快速、准确地检测泰地罗新含量,且成本低廉,可应用于药物生产中泰地罗新的质量控制。 展开更多

关键词 亲水作用色谱 泰地罗新 定量检测

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超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法快速筛选鉴别猪血浆中的大环内酯类抗生素 被引量：3

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作者 吴家鑫 刘敏 +7 位作者 尚飞 宋敏 张传良 张刚 徐金雷 齐鹏 肖进 郭丽清 《中国兽药杂志》 2018年第9期46-52,共7页

采用超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOP-MS)结合大环内酯类抗生素数据库,建立快速筛查鉴别猪血浆中常见大环内酯类抗生素的方法。猪血浆经甲醇提取,通过UPLC-Q-TOP-MS正离子模式全扫描分析,采用Agilent Extend-... 采用超高效液相色谱串联高分辨四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOP-MS)结合大环内酯类抗生素数据库,建立快速筛查鉴别猪血浆中常见大环内酯类抗生素的方法。猪血浆经甲醇提取,通过UPLC-Q-TOP-MS正离子模式全扫描分析,采用Agilent Extend-C18色谱柱(50×2.1 mm,1.8μm)分离,以乙腈-2 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速0.4 m L/min,柱温40℃,得到猪血浆中大环内酯类抗生素准分子离子峰精确质量数、主要碎片峰的精确质量数和保留时间后,结合大环内酯类抗生素数据库筛查,实现猪血浆中大环内酯类抗生素的快速定性识别。所建数据库包含26种常见猪血浆中大环内酯类抗生素的准分子离子峰精确质量数、主要碎片峰的精确质量数和保留时间,其中13种常见大环内酯类抗生素的检测限在1.00~8.00ng/g范围内。该方法分离度高、检测灵敏,可以作为快速筛查鉴别猪血浆中大环内酯类抗生素的有效方法。 展开更多

关键词 超高效液相色谱 高分辨四极杆飞行时间质谱 猪血浆 大环内酯类抗生素 筛选 鉴别

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河南南阳信阳地区部分规模化猪场猪伪狂犬野毒感染的血清学调查 被引量：5

5

作者 潘文 乔磊 +4 位作者 邵葳 李洁 苏小齐 于雷 黄书林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第11期55-57,共3页

伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种急性传染病,国际动物卫生组织（OIE）将其列为二类传染病。猪是伪狂犬病病毒的最主要宿主,猪感染PRV后的临床症状随着年龄不同差异很大。新生仔猪及1... 伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种急性传染病,国际动物卫生组织（OIE）将其列为二类传染病。猪是伪狂犬病病毒的最主要宿主,猪感染PRV后的临床症状随着年龄不同差异很大。新生仔猪及15日龄以内的仔猪表现明显的神经症状,死亡率达100%。育肥猪常呈隐性感染,成年猪感染后多耐过，但长期排毒，妊娠母猪表现为流产、死胎、木乃伊胎等。 展开更多

关键词 猪伪狂犬 隐性感染 血清学调查 规模化猪场 信阳地区 河南南阳 伪狂犬病病毒 国际动物卫生组织

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一种检测猪伪狂犬病野毒方法的建立 被引量：3

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作者 马良 许磊 李晓冉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期41-43,共3页

猪伪狂犬病是危害养猪业的重要病毒性传染病,如何鉴别疫苗接种动物和野毒感染动物是控制和净化该病的前提。本试验根据不同猪伪狂犬疫苗株gE基因缺失的特点,建立了一种猪伪狂犬病野毒病原核酸的PCR检测方法。该方法可以检出猪伪狂犬病野... 猪伪狂犬病是危害养猪业的重要病毒性传染病,如何鉴别疫苗接种动物和野毒感染动物是控制和净化该病的前提。本试验根据不同猪伪狂犬疫苗株gE基因缺失的特点,建立了一种猪伪狂犬病野毒病原核酸的PCR检测方法。该方法可以检出猪伪狂犬病野毒,而不能检出猪伪狂犬病疫苗株,实现了疫苗毒和野毒的鉴别检验,同时不能检测出猪常见病毒性传染病病原。最低检测限度为10~3个病毒核酸拷贝。在组织样品检测中不受宿主组织核酸干扰,能区分野毒感染动物组织和疫苗免疫动物组织,是一种值得推广的伪狂犬病毒野毒检测方法。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 野毒 鉴别 PCR

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猪伪狂犬病病毒ZY-2014株的分离与鉴定 被引量：4

7

作者 潘文 马良 +3 位作者 张贺楠 邵葳 李晓冉 黄书林 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第5期1-6,共6页

从河南省某规模化猪场的死亡仔猪中分离到1株疑似猪伪狂犬病病毒,命名为ZY-2014株,并对其进行了PCR鉴定、g E基因序列分析、动物感染试验等鉴定。病毒经vero细胞培养可产生典型细胞病变,用Reed-Muench法测定病毒的滴度为107.4TCID50/100... 从河南省某规模化猪场的死亡仔猪中分离到1株疑似猪伪狂犬病病毒,命名为ZY-2014株,并对其进行了PCR鉴定、g E基因序列分析、动物感染试验等鉴定。病毒经vero细胞培养可产生典型细胞病变,用Reed-Muench法测定病毒的滴度为107.4TCID50/100μL。分离病毒基因组DNA经过gD、gE、gG、三对特异性检测引物扩增后,均出现伪狂犬病毒特异性目的条带,分别为217 bp、636 bp、1440 bp。测序结果与预期结果相符。将ZY-2014毒株g E基因测序结果与10个新分离毒株、14个经典毒株进行同源性比对分析,其核苷酸及推导的氨基酸序列与国内2012年以来新分离毒株的同源性分别为99.6%-100%和99.1%-100%,与2012年以前分离毒株核苷酸及推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%-99.6%和95.7%-99.3%。遗传进化树结果显示,所分离的ZY-2014毒株与2012年以来新分离毒株同属一分支,与经典毒株分属不同进化分支。动物攻毒试验中,家兔和小鼠均出现明显的伪狂犬病临床症状。鉴定试验表明,分离株ZY-2014是一株猪伪狂犬变异毒株。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 分离 鉴定

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11株禽腺病毒遗传变异分析 被引量：2

8

作者 杨小蓉 王楠 +5 位作者 王天恺 王增福 李晓冉 潘文 孟凡磊 马良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期15-18,23,共5页

为了分析2019年禽腺病毒(FAdV)遗传变异情况,通过PCR分段扩增、测序,获得11株FAdV Hexon基因序列。经分析发现,11株腺病毒Hexon基因高变区核苷酸序列同源性为66.1%~100.0%,推导编码的氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%;与参考株核苷酸序... 为了分析2019年禽腺病毒(FAdV)遗传变异情况,通过PCR分段扩增、测序,获得11株FAdV Hexon基因序列。经分析发现,11株腺病毒Hexon基因高变区核苷酸序列同源性为66.1%~100.0%,推导编码的氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%;与参考株核苷酸序列同源性为65.4%~100%,与参考株氨基酸序列同源性为56.5%~100.0%。其中9株序列基因长度均为738 nt,编码246个氨基酸;GX-1901001毒株序列基因长度均为750 nt,编码250个氨基酸;HB-1911039毒株序列基因长度均为756 nt,编码252个氨基酸。与目前流行株相比,本试验获得的11株腺病毒Hexon基因存在不同程度的变异或缺失,在进化树中已形成多个小分支。表明我国FAdV在流行过程中已出现变异。本试验结果为监测和分析我国FAdV的变异和演化提供了有价值的基因信息数据。 展开更多

关键词 禽腺病毒 Hexon基因 序列测定 变异分析

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猪乙脑传代细胞活疫苗(SAI4-14-2株)对仔猪的安全性试验

9

作者 潘文 韩伟 +1 位作者 姜国华 郝霖雨 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期31-33,37,共4页

评价以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪的安全性,将猪乙脑传代细胞活疫苗,通过1次超剂量（10倍剂量）免疫40～45日龄的仔猪,同时设立病毒液组、冻干保护剂组、空白对照组,监测仔猪体温和临床症状,采集免疫... 评价以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪的安全性,将猪乙脑传代细胞活疫苗,通过1次超剂量（10倍剂量）免疫40～45日龄的仔猪,同时设立病毒液组、冻干保护剂组、空白对照组,监测仔猪体温和临床症状,采集免疫前和免疫后第1、2、3、5、7天血浆,仔猪于免疫后第14天无菌取脑组织.对采集的血样及脑组织进行蚀斑检测,并对血样及脑组织盲传3代的细胞培养液进行RT-PCR检测.结果,试验猪免疫前后临床观察、体温,免疫后接种部位均未见异常.蚀斑法和RT-PCR法检测各试验组仔猪血浆和脑组织提取液均未检出乙脑病毒.表明以Vero细胞为基质的猪乙脑传代细胞活疫苗（SA14-14-2株）对仔猪是安全的. 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎 SA14-14-2减毒株 VERO细胞 疫苗 安全性

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10株猪流行性腹泻病毒序列分析 被引量：1

10

作者 杨小蓉 马良 +2 位作者 许磊 赵晨璐 周建民 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期34-37,共4页

为了分析2015-2018年北方地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)遗传变异情况,通过RT-PCR分段扩增、测序,获得10株PEDV S基因序列。分析发现,10株S基因核苷酸序列同源性为96.8%~99.4%,推导编码的氨基酸序列同源性为96.5%~99.3%;与参考株核苷酸序... 为了分析2015-2018年北方地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)遗传变异情况,通过RT-PCR分段扩增、测序,获得10株PEDV S基因序列。分析发现,10株S基因核苷酸序列同源性为96.8%~99.4%,推导编码的氨基酸序列同源性为96.5%~99.3%;与参考株核苷酸序列同源性为93.4%~99.5%,与参考株氨基酸序列同源性为92.0%~99.4%。其中,4株序列基因长度均为4161 nt,编码1386个氨基酸;6株序列基因长度均为4158 nt,编码1385个氨基酸,与目前流行的变异株和经典株CV777相比,这6株S基因推导的氨基酸序列已分别在131位、1196位出现1个氨基酸缺失,在进化树中已形成多个小分支。由此表明,我国PEDV在流行过程中已出现较大变异。作者研究结果为监测和分析我国PEDV的变异和演化提供了有价值的基因信息数据。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 S基因 序列测定 变异分析

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应用病毒计数仪定量检测口蹄疫灭活抗原方法的建立 被引量：1

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作者 杨小蓉 严石 +1 位作者 许磊 马良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期111-112,118,共3页

目前国内对口蹄疫(FMD)疫苗抗原的生产质量控制检测,主要依靠蔗糖密度梯度法定量病毒146S检测。但该方法操作过程繁琐,操作时间太长,1次能检测样品数量有限,检测效率不高。本研究采用病毒计数仪对FMDV完整粒子进行定量检测,同时与蔗糖... 目前国内对口蹄疫(FMD)疫苗抗原的生产质量控制检测,主要依靠蔗糖密度梯度法定量病毒146S检测。但该方法操作过程繁琐,操作时间太长,1次能检测样品数量有限,检测效率不高。本研究采用病毒计数仪对FMDV完整粒子进行定量检测,同时与蔗糖密度梯度法定量病毒146S检测结果进行对比,本研究方法检测时间只需10min,有耗时短、受干扰因素少、准确性较高的显著特点,为FMD疫苗的生产质量控制提供了一种可用的方法。 展开更多

关键词 口蹄疫灭活抗原 病毒计数仪 定量检测

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鸡传染性支气管炎病毒AH1/15株S1基因的克隆与序列分析

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作者 于雷 张贺楠 +3 位作者 张钊伟 程海波 史张燕 周建民 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第11期17-20,共4页

2015年1月从安徽省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒,命名为AH1/15株,使用特异性引物对AH1/15分离株S1基因进行扩增、克隆及序列测定,并将其与国内外流行株及参考毒株进行比对。结果显示,IBV AH1/15株S1... 2015年1月从安徽省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒,命名为AH1/15株,使用特异性引物对AH1/15分离株S1基因进行扩增、克隆及序列测定,并将其与国内外流行株及参考毒株进行比对。结果显示,IBV AH1/15株S1基因全长为1638 bp;同源性分析结果发现,AH1/15株与国内外疫苗毒株核苷酸同源性为57.0%~59.6%;遗传进化分析结果发现,AH1/15株与国内外主要疫苗株以及流行的LX4型毒株亲缘关系较远,与近几年国内分离的CK/CH/GX/NN11-4、CK/CH/GD/CG11、CK/CH/SD09/005等毒株亲缘关系最近。结果表明,AH1/15是一株不同于疫苗株和流行株的变异株。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 S1基因 序列分析

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