动物炭疽病的流行病学特征及其诊断与防控 被引量：9

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作者 孙翔翔 张培培 +2 位作者 范颖 张研博 刘蒙达 《中国动物检疫》 CAS 2023年第4期77-84,共8页

炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种急性、接触性人兽共患病,是一种自然疫源性疫病,各种家畜和野生动物对其均易感。炭疽杆菌在体外可以形成芽孢,对外界具有很强的抵抗力。该病在世界各国均有流行,人主要通过接触患病动物、污染的动物制品或... 炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种急性、接触性人兽共患病,是一种自然疫源性疫病,各种家畜和野生动物对其均易感。炭疽杆菌在体外可以形成芽孢,对外界具有很强的抵抗力。该病在世界各国均有流行,人主要通过接触患病动物、污染的动物制品或环境而感染。该病严重危害人畜安全,是阻碍畜牧业发展的主要疫病之一。近几年国内多个省份报道了炭疽病的发生,引起社会广泛关注。本文整理、归纳、分析了动物炭疽病的病原学特征、流行病学特点、危害、诊断方法和防控措施等,以期为该病防控提供参考。 展开更多

关键词 炭疽病 炭疽杆菌 流行病学 诊断技术 防控措施

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项目教学法在微生物学实验课中的应用及思考

2

作者 张欢 陈晓月 +2 位作者 刘金玲 潘树德 文雪霞 《现代畜牧科技》 2024年第11期176-179,共4页

为培养学生自主学习能力和实践创新能力,将项目教学法引入微生物学实验课中。根据实验教学大纲制定实验项目,难易程度由简到难、逐级递进。教学过程以学生为中心,学生查阅资料,设计验证方法并实施项目,最终实现独立完成实验项目的目的... 为培养学生自主学习能力和实践创新能力,将项目教学法引入微生物学实验课中。根据实验教学大纲制定实验项目,难易程度由简到难、逐级递进。教学过程以学生为中心,学生查阅资料,设计验证方法并实施项目,最终实现独立完成实验项目的目的。实践结果表明,经过项目化教学改革,在教师教学和学生学习成效2个方面均得到明显提升,学生的动手能力和解决问题的能力都有明显提高。 展开更多

关键词 微生物学实验课 项目教学法 教学改革

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小鼠模型在布鲁氏菌感染研究中的应用

3

作者 焉鑫 李继文 +10 位作者 孙明军 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 李嘉琪 靳继惠 黄孟锟 邵卫星 南文龙 樊晓旭 孙淑芳 《中国动物检疫》 2025年第3期65-71,共7页

布鲁氏菌病(简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的,我国当前重点防控的人兽共患病。布鲁氏菌毒力和致病机制研究是有效预防和控制布病的基础,而小鼠模型的应用极大促进了上述研究进程。感染途径、感染剂量、小鼠品系、年龄等均是布鲁氏菌小... 布鲁氏菌病(简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的,我国当前重点防控的人兽共患病。布鲁氏菌毒力和致病机制研究是有效预防和控制布病的基础,而小鼠模型的应用极大促进了上述研究进程。感染途径、感染剂量、小鼠品系、年龄等均是布鲁氏菌小鼠感染模型建立的影响因素,其中腹腔注射感染途径是小鼠模型测试布鲁氏菌毒力的首选。布鲁氏菌在小鼠模型中的感染分为感染早期、急性感染期、慢性稳定期和慢性衰退期4个阶段,不同感染阶段小鼠的临床症状和病理学免疫学特征均有所差异。另外,在小鼠中很少发生布鲁氏菌水平和垂直传播。根据布鲁氏菌在小鼠感染和免疫方面的研究成果,世界动物卫生组织《陆生动物诊断试验与疫苗手册》明确规定了布病疫苗生产环节在小鼠模型上的残留毒力测试和免疫原性测试质量标准。本文总结了布鲁氏菌在小鼠模型中的感染模式、感染影响因素、水平传播特征、临床症状和病理学免疫学特征以及布病疫苗生产标准要求等,以期为布鲁氏菌的分子致病机制、疫苗等研究提供参考资料。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 小鼠感染模型 感染影响因素 感染模式

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免疫层析技术在布鲁氏菌病检测中的研究现状

4

作者 陈明泽 焉鑫 +8 位作者 孙明军 邵卫星 田莉莉 张皓博 樊晓旭 杜秋明 梁晚枫 孙淑芳 南文龙 《中国动物检疫》 2025年第3期59-64,共6页

布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人兽共患病,对人类健康和畜牧业造成重大影响,快速准确诊断是防控该病的关键。免疫层析技术(immunochromatographic assay,ICA)是一种将抗原抗体特异性反应以及色谱原理相结合的快速检... 布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人兽共患病,对人类健康和畜牧业造成重大影响,快速准确诊断是防控该病的关键。免疫层析技术(immunochromatographic assay,ICA)是一种将抗原抗体特异性反应以及色谱原理相结合的快速检测技术,具有操作简便、检测快速、结果直观等优点,适用于布病的临场检测。研发ICA技术时,常选用脂多糖(LPS)、全菌蛋白、外膜蛋白这3类布鲁氏菌抗原。LPS是布鲁氏菌抗体检测技术开发时最常用的抗原,全菌蛋白能够提高检测灵敏度,而外膜蛋白特异性好,可与其他细菌进行有效区分。ICA检测结果易受制备工艺、储存条件、使用方法等条件影响与限制,目前多用于布病初筛,病例确诊时可联合使用ELISA、荧光偏振试验(FPA)等方法。本文从抗体和病原检测两方面综述了该技术在布病检测中的应用,分析了技术特点以及抗原抗体的选择,展望了其与新技术、新型仪器融合发展的趋势,以期为我国布病防控提供技术支持,同时为其他动物疫病的快速检测技术研发提供参考。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 免疫层析 检测技术

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布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条的研制 被引量：1

5

作者 杨若松 马增彬 +3 位作者 龚雅云 蔡云虹 南文龙 李知新 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期85-89,共5页

本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤... 本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤维素膜作为量子点结合垫,经组装、切割制备免疫层析试纸条。使用布鲁氏菌病阳性血清国家标准品测定所建立方法的灵敏度和稳定性,使用牛鼻气管炎阳性血清等常见牛病血清及牛布鲁氏菌病阴性血清国家标准品评价该方法的特异性;使用建立的方法与间接ELISA(iELISA)同步检测100份临床血清样品,比较两者的符合率。结果显示:量子点荧光微球免疫层析试纸条的最低检出限为0.3 IU/mL,常温保存18个月其检测灵敏度不变;与牛鼻气管炎、牛流行性腹泻、牛结节性皮肤病等临床疫病的血清抗体无交叉反应;与iELISA方法的阳性符合率为94.2%,阴性符合率为100%,总符合率为97.0%。结果表明,本研究建立的布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条敏感、特异、稳定,操作时不需要借助仪器,适用于临床快速检测和初筛,可为我国布鲁氏菌病防控提供技术支持。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 荧光微球 免疫层析技术 脂多糖

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羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究

6

作者 吴瑶 焉鑫 +14 位作者 孙明军 屈海龙 郭晓涵 闫昊 张培培 孙世雄 李嘉琪 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 南文龙 邵卫星 王方昆 樊晓旭 孙淑芳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期96-103,共8页

为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设... 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 Tat系统底物蛋白L D-转肽酶ErfK 抗原性 免疫原性

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结核病诊断生物标志物研究进展

7

作者 姜治强 刘蒙达 +7 位作者 孙翔翔 亓菲 南文龙 邵卫星 常璐 孙淑芳 张皓博 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第10期53-62,共10页

结核病由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)引起,对全球人类和动物健康造成了较大威胁。MTBC成员基因组序列相似性较高,鉴别难度较大。而现有诊断生物标志物在结核病早期诊断、潜伏性结核分枝杆菌感染与活... 结核病由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)引起,对全球人类和动物健康造成了较大威胁。MTBC成员基因组序列相似性较高,鉴别难度较大。而现有诊断生物标志物在结核病早期诊断、潜伏性结核分枝杆菌感染与活动性结核病状态鉴别、治疗效果评估等方面还存在不足。随着分子生物学技术的发展和临床研究的不断深入,更多新的结核病诊断生物标志物不断被发掘。本文从结核病病原和宿主两个方面,系统归纳了DNA、RNA、脂阿拉伯糖甘露聚糖(LAM)、蛋白质、细胞因子、代谢产物等结核病诊断相关生物标志物的研究进展及应用现状,以期为结核病诊断生物标志物的应用及相关诊断技术和产品的研发提供依据和方向。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌复合群 结核病 诊断生物标志物

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荧光免疫层析技术原理及其在病原微生物检测中的研究进展 被引量：3

8

作者 苏华彬 刘蒙达 +7 位作者 南文龙 孙明军 焉鑫 毛迎雪 曲瑶 孙淑芳 李桂梅 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期67-71,共5页

荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,... 荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,特别适合在条件有限的实验室及野外开展动物疾病快速诊断。本文详细介绍了荧光免疫层析技术的原理及其在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用研究,以期为病原微生物现场快速诊断技术的开发提供参考。 展开更多

关键词 荧光免疫层析技术 荧光微球 病原微生物检测

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流产衣原体RAA快速检测方法的建立

9

作者 李嘉琪 王亚鹏 +5 位作者 张皓博 张研博 张培培 孙世雄 亓菲 孙翔翔 《中国动物检疫》 CAS 2024年第11期118-123,共6页

流产衣原体(Chlamydia abortus)是一种可造成羊、牛、猪等多种动物和人感染的原核微生物,广泛分布于世界各地,是危害畜牧业最严重的衣原体病原之一。为实现流产衣原体的快速准确鉴别,提高检测效率,提升应急响应速度,根据流产衣原体ompA... 流产衣原体(Chlamydia abortus)是一种可造成羊、牛、猪等多种动物和人感染的原核微生物,广泛分布于世界各地,是危害畜牧业最严重的衣原体病原之一。为实现流产衣原体的快速准确鉴别,提高检测效率,提升应急响应速度,根据流产衣原体ompA基因保守区域,设计特异性引物和探针,建立了流产衣原体重组酶介导等温核酸扩增检测技术(recombinase aided amplification,RAA)。该方法仅需在39℃条件下扩增20 min,即可完成检测;最低检测限可达1.13 copies/μL,且与常见细菌核酸无交叉反应;8次重复试验组内变异系数(CV)约为5%;临床样品检测结果显示,建立的RAA方法与荧光PCR符合率为100%。结果表明,本研究建立的RAA快速检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,操作简便,为流产衣原体的现场快速检测提供了新的技术手段,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 流产衣原体 重组酶介导等温扩增 快速检测

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病毒检测方法研究进展 被引量：5

10

作者 赵史宇辰 汤思淇 +1 位作者 冯亚莉 张莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4536-4544,共9页

随着病毒的不断变异和传播,病毒检测方法的研究也在不断发展和深化,在病毒性疾病暴发时,及时、准确地检测病毒变得尤为重要。传统的病毒检测方法包括病毒分离鉴定、PCR和ELISA等,但这些方法都存在操作繁琐、检测时间长、灵敏度低等问题... 随着病毒的不断变异和传播,病毒检测方法的研究也在不断发展和深化,在病毒性疾病暴发时,及时、准确地检测病毒变得尤为重要。传统的病毒检测方法包括病毒分离鉴定、PCR和ELISA等,但这些方法都存在操作繁琐、检测时间长、灵敏度低等问题。近年来,一些新兴技术和优化的方法被应用于各类病毒的检测,带来了更加准确和高效的病毒检测,如基于微滴式数字PCR的病毒检测,其灵敏度可高出实时荧光定量PCR约16倍;基于基因测序技术的病毒检测方法越来越受到关注,其不仅可以检出病毒种类、数量,还能直接准确地获取病毒基因序列,甚至能够发现新病毒。此外,基于CRISPR/Cas、生物传感器、流式细胞术等检测技术在病毒检测领域也受到了广泛应用。虽然这些新技术在特异性和灵敏度等方面存在显著优势,但仍然面对一些考验,如检测成本较高、需要实验室环境等,这些问题限制了病毒检测技术的普及和推广。因此,未来的研究重点将聚焦于提高检测的准确性、实用性并降低成本,研发出更加完善的病毒检测技术。作者将优化后及新兴的检测技术与传统检测技术相对比,并总结其优缺点,以期为病毒检测、病毒性疾病防控提供参考依据。 展开更多

关键词 核酸检测 免疫学检测 生物传感器 即时检测

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牛病毒性腹泻病毒1型RT-RAA快速诊断方法的建立 被引量：3

11

作者 范颖 田雪 +5 位作者 孙淑芳 吴发兴 尼博 刘建柱 孙翔翔 胡莉萍 《中国动物检疫》 CAS 2023年第4期93-98,共6页

为解决牛病毒性腹泻病毒(BVDV)现场快速诊断难点,提升应急响应速度,根据BVDV 1型基因组5’-UTR保守区序列设计特异性引物和探针,建立了BVDV 1型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-R... 为解决牛病毒性腹泻病毒(BVDV)现场快速诊断难点,提升应急响应速度,根据BVDV 1型基因组5’-UTR保守区序列设计特异性引物和探针,建立了BVDV 1型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示:该方法在39℃等温条件下检测时间为20 min,对BVDV 1型核酸检测下限为1.2×10^(2) copies/μL;3个浓度梯度的核酸组内重复性试验的变异系数(CV)分别为3.24%、9.48%和8.79%,均在10.00%以内,重复性好;建立的方法与猪瘟病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等无特异性反应。对66份临床样品进行检测,发现所建立的方法与荧光定量PCR检测结果符合率为98.48%,Kappa值为0.881(P<0.001)。结果表明,本研究建立的RT-RAA快速诊断方法特异性强、灵敏度高、操作便捷,可用于BVDV 1型的现场快速检测。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 重组酶介导的等温扩增 快速诊断

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多重数字PCR及其在疾病检测中的研究进展 被引量：2

12

作者 曲瑶 张皓博 +8 位作者 刘蒙达 孙淑芳 亓菲 孙翔翔 刘永夏 毛迎雪 李俊华 胡莉萍 樊晓旭 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期74-81,共8页

数字PCR(dPCR)是一种新兴的核酸检测技术,继承了PCR和荧光定量PCR(qPCR)的优点,并开创了新的发展方向。dPCR最独特之处在于,它可以在无需标准曲线的情况下,对核酸样本实现绝对定量分析。而多重数字PCR(mdPCR)更是dPCR的主要发展方向。... 数字PCR(dPCR)是一种新兴的核酸检测技术,继承了PCR和荧光定量PCR(qPCR)的优点,并开创了新的发展方向。dPCR最独特之处在于,它可以在无需标准曲线的情况下,对核酸样本实现绝对定量分析。而多重数字PCR(mdPCR)更是dPCR的主要发展方向。在众多研究领域中,特别是疾病检测方面,mdPCR已展现出卓越的优势和广阔的应用前景。本文介绍了dPCR和mdPCR的原理,探讨了mdPCR在细菌检测、病毒检测、癌症诊断等方面的研究现状,并深入分析了mdPCR的优势及不足,以期为未来mdPCR的应用提供重要的理论指导。 展开更多

关键词 多重数字PCR 疾病检测 优缺点 应用

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