干细胞与再生医学研究及其产业化前景 被引量：1

1

作者 裴雪涛 《生物产业技术》 2009年第3期14-16,共3页

再生医学是在生命科学、材料科学、计算机技术等众多学科交融渗透的基础上发展起来的，这一新兴技术领域涵盖了干细胞与克隆技术、体细胞重编程技术、组织工程技术、组织器官代用品、异种器官移植等多项现代生物技术，其研究与应用将给... 再生医学是在生命科学、材料科学、计算机技术等众多学科交融渗透的基础上发展起来的，这一新兴技术领域涵盖了干细胞与克隆技术、体细胞重编程技术、组织工程技术、组织器官代用品、异种器官移植等多项现代生物技术，其研究与应用将给因疾病、创伤、衰老或遗传因素所造成的组织器官缺损或功能障碍的修复及再生治疗带来希望。 展开更多

关键词 再生医学 干细胞 组织工程 生物产业

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胚胎干细胞向造血干/祖细胞定向诱导分化的研究进展 被引量：6

2

作者 杨超 习佳飞 +1 位作者 岳文 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期797-802,共6页

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是指由胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)细胞经体外抑制培养而筛选得到的细胞,具有无限增殖潜能,在体外可以向造血细胞分化,有可能为造血干细胞移植和血细胞输注开辟新的来源.此外,ES细胞向造... 胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)是指由胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)细胞经体外抑制培养而筛选得到的细胞,具有无限增殖潜能,在体外可以向造血细胞分化,有可能为造血干细胞移植和血细胞输注开辟新的来源.此外,ES细胞向造血干/祖细胞的定向诱导分化也为阐明哺乳动物造血发育的细胞和分子机制提供了良好的体外模型.对ES细胞向造血干/祖细胞定向分化的研究进展进行了综述. 展开更多

关键词 胚胎干细胞 造血干/祖细胞 诱导 体外分化

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间充质干细胞移植对放射性肠损伤修复作用的实验研究 被引量：4

3

作者 杨超 张晓梅 +3 位作者 宫媛 王昌正 韩颖 吴本俨 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第3期249-254,共6页

探讨了人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对NOD/SCID小鼠放射性肠损伤的修复作用.将雄性NOD/SCID小鼠随机分为3组,每组6只,即A组为空白对照组,B组为模型组,C组为治疗组.B组和C组小鼠全腹接受5 Gy60Coγ射线单次照射,剂... 探讨了人间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对NOD/SCID小鼠放射性肠损伤的修复作用.将雄性NOD/SCID小鼠随机分为3组,每组6只,即A组为空白对照组,B组为模型组,C组为治疗组.B组和C组小鼠全腹接受5 Gy60Coγ射线单次照射,剂量率为100 cGy/min.照射后B组小鼠经尾静脉注射生理盐水,C组小鼠移植MSCs.于移植后第15天取小鼠空肠标本,通过免疫荧光方法检测MSCs在受损肠道的定植和分化情况.结果表明,治疗组小鼠的生存状况明显好于模型组小鼠,病理切片显示小肠黏膜得到修复,免疫荧光结果显示MSCs可定植于辐射损伤的肠道,并表达波形蛋白(vimentin)和α-SMA.MSCs移植入肠损伤的小鼠体内后可在受损肠道定植,并向间质细胞分化,参与辐射损伤的修复. 展开更多

关键词 间充质干细胞 放射 肠损伤 修复

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小分子糖类负载后血小板超微结构和功能初步研究 被引量：2

4

作者 杨超 王捷熙 +5 位作者 韩颖 王艳 权国波 刘敏霞 高峰 刘安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期687-690,共4页

本研究探讨血小板在37℃条件下负载小分子糖类物质4小时后形态、结构和功能的变化。应用透射电子显微镜观察小分子糖类物质负载前后血小板超微结构的变化,用血细胞计数仪检测血小板数及血小板平均体积(MPV)的变化,用血小板聚集测试仪检... 本研究探讨血小板在37℃条件下负载小分子糖类物质4小时后形态、结构和功能的变化。应用透射电子显微镜观察小分子糖类物质负载前后血小板超微结构的变化,用血细胞计数仪检测血小板数及血小板平均体积(MPV)的变化,用血小板聚集测试仪检测血小板最大聚集率,采用流式细胞术检测血小板膜表面标志CD62p及磷脂酰丝氨酸(PS)。结果表明:小分子糖类物质负载后,血小板超微结构无明显变化;血小板最大聚集率可达新鲜血小板的60%以上;血小板计数和血小板平均体积(MPV)与新鲜血小板相比无显著差异(p>0.01);血小板膜表面标志CD62p的标记率及Annexin V的结合率与新鲜血小板相比均无明显差异。结论:小分子糖类物质负载后血小板仍然具有相对完整的超微结构和较好的聚集活性,功能基本正常。 展开更多

关键词 小分子糖类物质 血小板 超微结构 功能评价

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减蛋综合征病毒AA-2株适应体外培养的研究 被引量：2

5

作者 史秋梅 高桂生 +3 位作者 向华 宣华 章金刚 汤生玲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期106-109,共4页

在分离并系统鉴定了减蛋综合症病毒AA_2株的基础上 ,进行了该毒株的体外培养试验 ,以寻求适应于细胞培养物中继代的细胞适应毒。结果表明 ,AA_2毒株可在鸭胚成纤维细胞 (DEF)、鸭胚肾细胞 (DEK)、鸭胚肝细胞 (DEL)、鸡胚成纤维细胞 (CEF... 在分离并系统鉴定了减蛋综合症病毒AA_2株的基础上 ,进行了该毒株的体外培养试验 ,以寻求适应于细胞培养物中继代的细胞适应毒。结果表明 ,AA_2毒株可在鸭胚成纤维细胞 (DEF)、鸭胚肾细胞 (DEK)、鸭胚肝细胞 (DEL)、鸡胚成纤维细胞 (CEF)、鸡胚肾细胞 (CEK)和鸡胚肝细胞 (CEL)上增殖和继代 ,并随着继代次数的增加 ,CPE潜伏期缩短 ,持续期延长 ,半数细胞感染量 (TCID50 )呈逐代增加趋势 ,血凝效价 (HA)逐代稳步增强 ,至第 15代之后 ,这些变化趋于稳定。证明用鸭胚细胞培养的AA_2株CPE优于鸡胚的 ,在肝细胞培养物收获液中 ,其单位体积中的TCID50 和HA效价略高于肾细胞和成纤维细胞。末发现AA_2株病毒在PK_15 ,BHK_2 1,SP2 / 0等细胞中增殖的迹象。还较为系统的测定了第 19代DEF毒的其它特性。发现在接毒后 12 0小时 ,HA及TCID50 值最高 ,细胞适应毒对鸭胚致死率为 10 % ,比原毒降低 2 3% ,理化特性与原毒一致 。 展开更多

关键词 细胞培养 特性鉴定 减蛋综合征病毒 AA-2株 体外培养

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糖基化修饰后人血小板形态、超微结构及功能的研究 被引量：2

6

作者 郭永 韩颖 +2 位作者 权国波 刘敏霞 刘安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期411-415,共5页

经糖基化修饰可使4℃保存的血小板在输入体内后延长其存活。本研究探讨尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)糖基化修饰对血小板形态、结构、功能以及其膜糖蛋白的影响。实验分为室温对照组、冷藏对照组和修饰组。用荧光标记的特异凝集素(FITC-RCA... 经糖基化修饰可使4℃保存的血小板在输入体内后延长其存活。本研究探讨尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)糖基化修饰对血小板形态、结构、功能以及其膜糖蛋白的影响。实验分为室温对照组、冷藏对照组和修饰组。用荧光标记的特异凝集素(FITC-RCAⅠ)检测膜糖蛋白糖残基变化,用扫描、透射电镜观察修饰后血小板形态和超微结构的变化,用比浊法测定血小板聚集率,用流式细胞术检测血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志CD62P以及血小板凋亡标志annexin Ⅴ结合率。结果表明,UDP-Gal修饰组RCAⅠ结合率显著高于室温对照组和冷藏对照组(p<0.01);与新鲜血小板相比,UDP-Gal处理后的血小板超微结构无明显变化,而冷藏对照组则有伪足延伸等形态学改变;修饰后最大聚集率可达新鲜血小板的50%以上;血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志CD62P及annexin Ⅴ结合率与室温对照组相比均无明显差异。结论:UDP-Gal可使β-半乳糖有效地结合于链聚糖末端,糖基化血小板仍然具有较强的聚集活性和相对完整的超微结构,功能基本正常。 展开更多

关键词 血小板 糖基化修饰 超微结构 功能评价

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中国小型猪内源性反转录病毒研究进展与对策 被引量：3

7

作者 冯书堂 马玉媛 夏颖 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1244-1248,共5页

作者介绍了国内外猪内源性反转录病毒(PERV)研究进展,简述了中国不同品种小型猪PERV存在情况、PERV前病毒全基因克隆与序列分析、细胞水平鉴定方法、感染HEK293细胞研究平台的创建、猪A3F对PERV的抑制作用研究,以及从分子遗传学上揭示... 作者介绍了国内外猪内源性反转录病毒(PERV)研究进展,简述了中国不同品种小型猪PERV存在情况、PERV前病毒全基因克隆与序列分析、细胞水平鉴定方法、感染HEK293细胞研究平台的创建、猪A3F对PERV的抑制作用研究,以及从分子遗传学上揭示不同品系PERV特异性等创新性研究成果,分析了五指山小型猪近交系具有PERV基因拷贝少且没有PERV-C等特异性,以及展望培育中国PERV阴性猪新品系方法等研究,以期为人类异种器官移植和生物医用材料产品安全性研发,解决小型猪PERV疾病传播危险性提供科学对策和新的方向。 展开更多

关键词 中国小型猪 猪内源性反转录病毒 感染性克隆 异种移植

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抗CD22抗体治疗非霍奇金淋巴瘤的研究进展 被引量：2

8

作者 路萍萍 孟志云 +2 位作者 周明霞 王敏伟 窦桂芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1258-1261,共4页

CD22抗原既是跨膜糖蛋白也是免疫球蛋白超家族的一员,限制性表达于成熟B细胞和大多数B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的表面,与B细胞的发展、分化和功能有着密切的关系。抗CD22抗原单克隆抗体被开发为NHL诊断和免疫治疗药物,其特点为减弱免疫... CD22抗原既是跨膜糖蛋白也是免疫球蛋白超家族的一员,限制性表达于成熟B细胞和大多数B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的表面,与B细胞的发展、分化和功能有着密切的关系。抗CD22抗原单克隆抗体被开发为NHL诊断和免疫治疗药物,其特点为减弱免疫源性和加强效应因子的相互作用。不同形式的抗CD22抗体作为单药或联合用药治疗NHL的Ⅰ/Ⅱ期临床试验显示,不同形式的抗CD22抗体对放疗化疗无效或复发的NHL病人临床效果良好,药代动力学呈剂量依赖线性关系,半衰期长,高效低毒,人体耐受良好,而且抗CD22抗体联合其他抗体治疗也取得令人鼓舞的结果。本文就CD22抗原的生理功能和作为NHL导向治疗靶分子的特点、抗CD22抗体在治疗中的类型及其与其他抗体的联合应用作了综述。 展开更多

关键词 抗CD22抗体 EPRATUZUMAB 美罗华 非霍奇金淋巴瘤

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人胚胎干细胞向内皮祖细胞诱导分化及其应用研究进展 被引量：1

9

作者 吴琼 习佳飞 +1 位作者 李亚里 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第2期138-144,共7页

近年来,内皮细胞的应用价值不断提高,应用领域不断拓宽,但其来源有限,成为研究应用的主要障碍.胚胎干细胞在体外可分化为多种组织细胞系,有可能成为获取内皮细胞的另一来源.就人胚胎干细胞向内皮祖细胞分化、分离方法、相关分子机制及... 近年来,内皮细胞的应用价值不断提高,应用领域不断拓宽,但其来源有限,成为研究应用的主要障碍.胚胎干细胞在体外可分化为多种组织细胞系,有可能成为获取内皮细胞的另一来源.就人胚胎干细胞向内皮祖细胞分化、分离方法、相关分子机制及内皮祖细胞应用价值等进行阐述,以期能够引起更多的关注,推动其研究的进展. 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 内皮祖细胞 分化 应用

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血小板添加剂研究进展 被引量：2

10

作者 扈文博 韩颖 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期721-724,共4页

使用血小板添加剂(PAS)部分或者全部替代血浆常温保存血小板具有许多优点,例如可以避免输注大量血浆引起的发热、过敏反应以及循环超负荷;另外可以改善保存环境使血小板活性与止血功能维持在较高水平,节省大量血浆用于其他目的,便于血... 使用血小板添加剂(PAS)部分或者全部替代血浆常温保存血小板具有许多优点,例如可以避免输注大量血浆引起的发热、过敏反应以及循环超负荷;另外可以改善保存环境使血小板活性与止血功能维持在较高水平,节省大量血浆用于其他目的,便于血小板制品病原体灭活等。近20余年来,对于血小板添加剂的研究一直是一个热点,不同配方的血小板添加剂不断有报道,对血小板的保护效果也越来越好。本文就对血小板添加剂的组成成分、各成分的作用、体内外保存效果等研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 血小板 血小板添加剂 血小板常温保存

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单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究

11

作者 周军年 王韫芳 +11 位作者 要晖宇 贺文艳 陈海旭 李思霆 史岩 施双双 南雪 白慈贤 刘兵 岳文 毛宁 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期830-839,共10页

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用... 为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示,诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构,并不同程度地表达白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白(CK8,CK18)等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明:胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45+细胞,CD45-细胞不具有形成造血细胞克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血细胞向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点. 展开更多

关键词 胎肝 高增殖潜能集落形成细胞 肝上皮细胞 造血 发育

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糖基化修饰血小板冷藏稳定性研究

12

作者 郭永 韩颖 +3 位作者 扈文博 权国波 刘敏霞 刘安 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期681-686,共6页

本研究旨在观察尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)糖基化修饰人血小板的稳定性、理化指标及体外功能变化。实验分为室温对照组、冷藏对照组以及修饰组(U+4组和4+U组)。机采人浓缩血小板悬液,4℃保存前或后添加适量UDP-Gal,进行糖基化修饰,分别... 本研究旨在观察尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)糖基化修饰人血小板的稳定性、理化指标及体外功能变化。实验分为室温对照组、冷藏对照组以及修饰组(U+4组和4+U组)。机采人浓缩血小板悬液,4℃保存前或后添加适量UDP-Gal,进行糖基化修饰,分别于0、1、3、5、7、14天,通过荧光标记识别血小板膜糖蛋白末端半乳糖残基的凝集素(FITC-RCAⅠ)检测糖基化修饰效果;pH计检测血小板悬液pH值;血细胞计数仪检测血小板平均体积;比浊法测定血小板聚集率;流式细胞术检测血小板活化标志CD62P、血小板膜蛋白CD42b及PS的表达。结果表明:保存14天时,修饰组血小板RCAⅠ结合率是室温组的5-6倍;修饰组血小板悬液pH低于室温组,但二者之间无显著性差异(p>0.05);保存14天时室温组和修饰组血小板平均体积分别为10.6±1.9fL和11.14±1.1fL,二者之间无显著性差异(p>0.05);各组体外聚集活性在保存过程中均逐渐下降,但修饰组优于室温组(p<0.05);流式检测结果显示,保存1-5天修饰组CD62P、CD42b和PS表达的阳性率与新鲜血小板无显著性差异(p>0·05),但保存14天时,CD62P和PS表达的阳性率升高,CD42b表达的阳性率降低,与新鲜血小板相比差异极显著(p<0.01)。结论:在修饰血小板保存过程中,糖基化修饰的效果稳定,修饰血小板的pH和平均体积均处于正常值范围之内,聚集活性良好,优于室温保存组,但在保存5天后表现出不同程度的活化。 展开更多

关键词 血小板 糖基化修饰血小板 修饰稳定性

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应用反转录骤合酶链反应研究庚型肝炎病毒感染

13

作者 王全立 杜芝燕 +2 位作者 孟庆华 刘阳 迟宝荣 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 1999年第1期27-29,共3页

建立反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测庚型肝炎病毒感染的方法。该法特异性强，检测下限（１．９×１０３）与感染剂量相当，简便实用。对我国各类人群的ＨＧＶ感染情况进行研究，结果表明，慢性丙型肝炎患者、抗－ＨＣＶ阳... 建立反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测庚型肝炎病毒感染的方法。该法特异性强，检测下限（１．９×１０３）与感染剂量相当，简便实用。对我国各类人群的ＨＧＶ感染情况进行研究，结果表明，慢性丙型肝炎患者、抗－ＨＣＶ阳性职业献血员和已知肝炎病毒标志物均阴性者感染率较高，分别为６０％、４０％和２１．７％。对其中一株（Ｐ１１）阳性扩增产物所做部分核酸序列分析，与国外两株相应区段的同源性高达９６．４％和９５．３％。 展开更多

关键词 庚型肝炎 病毒感染 反转录 聚合酶链反应

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细胞角蛋白19启动子调控的双报告载体的构建及其在肝干/祖细胞分化研究中的应用 被引量：3

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作者 张衡 贾雅丽 +6 位作者 岳文 陈琳 谢小燕 南雪 何丽娟 裴海云 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第7期728-736,共9页

肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白... 肝干/祖细胞是肝细胞和胆管上皮细胞(biliary epithelial cells,BECs)共同的前体细胞,为了对这一前体细胞的分化情况进行研究,利用报告基因来监测肝干/祖细胞的分化走向.首先,通过PCR方法从肝癌细胞系HepG2的全基因组中克隆了细胞角蛋白19(CK19)启动子片段,构建了CK19启动子调控的海肾荧光素酶和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)双报告载体(pSicoR-CK19-hrl-mrfp).其次,将上述慢病毒载体转染肝干/祖细胞后,通过流式细胞分选获得稳定转染的细胞株.再次,将上述细胞株与表达"上皮形态发生素"(Epimorphin,EPM)的PT67细胞共培养后,整合有pSicoR-CK19-hrl-mrfp表达载体的肝干/祖细胞不仅形态发生了变化,而且排列为二维环状结构,另外还检测到由CK19启动子启动表达的海肾荧光素酶和RFP,细胞形态和基因表型都证明肝干/祖细胞经诱导已经分化成为BECs.与此形成对照的是肝干/祖细胞与不表达EPM的PT67细胞共培养后,没有观测到上述的变化.所以,CK19启动子调控的双报告载体不仅可以实时地显示肝原始细胞在不同的诱导环境下的分化走向,而且还可以定量地检测CK19启动子活性的变化情况.总之,这一载体的成功构建将为研究肝干/祖细胞的分化提供了便捷的工具,同时也有助于筛选可诱导肝干/祖细胞定向分化的分子. 展开更多

关键词 细胞角蛋白 海肾荧光素酶 红色荧光蛋白 肝干/祖细胞 分化

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不止是沉默——神经元限制性沉默因子及其作用元件的研究进展 被引量：2

15

作者 刘庆斌 李艳华 裴雪涛 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期239-241,共3页

神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称repressor element silencing transcription factor,REST)是一种锌指(zincfinger)蛋白,它能与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer ... 神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称repressor element silencing transcription factor,REST)是一种锌指(zincfinger)蛋白,它能与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer element,NRSE;又称repressor element-1,RE-1)相结合,使序列中的组蛋白发生去乙酰化,从而对某些神经性基因的表达发挥阻遏作用。随着研究的深入,人们发现NRSF-NRSE在神经发育过程中有着复杂的调控功能,这主要是由于NRSF/NRST蛋白及REST辅助蛋白(CoREST)介导的甲基化作用,NRSF蛋白转录后形成的一系列剪切体也可能参与其中。另外,NRSF及其不同的剪切体还与一些神经系统疾病和肿瘤的发生密切相关。深入研究NRSF的调控机制对于进一步了解一些神经系统疾病的发生有着重要意义。 展开更多

关键词 神经元限制性沉默因子 神经元限制性沉默元件 去乙酰化 甲基化 神经特异性基因

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CTLA4基因修饰骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导分化及其免疫抑制功能研究 被引量：1

16

作者 罗海英 王韫芳 +8 位作者 翟树森 张玉君 南雪 白慈贤 施双双 尉承泽 岳文 孔维 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1021-1030,共10页

用携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs),体外向肝细胞诱导分化,并检测其免疫抑制功能.用含有HGF等细胞因子培养液诱导重组腺病毒Ad-CTLA4Ig感染大鼠BMMSCs向肝细胞分化.... 用携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs),体外向肝细胞诱导分化,并检测其免疫抑制功能.用含有HGF等细胞因子培养液诱导重组腺病毒Ad-CTLA4Ig感染大鼠BMMSCs向肝细胞分化.诱导后的细胞可表达AFP、Alb和CK18等肝细胞标志,同时还具有储存糖原和摄取、排泌靛青绿等肝细胞功能.转基因BMMSCs在未经诱导和诱导后均可表达CTLA4Ig,诱导14天时表达量有所减弱.单向混合淋巴细胞反应证实,诱导7天的转基因BMMSCs具有明显的抑制淋巴细胞反应的作用,其抑制作用明显高于未转基因BMMSCs,且CTLA4Ig基因修饰BMMSCs输注还可以明显延长肝移植大鼠的存活时间.用重组腺病毒Ad-CTLA4Ig对BMMSCs进行基因修饰,一方面不会影响BMMSCs的肝细胞分化潜能,另一方面使BMMSCs的免疫抑制特性得到进一步强化. 展开更多

关键词 间充质干细胞 CTLA4IG 腺病毒 分化 免疫抑制

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随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立 被引量：18

17

作者 詹林盛 邵宁生 +2 位作者 彭剑淳 孙红琰 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期151-155,共5页

指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁... 指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % . 展开更多

关键词 随机单链DNA文库 SELEX技术 筛选 寡核苷酸适配子 丙型肝炎病毒核心蛋白

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应用A蛋白亲和层析法纯化单克隆抗体 被引量：18

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作者 周华蕾 吕茂民 +2 位作者 王娜 刘子 章金刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期72-74,共3页

应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电... 应用Protein A亲和层析法,从采集的小鼠腹水中纯化出了抗凝血因子Ⅶ单克隆抗体,用SDS-PAGE和ELISA法分别检测了纯化后单克隆抗体的纯度及效价,结果显示,电泳为两条带,分别为免疫球蛋白G(IgG)的重链和轻链,纯化后的单克隆抗体纯度达到电泳纯,应用间接ELISA法测定腹水效价为1×10-7左右,与未纯化前无差异。结果表明,应用A蛋白亲和层析法能够得到纯度较高的单克隆抗体,适用于高纯度单克隆抗体的制备。 展开更多

关键词 A蛋白 纯化 单克隆抗体 单克隆抗体 亲和层析法 A蛋白 纯化 应用 间接ELISA法 SDS-PAGE 凝血因子Ⅶ 免疫球蛋白

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丙型肝炎病毒NS3螺旋酶寡核苷酸适配子的筛选与鉴定 被引量：12

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作者 詹林盛 卓海龙 +2 位作者 王会中 彭剑淳 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期245-250,共6页

为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定... 为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定和Clustal W软件包分析适配子一级结构. 经过8轮循环筛选,随机ssDNA库与HCV NS3h的结合率从0.45%上升到29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分5个家族,其中4个家族具有共同的保守序列. 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子H2与HCV NS3h特异结合的亲和力最高,Kd值为140 nmol/L. 适配子H2 (10 μmol/L)在体外对HCV NS3h的活性具有一定的抑制作用,抑制率达44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗HCV NS3h的寡核苷酸适配子. 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 NS3螺旋酶 SELEX 寡核苷酸适配子

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G418抗性HEK293细胞的培育 被引量：6

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作者 吕茂民 贾莉玮 +3 位作者 王建国 杨姝 熊景峰 章金刚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第1期5-6,共2页

目的　培育具有G418抗性的HEK2 93细胞 ,用于建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有neo基因的质粒pIRESneo导入HEK2 93细胞中 ,利用G418的选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行... 目的　培育具有G418抗性的HEK2 93细胞 ,用于建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有neo基因的质粒pIRESneo导入HEK2 93细胞中 ,利用G418的选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行了PCR鉴定。结果　经 6 0 0 μg ml的G418压力筛选后 ,获得了抗性细胞克隆。抗性细胞的形态和生长速度与筛选前细胞没有差异 ,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA ,可以扩增出对应的核苷酸片段。结论　成功地培育了G418抗性HEK2 93细胞 ,为建立猪内源性反转录病毒感染人HEK2 93细胞的模型奠定了基础。 展开更多

关键词 G418抗性 HEK293细胞 培育 猪内源性反转录病毒 细胞模型 抗性细胞

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