2015年中国动物遗传学研究领域若干重要进展 被引量：7

1

作者 张博 陈晓芳 +1 位作者 黄勋 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期467-507,共41页

2015年中国科学家在动物遗传学领域的研究成果斐然。据不完全统计,2015年围绕线虫(Caenorhabditis elegans)、果蝇(Drosophila melanogaster)、斑马鱼(Danio rerio)、爪蛙(Xenopus)和小鼠(Mus musculus)等5个模式动物发表的论文中涉及... 2015年中国科学家在动物遗传学领域的研究成果斐然。据不完全统计,2015年围绕线虫(Caenorhabditis elegans)、果蝇(Drosophila melanogaster)、斑马鱼(Danio rerio)、爪蛙(Xenopus)和小鼠(Mus musculus)等5个模式动物发表的论文中涉及中国的论文数约占总论文数的1/5,众多具有原创性的研究成果在国际高影响力的期刊上发表。例如:首次鉴定出潜在的磁受体Mag R,为磁感应遗传与分子机制的研究带来了重大突破;揭示了褐飞虱(Nilaparvata lugens)翅多型性的遗传基础;首次证明在果蝇基因组中存在腺嘌呤的N6-甲基化;揭示了哺乳动物树突棘修剪与成熟的新的分子机制;发现CRTC2介导的信号通路调控肝脏脂代谢;发现神经递质多巴胺能够调节炎症反应;发现Gasdermin蛋白家族具有诱导细胞焦亡的功能;发现小清蛋白阳性的兴奋性视觉通路能够触发小鼠的恐惧反应等。2015年中国科学家在TALEN和CRISPR/Cas基因组靶向编辑技术领域同样做出了重要贡献。据不完全统计,其中涉及中国的论文占比多于1/5,覆盖了从线虫到灵长类的多种动物、多种基因组修饰方法,并且在世界上首次成功编辑了人类早期胚胎。中国在基因组序列测定与分析研究领域一如既往地保持世界领先,2015年中国科学家在动物基因组方面绘制了家鹅(Anser cygnoides)、壁虎(Gekko japonicus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和大黄鱼(Larimichthys crocea)的基因组序列图谱,完成了69头中国地方猪(Sus scrofa)的基因组重测序,分别分析了这些动物所独有的生理病理特征以及环境适应能力的遗传基础。本文首次尝试对以中国本土科研团队为主的动物遗传学领域若干重要科研进展进行年度回顾,并选取若干重点论文进行简要介绍,以彰显中国科学家在动物遗传学领域的科研实力和重要贡献。 展开更多

关键词 中国 动物遗传学 研究进展 2015年

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基因打靶技术在现代生物学研究中的应用

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作者 杨晓 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第10期30-33,29,共5页

尽管基因打靶技术的先驱者2007年才获得诺贝尔生物学或医学奖,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用却已经有25年的时间.基因打靶技术的发明和应用革命性地改变了现代生物医学研究的面貌,催生了许多生物医学和药物研发领域的前沿研究,... 尽管基因打靶技术的先驱者2007年才获得诺贝尔生物学或医学奖,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用却已经有25年的时间.基因打靶技术的发明和应用革命性地改变了现代生物医学研究的面貌,催生了许多生物医学和药物研发领域的前沿研究,并直接导致了生物医学研究领域中的许多突破性进展.基因打靶技术的发明使得科学家第一次能对关于特定基因生理功能的假设进行实验验证,并通过基因打靶研究真正建立基因和疾病间的因果关系.近年来,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用日益深入和广泛. 展开更多

关键词 基因打靶技术 现代生物学 应用 医学研究 药物研发 生物医学 生理功能 因果关系

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表皮干细胞研究进展 被引量：10

3

作者 王丽娟 王友亮 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期198-204,共7页

哺乳动物表皮中包含有多种不同类型的表皮干细胞,它们共同维持了表皮组织结构的稳态并在皮肤创伤的修复中起重要作用。表皮干细胞具备干细胞两大基本特征:自我更新和分化,两者间平衡的破坏通常是皮肤肿瘤和其他皮肤疾病的根源。文章着... 哺乳动物表皮中包含有多种不同类型的表皮干细胞,它们共同维持了表皮组织结构的稳态并在皮肤创伤的修复中起重要作用。表皮干细胞具备干细胞两大基本特征:自我更新和分化,两者间平衡的破坏通常是皮肤肿瘤和其他皮肤疾病的根源。文章着重叙述了表皮干细胞存在的证据、两大基本特征、分裂模式、调节表皮干细胞的信号通路以及维持其稳态的微观和宏观环境。 展开更多

关键词 表皮干细胞 自我更新 分化 分裂模式 信号通路 微观环境与宏观环境

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利用基因诱捕技术进行小鼠基因剔除的初步研究 被引量：5

4

作者 谭晓红 程萱 +2 位作者 毛春明 陈光慧 杨晓 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期606-610,共5页

对利用基因诱捕技术进行小鼠基因剔除做了初步的探索 ,为进一步应用该技术进行小鼠基因功能研究奠定了基础 .利用基因诱捕载体转染小鼠ES细胞 ,获得了 36株neo基因单拷贝整合的诱捕ES细胞 ,其中 14株细胞表达有活性的 β半乳糖苷酶 .将 ... 对利用基因诱捕技术进行小鼠基因剔除做了初步的探索 ,为进一步应用该技术进行小鼠基因功能研究奠定了基础 .利用基因诱捕载体转染小鼠ES细胞 ,获得了 36株neo基因单拷贝整合的诱捕ES细胞 ,其中 14株细胞表达有活性的 β半乳糖苷酶 .将 3株诱捕ES细胞分别经显微注射引入到受体囊胚中 ,再植入假孕母鼠的子宫中使其发育成小鼠 .两株细胞得到了程度不同的嵌合体小鼠 ,其中一株诱捕ES细胞整合至生殖系 .利用质粒拯救实验获得了诱捕载体整合位点附近的基因组序列 ,通过序列比对发现被诱捕的基因可能是一个新基因 .X gal染色结果显示 ,该基因的表达局限于小鼠腹部及肢芽的部位 . 展开更多

关键词 基因诱捕 小鼠 基因剔除

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Smad4条件基因敲除小鼠听功能初步研究 被引量：7

5

作者 侯昭晖 杨仕明 +7 位作者 郭维 胡吟燕 孙建和 于宁 张继帅 杨晓 韩东一 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期176-180,共5页

目的对Smad4条件基因敲除后三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合子-/-进行听功能检查,初步确定Smad4条件基因敲除后小鼠的听力学表型特征。方法对Smad4条件基因敲除后同窝出生的三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合... 目的对Smad4条件基因敲除后三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合子-/-进行听功能检查,初步确定Smad4条件基因敲除后小鼠的听力学表型特征。方法对Smad4条件基因敲除后同窝出生的三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合子-/-分别进行听性脑干反应(ABR)和听神经复合动作电位(CAP)的检查,判断Smad4条件基因敲除后三种基因型小鼠是否有听力的改变;如果听力有所改变,再将两种方法相结合以综合判断听力改变可能的病理部位。结果各个月龄的Smad4条件基因敲除后的纯合子小鼠各频率的ABR阈值均在100dBSPL以上,有的甚至在最大给声刺激都无法引出可识别的波形。野生型和杂合子小鼠都可以诱发出可辨别、可重复的ABR波形。听神经动作电位的结果与脑干诱发电位结果相似,纯合型小鼠各个频率均未引出动作电位波形,另外两种基因型小鼠可以引出稳定的CAP波形。结论Smad4条件基因敲除后小鼠由于基因的缺陷而出现了重度感音神经性耳聋,纯合子小鼠出现全聋。 展开更多

关键词 SMAD4 条件基因敲除 听性脑干反应 听神经复合动作电位 听力

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基因打靶技术:开启遗传学新纪元 被引量：21

6

作者 滕艳 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1291-1298,共8页

基因打靶技术作为最有效的定向修饰小鼠基因的技术手段在揭示基因的生理功能、研究人类疾病的遗传机制以及寻找新的药物靶标的过程中发挥着重要的作用。近年来,随着条件基因打靶技术的发展使基因失活可以限制在特定时段特定组织或细胞... 基因打靶技术作为最有效的定向修饰小鼠基因的技术手段在揭示基因的生理功能、研究人类疾病的遗传机制以及寻找新的药物靶标的过程中发挥着重要的作用。近年来,随着条件基因打靶技术的发展使基因失活可以限制在特定时段特定组织或细胞内。文章将主要介绍基因打靶技术的发展简史、近期进展以及在其他模式动物中的应用。 展开更多

关键词 基因打靶 小鼠 条件基因打靶 基因敲除

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聋病基因研究新策略——基因敲除鼠听功能和内耳形态的系统研究 被引量：4

7

作者 杨仕明 杨伟炎 +2 位作者 韩东一 翟所强 杨晓 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期161-163,共3页

虽然对听功能进行的研究已有进展,但目前对感音神经性聋的诊治仍是一大难题。聋病基因的发现使得我们可以从不同的层面揭示听觉功能的分子奥秘。但是,从功能基因组学角度看,仅仅发现和克隆聋病基因还远不是我们想达到的目标,需要进一步... 虽然对听功能进行的研究已有进展,但目前对感音神经性聋的诊治仍是一大难题。聋病基因的发现使得我们可以从不同的层面揭示听觉功能的分子奥秘。但是,从功能基因组学角度看,仅仅发现和克隆聋病基因还远不是我们想达到的目标,需要进一步深入研究基因的功能。基因敲除是近年来发展和成熟起来的一项生物学新技术。通过在小鼠胚胎干细胞基因组水平的同源重组,造成目的基因的缺失突变,可以了解基因失活后对发育、生长、衰老以及器官、组织或细胞结构功能的影响,从而既可确切地从整体水平研究基因功能,又可建立疾病的动物模型。通过对内耳形态和听功能的系统研究,体现了功能基因组学的研究方向,并且可以建立基因缺陷致聋的动物模型。我们对SMAD4、SMAD5基因剔除小鼠进行了大量的听功能和内耳形态研究,发现基因缺陷导致小鼠严重听力障碍,并且内耳听觉器官包括毛细胞、支持细胞和螺旋神经节等出现不同程度的损害。可以认为,我们已经建立了一个基因缺陷导致聋病的动物模型。作为听功能基因研究新的平台,它将对听觉基因功能和聋病的分子机制研究有重要的意义,以此作为聋病基因研究的新策略,从而为最终的聋病基因治疗提供理论上的实验依据。 展开更多

关键词 耳聋 SMAD 基因敲除

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Smad4基因缺陷小鼠耳形态学改变的初步研究 被引量：3

8

作者 胡吟燕 杨仕明 +5 位作者 卢云 孙建和 孙彦询 杨晓 韩东一 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期172-175,共4页

目的研究Smad4基因缺陷小鼠中耳及内耳的病理形态学改变,探讨Smad4基因对中耳及内耳发育的影响。方法利用建立的Smad4基因敲除嵌合体小鼠模型,通过火棉胶包埋HE染色观察Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠的情况;通过耳蜗基底膜铺片琥珀酸脱氢... 目的研究Smad4基因缺陷小鼠中耳及内耳的病理形态学改变,探讨Smad4基因对中耳及内耳发育的影响。方法利用建立的Smad4基因敲除嵌合体小鼠模型,通过火棉胶包埋HE染色观察Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠的情况;通过耳蜗基底膜铺片琥珀酸脱氢酶染色观察Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠的耳蜗内、外毛细胞数量;应用扫描电镜观察Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠的内耳超微结构。结果火棉胶包埋HE染色显示:Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠耳蜗大小、耳蜗转数均未见异常,中耳鼓膜正常,听小骨锤骨、砧骨、镫骨及关节结构正常,骨细胞排列紧密,Smad4(+/+)与Smad4(+/-)之间没有差异。Smad4(+/+)小鼠耳蜗Corti器结构完整,未见异常,血管纹厚薄均匀,血管腔腔径大小均匀。内、外毛细胞及内外柱细胞、支持细胞无异常,螺旋神经节细胞未见缺失;Smad4(+/-)小鼠耳蜗钩端至一回外毛细胞轮廓不清,呈均质化,细胞核消失,Deiter细胞核下沉或消失,相应的螺旋神经节细胞大量缺失。耳蜗基底膜铺片琥珀酸脱氢酶染色显示:Smad4(+/-)和Smad4(+/+)小鼠均有明显的局限于Corti’s器底回的外毛细胞缺失,其中Smad4(+/-)小鼠外毛细胞的缺失,比Smad4(+/+)小鼠更明显(P<0.01),两个基因型小鼠的内毛细胞均未见缺失。扫描电镜显示:Smad4(+/+)小鼠未见明显病理变化,Smad4(+/-)小鼠耳蜗钩端外毛细胞静纤毛广泛散在性缺失,外毛细胞的表皮板穿孔、自溶,其周边与指状突小皮板断离。两个基因型小鼠耳蜗内毛细胞纤毛均未见明显改变。结论Smad4基因敲除后内耳形态发生明显改变,表明Smad4基因缺陷导致小鼠内耳细胞损害。 展开更多

关键词 SMAD4 基因敲除 耳 形态

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Smad4条件基因敲除小鼠前庭终器形态学研究 被引量：3

9

作者 邓安春 杨仕明 +6 位作者 孙建和 胡吟燕 候昭晖 张继帅 杨晓 黄德亮 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期181-185,共5页

目的研究Smad4条件基因敲除小鼠前庭终器形态改变,探讨Smad4基因对于前庭发育的作用。方法利用建立的Smad4条件基因敲除小鼠模型,通过光镜观察Smad4(+/+)、Smad4(+/-)与Smad4(-/-)三种基因型小鼠(0.5、1.5月龄)的球囊及囊斑、椭圆囊及... 目的研究Smad4条件基因敲除小鼠前庭终器形态改变,探讨Smad4基因对于前庭发育的作用。方法利用建立的Smad4条件基因敲除小鼠模型,通过光镜观察Smad4(+/+)、Smad4(+/-)与Smad4(-/-)三种基因型小鼠(0.5、1.5月龄)的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管及壶腹嵴、前庭神经节、内淋巴管与囊的形态结构、毛细胞的形态及排列缺失情况。通过扫描电镜观察球囊斑、椭圆囊斑和壶腹嵴的形态结构、毛细胞及纤毛的排列缺失情况。结果Smad4(-/-)小鼠个体及内耳明显小于Smad4(+/+)和Smad4(+/-),而后面二者区别不大。所有小鼠的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管、前庭神经节、内淋巴管与囊的大小和结构正常,淋巴囊腔饱满,囊斑处的感觉上皮、耳石、毛细胞及纤毛排列整齐,没有发现明显的病变,三个基因型间没有差异。Smad4(-/-)小鼠壶腹嵴囊性变多且严重、后半规管壶腹嵴出现明显的副嵴、偶尔可见壶腹嵴感觉上皮空泡样变。壶腹嵴的毛细胞和支持细胞排列整齐,形态无明显改变,未见缺失。扫描电镜示球囊斑、椭圆囊斑、后、外、上半规管壶腹嵴正常,三个基因型之间没有差异。结论Smad4(-/-)小鼠的前庭终器有轻微病理改变,Smad4(+/+)与Smad4(+/-)小鼠的前庭终器形态结构基本正常,表明Smad4对于前庭终器的发育影响可能不明显。 展开更多

关键词 SMAD4 条件基因敲除 前庭 形态学

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条件基因打靶研究存在的主要问题及对策 被引量：4

10

作者 林福玉 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期469-484,共16页

基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以... 基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以及条件基因打靶技术本身存在的问题,如遗传背景、育种策略、实验对照、基因代偿等方面的影响往往被忽略,严重影响基因功能和小鼠表型解析的准确性。针对这些问题,精细调控实现Cre重组酶的理想时空特异性表达、详尽地分析Cre重组酶的重组效率、降低Cre重组酶的毒性、遗传背景单一化、优化育种策略、设立严格实验对照、多基因联合条件基因打靶等诸多解决方案应予以采纳。 展开更多

关键词 条件基因打靶 CRE-LOXP 位点特异性重组 遗传背景

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TGF-β超家族在软骨发生、发育和维持中的作用 被引量：17

11

作者 杨冠 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期953-959,共7页

转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)超家族包括TGF-β和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)两个亚家族。TGF-β超家族信号通路的配体、配体拮抗分子、受体、信号转导分子均在软骨内成骨过程中发挥各自... 转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)超家族包括TGF-β和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)两个亚家族。TGF-β超家族信号通路的配体、配体拮抗分子、受体、信号转导分子均在软骨内成骨过程中发挥各自独特的作用,参与调控软骨细胞的谱系分化、增殖、成熟、凋亡和矿化。BMP信号能起始间充质细胞向软骨细胞分化并维持软骨细胞的特性,在软骨发生过程中起主导作用;在生长板发育的过程中,BMP信号促进软骨细胞的成熟,促进成骨,而TGF-β信号抑制软骨细胞的肥大分化,维持生长板中适量的软骨细胞;TGF-β信号和BMP信号对于关节软骨的维持和修复都是不可或缺的。因此,TGF-β超家族的重要作用贯穿骨骼发育过程的始终。 展开更多

关键词 转化生长因子Β 骨形态发生蛋白 软骨 软骨内成骨 骨骼发育

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心肌细胞过表达miR-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤 被引量：13

12

作者 侯宁 王剑 +3 位作者 李振华 曹阳 范开吉 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期326-334,共9页

以往的miRNA芯片研究结果显示,miR-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究miR-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性-肌球蛋白重链... 以往的miRNA芯片研究结果显示,miR-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究miR-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性-肌球蛋白重链(-MHC)启动子(5.5 kb)控制下过表达miR-27b的转基因小鼠。通过Real-time PCR检测,发现miR-27b前体和成熟体表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高。miR-27b转基因小鼠不仅出现心肌肥厚,还表现出明显的心肌纤维化。进一步研究表明心肌纤维化的关键调节分子金属基质蛋白酶13(MMP13)是miR-27b的靶分子,在miR-27b转基因小鼠中MMP13显著下调,胶原分子I和III则显著上调。此外,还发现miR-27b转基因小鼠会出现心脏超微结构的损伤。以上研究结果表明,miR-27b可能通过抑制MMP13促进心肌纤维化。 展开更多

关键词 miR-27b 心肌细胞 转基因小鼠 心肌纤维化 MMP13

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Smad5基因敲除小鼠听生理和耳蜗形态实验观察 被引量：7

13

作者 杨仕明 刘清明 +4 位作者 郭维 胡吟燕 卢云 杨伟炎 杨晓 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期579-581,共3页

目的观察Smad5基因敲除小鼠(Smad5+/-)听生理和耳蜗形态改变,探讨Smad5基因是否为一种新的听功能相关基因。方法双盲对照法对Smad5(+/-)和Smad5(+/+)小鼠进行听性脑干诱发电位(ABRs)的听阈检测和耳蜗毛细胞形态观察及毛细胞计数。结果AB... 目的观察Smad5基因敲除小鼠(Smad5+/-)听生理和耳蜗形态改变,探讨Smad5基因是否为一种新的听功能相关基因。方法双盲对照法对Smad5(+/-)和Smad5(+/+)小鼠进行听性脑干诱发电位(ABRs)的听阈检测和耳蜗毛细胞形态观察及毛细胞计数。结果ABR听阈Smad5(+/-)小鼠24周时为90.63±17.65dB(SPL),Smad5(+/+)小鼠为63±19.94dB(SPL),二者差异显著(P<0.01)。耳蜗基底膜铺片显示Smad5(+/-)小鼠内、外毛细胞缺失,其中在底回处尤其突出,Smad5(+/+)小鼠内、外毛细胞少量缺失。Smad5(+/-)与Smad5(+/+)小鼠外毛细胞计数差异有显著性意义(P<0.01),而内毛细胞计数差异无显著意义(P>0.05)。结论Smad5基因敲除导致小鼠中、重度听力下降,耳蜗基底膜毛细胞缺失,以外毛细胞为主。Smad5基因敲除导致毛细胞缺失是Smad5(+/-)小鼠听力损失的原因之一。推测Smad5基因可能是听功能相关基因。 展开更多

关键词 基因 Smad5 小鼠 基因敲除 听力丧失 毛细胞

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小鼠Smad3基因的克隆及其在小鼠组织中的表达 被引量：6

14

作者 程萱 徐晓玲 +3 位作者 沈善祥 周江 邓初夏 杨晓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期14-18,共5页

采用PCR获得的Smad3cDNA片段作为探针筛选小鼠脑cDNA文库 .克隆了小鼠全长的Smad3基因 .对小鼠Smad3基因的全编码区进行了序列测定 .结果表明 ,小鼠SMAD3与人SMAD3氨基酸同源性高达 99% .与小鼠Smad2基因相比 ,碱基同源性高达 91 8% .No... 采用PCR获得的Smad3cDNA片段作为探针筛选小鼠脑cDNA文库 .克隆了小鼠全长的Smad3基因 .对小鼠Smad3基因的全编码区进行了序列测定 .结果表明 ,小鼠SMAD3与人SMAD3氨基酸同源性高达 99% .与小鼠Smad2基因相比 ,碱基同源性高达 91 8% .Northern杂交显示 ,Smad3基因在小鼠胚胎发育和各成体器官中普遍表达 .原位杂交显示 ,Smad3基因表达在小鼠胚胎期E16 5d的软骨。 展开更多

关键词 小鼠 SMAD3基因 表达模式 同源性 基因克隆

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Smad4基因敲除对小鼠听力和前庭功能的影响 被引量：9

15

作者 卢云云 杨仕明 +3 位作者 郭维维 胡吟燕 杨伟炎 杨晓 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2005年第6期424-426,共3页

目的研究Smad4基因敲除(Smad4+/-)小鼠听力和前庭功能的改变。方法检测Smad4基因敲除小鼠(1、2、3、6月龄)与同种同月龄的野生型(Smad4+/+)小鼠的ABR阈值。按Steal的方法测定小鼠的平衡功能,包括游泳试验、空间姿势反射,以及一般行为观... 目的研究Smad4基因敲除(Smad4+/-)小鼠听力和前庭功能的改变。方法检测Smad4基因敲除小鼠(1、2、3、6月龄)与同种同月龄的野生型(Smad4+/+)小鼠的ABR阈值。按Steal的方法测定小鼠的平衡功能,包括游泳试验、空间姿势反射,以及一般行为观察。结果2、3、6月龄Smad4+/-小鼠听力较同种野生型小鼠明显下降,两种基因型小鼠听阈有显著性差异(P<0.01),但1月龄的不同基因型小鼠听力水平无统计学差异(P>0.05)。Smad4基因敲除小鼠与野生型小鼠外观和体重无明显差异(P>0.05),生后至6月龄的Smad4+/-小鼠与野生型小鼠均无前庭功能异常和行为异常。结论单倍体Smad4基因敲除小鼠听力明显障碍,但前庭功能基本正常。表明Smad4对内耳的听觉有重要作用,可能存在着单倍体功能不全性;而单倍体Smad4基因缺失对于前庭功能影响可能不明显。 展开更多

关键词 SMAD4 基因敲除 内耳 听功能 前庭功能

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Smad5基因缺陷导致小鼠听力重度损失 被引量：4

16

作者 郭维 杨仕明 +4 位作者 刘清明 孙彦询 杨晓 韩东一 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期190-193,共4页

目的观察Smad5基因敲除小鼠听功能的变化及其特点。方法50只Smad5基因敲除的杂合子小鼠与25只野生型小鼠分成5组:2周、4周、8周、12周、24周组。分别行脑干诱发电位(ABR)检测,刺激声用click及toneburst(8kHz,16kHz,32kHz)。结果Smad5基... 目的观察Smad5基因敲除小鼠听功能的变化及其特点。方法50只Smad5基因敲除的杂合子小鼠与25只野生型小鼠分成5组:2周、4周、8周、12周、24周组。分别行脑干诱发电位(ABR)检测,刺激声用click及toneburst(8kHz,16kHz,32kHz)。结果Smad5基因敲除杂合子小鼠2周、4周、8周、12周、24周click刺激ABR平均听阈分别为93±2.78dBSPL;38.7±2.58dBSPL;64.8±3.78dBSPL;81.5±2.48dBSPL;95.7±4.78dBSPL。野生型小鼠平均听阈分别为99±2.78dBSPL;38±3.65dBSPL;32±1.78dBSPL;32±2.70dBSPL;47±5.78dBSPL。经统计学处理,除2周和4周组P>0.05两者听阈差异无显著性外,其他时间段P<0.01,说明基因敲除小鼠与野生型小鼠听阈差异有显著性。toneburst(8kHz,16kHz,32kHz)结果与click刺激ABR听阈结果基本一致。结论Smad5基因敲除导致小鼠随月龄增加而听力损失加重。 展开更多

关键词 SMAD5 小鼠 基因敲除 听力损失

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Smad4基因在野生型和基因缺陷小鼠耳蜗内的定位和分布 被引量：3

17

作者 侯昭晖 杨仕明 +7 位作者 胡吟燕 郭维 孙建和 于宁 张继帅 杨晓 韩东一 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期168-171,共4页

目的检测Smad4基因在成年小鼠耳蜗中是否有表达及表达部位的分布情况,以进一步研究Smad4基因在内耳发育以及听功能调控上的作用。方法动物由军事医学科学院发育和疾病遗传学研究室杨晓研究员提供,动物获取是在C57BL/6J和Blackswiss两种... 目的检测Smad4基因在成年小鼠耳蜗中是否有表达及表达部位的分布情况,以进一步研究Smad4基因在内耳发育以及听功能调控上的作用。方法动物由军事医学科学院发育和疾病遗传学研究室杨晓研究员提供,动物获取是在C57BL/6J和Blackswiss两种遗传背景的小鼠应用Cre-LoxP系统进行条件基因打靶,于小鼠胚胎早期在软骨细胞内将Smad4基因剔除。并生成同窝三种基因型小鼠—野生型Smad4+/+,杂合子Smad4+/-,纯合子Smad4-/-用于本研究。对同窝三种不同基因型小鼠的耳蜗冰冻切片应用免疫组织化学方法染色观察,阴性对照为野生型小鼠耳蜗的冰冻切片并用PBS代替一抗,阳性对照为小鼠肾脏组织冰冻切片。结果Smad4在三种基因型小鼠耳蜗均有广泛表达,表达部位主要集中于血管纹、螺旋韧带、基底膜、盖膜、毛细胞、支持细胞、螺旋神经节细胞等处,其中血管纹和基底膜表达最为明显。Smad4在野生型和杂合型小鼠的耳蜗内表达情况基本一致,但纯合子小鼠耳蜗内表达与前两者相比为较低的水平,但未完全消失。结论Smad4在正常小鼠的耳蜗广泛存在,该基因是耳蜗中广泛表达的蛋白中的一种。作为Bmp4信号通路下游信号因子,它可能在骨性耳蜗的形成、内耳感觉细胞的分化成熟过程中起着重要的作用。 展开更多

关键词 SMAD4 基因缺陷 耳蜗 基因表达

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小鼠胚胎干细胞分化形成拟胚体过程中的细胞程序性死亡 被引量：2

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作者 孙彦洵 侯宁 +1 位作者 吕娅歆 杨晓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期838-843,共6页

为了检测小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcell ,ES细胞 )体外分化的拟胚体 (embryoidbodies ,EBs)形成过程中细胞程序性死亡 (programmedcelldeath ,PCD)的发生 ,通过悬滴、悬浮培养技术定向诱导未分化的ES细胞分化为拟胚体 ,并用RT PCR... 为了检测小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcell ,ES细胞 )体外分化的拟胚体 (embryoidbodies ,EBs)形成过程中细胞程序性死亡 (programmedcelldeath ,PCD)的发生 ,通过悬滴、悬浮培养技术定向诱导未分化的ES细胞分化为拟胚体 ,并用RT PCR检测原始内胚层、原始外胚层、中胚层、内脏内胚层 4种分子标记物在EBs中的表达 .通过TUNEL染色、电镜、激光共聚焦显微镜及Western印迹以确定凋亡发生 .结果表明 :ES细胞体外分化为拟胚体并且表达各胚层相应的分子标记物 ;在拟胚体的发育过程中出现明显的空腔化过程 ,TUNEL染色及电镜观察到凋亡生成 ,同时线粒体膜电位 (ΔΨm)在拟胚体发育过程中降低 ,通过Western印迹检测到caspase3、caspase8的激活 .表明小鼠ES细胞所分化的拟胚体可以作为研究早期胚胎发育的实验模型 ,线粒体在拟胚体的细胞程序性死亡过程中发挥重要的作用 . 展开更多

关键词 胚胎干细胞 拟胚体 体外分化 细胞程序性死亡

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Smad4条件基因敲出小鼠的前庭功能检测 被引量：2

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作者 邓安春 杨仕明 +2 位作者 黄德亮 孙建和 杨晓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期577-580,共4页

目的通过设计的一系列前庭功能检测实验对同窝成组的软骨组织Smad4条件基因敲除野生型、杂合子、纯合子小鼠的前庭功能进行评估。方法前庭功能检测方法:一般行为观察;空间姿势反射;游泳实验;前庭眼反射(VOR),使用前庭功能检查系统记录... 目的通过设计的一系列前庭功能检测实验对同窝成组的软骨组织Smad4条件基因敲除野生型、杂合子、纯合子小鼠的前庭功能进行评估。方法前庭功能检测方法:一般行为观察;空间姿势反射;游泳实验;前庭眼反射(VOR),使用前庭功能检查系统记录眼震电图;短声刺激前庭诱发肌源性电位(VEMP)记录麻醉下椎前颈长肌表面第3颈椎水平的声刺激诱发电位。结果虽然软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠的耳蜗感受声音能力下降,但没有发现软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠出现行为、步态、空间姿势反射和游泳实验等前庭综合功能障碍;3个基因型小鼠均能诱出眼震且相互之间没有差别(P>0.05);VEMP的潜伏期在3个基因型组间无差异(P>0.05),与野生型和杂合子相比,纯合子小鼠VEMP的反应阈值明显增加(P<0.01)。结论只有Smad4条件基因敲除纯合子小鼠的部分球囊功能受到一定程度的影响,其他前庭功能不受影响。 展开更多

关键词 SMAD4 条件基因敲除 前庭功能

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Smad5基因敲除小鼠耳蜗扫描电镜观察 被引量：2

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作者 孙建和 杨仕明 +3 位作者 孙彦询 杨晓 韩东一 杨伟炎 《中华耳科学杂志》 CSCD 2006年第3期194-196,共3页

目的观察Smad5基因敲除杂合(3月组2只小鼠4只耳蜗)子小鼠内耳形态学超微结构变化。方法野生型动物组:1个月组4只小鼠5只耳蜗,2个月组及3个月组各有2只小鼠4只耳蜗;杂合子动物组1个月组3只小鼠3只耳蜗,2个月组2只小鼠4只耳蜗,3个月组3只... 目的观察Smad5基因敲除杂合(3月组2只小鼠4只耳蜗)子小鼠内耳形态学超微结构变化。方法野生型动物组:1个月组4只小鼠5只耳蜗,2个月组及3个月组各有2只小鼠4只耳蜗;杂合子动物组1个月组3只小鼠3只耳蜗,2个月组2只小鼠4只耳蜗,3个月组3只小鼠6只耳蜗。按常规方法制成标本作扫描电镜观察。结果Smad5基因敲除杂合子小鼠扫描电镜观察:1月组耳蜗中均观察到耳蜗第一和第二圈外毛细胞有不同程度的静纤毛融合,未见外毛细胞缺失,内毛细胞未见明显地病理变化。2月组耳蜗中观察到第一和第二圈均可见内外毛细胞静纤毛不同程度缺失,有的部位以内毛细胞静纤毛缺失为主,而有的部位以外毛细胞静纤毛缺失为主,有的以片状缺失为主,有的则以散在性缺失为主。3个月组3只小鼠6只耳蜗中均观察到不同程度第一和第二圈内外毛细胞静纤毛广泛性缺失,有外毛细胞缺失的部位多,以第一排外毛细胞的静纤毛缺失为主,第二和第三排外毛细胞静纤毛多以散在性缺失为主,有内毛细胞缺失的部位多伴有外毛细胞静纤毛的大片状缺失。野生型动物组扫描电镜观察:1个月组4只小鼠5只耳蜗,2个月组2只小鼠4只耳蜗均未观察到内外毛细胞缺失和静纤毛的变化,3月组有少量的外毛细胞缺失。结论野生型小鼠2个月以内耳蜗毛细胞无明显变化.杂合子小鼠随着月龄的增加内外毛细胞缺失的程度逐渐加重。 展开更多

关键词 SMAD5 小鼠 基因敲除 电镜 内耳 形态

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