真核起始因子5A与细胞周期G_1-S调控的研究 被引量：8

1

作者 靳宝锋 何昆 +3 位作者 胡美茹 于鸣 沈倍奋 张学敏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期325-328,共4页

真核启始因子 5A(eIF 5A)翻译后第 4 9位的赖氨酸被修饰为一个特殊氨基酸hypusine ,后者是其发挥功能所必需的。本研究用eIF 5A翻译后hypusine修饰的特异性阻断剂 1,7 二氨基庚烷 (1,7 diaminoheptane ,DAH)处理白血病细胞系 (TF 1,THP ... 真核启始因子 5A(eIF 5A)翻译后第 4 9位的赖氨酸被修饰为一个特殊氨基酸hypusine ,后者是其发挥功能所必需的。本研究用eIF 5A翻译后hypusine修饰的特异性阻断剂 1,7 二氨基庚烷 (1,7 diaminoheptane ,DAH)处理白血病细胞系 (TF 1,THP 1和Mo7e)和人乳腺癌细胞系 (MCF 7) ,用FCM和台盼蓝拒染法检测其对细胞增殖和活性的影响 ;应用两步胸腺嘧啶核苷阻断法使细胞周期同步化 ,并用免疫印迹法检测eIF 5A在细胞周期时相的表达情况。结果表明 :用 1,7 二氨基庚烷处理后 ,细胞生长明显受到抑制 ,并有一定的促凋亡效应 ;且细胞周期被特异性阻滞于G1/S期 ;eIF 5A在细胞周期的S期和G2 /M期的表达量较低 ,在G1期表达量明显增加。结论 :eIF 5A的hypusine修饰参与了细胞周期调控 。 展开更多

关键词 真核起始因子5A HYPUSINE 细胞同步化 细胞周期调控

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Th17细胞分化、调节及效应研究进展 被引量：32

2

作者 韩根成 沈倍奋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-123,共7页

Th17细胞作为一个不同于Th1、Th2的细胞亚群,已经被证实在自身免疫病、感染等疾病中发挥重要的作用.为了进一步认识Th17细胞的效应机制,近来对于Th17细胞的分化及调节进行了深入的研究,证实TGF-β与IL-6或者IL-21的协同作用是诱导Th17... Th17细胞作为一个不同于Th1、Th2的细胞亚群,已经被证实在自身免疫病、感染等疾病中发挥重要的作用.为了进一步认识Th17细胞的效应机制,近来对于Th17细胞的分化及调节进行了深入的研究,证实TGF-β与IL-6或者IL-21的协同作用是诱导Th17细胞分化的关键因素,而IL-23在促进IL-17分泌,增强Th17细胞效应功能方面发挥重要作用.与Th1、Th2、Treg细胞特异性的转录调节因子T-bet、GATA3、Foxp3相对应,现证实ROR-γt(retinoid-related orphan receptors-γt)是促进Th17细胞分化、调节其功能的特异性转录调节因子.Th17细胞通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α等细胞因子发挥效应功能。其中IL-21作为Th17细胞的一个自分泌调节因子,在诱导Th17分化、抑制Th1、Treg功能方面发挥关键作用.而另一方面,近来发现,重要的T细胞生长因子IL-2在维持、促进Th1、Th2、Treg及CD8+T细胞功能活性的同时,却发挥着抑制Th17细胞分化的作用.Th1、Treg、Th17细胞的分化之间存在微妙的调节关系,TGF-β的水平、作用的时间决定着上述三群T细胞的分化结局.Th17细胞与Th1细胞均是自身免疫病及感染性疾病的重要效应细胞,二者的作用是否有时间、空间、功能方面的特异性?TGF-β如何调节两群效应细胞的分化方向及功能?以及Th17细胞在体内免疫平衡中的作用,是否可以通过Th17细胞诱导免疫耐受等,是人们急于回答的非常有意义的课题. 展开更多

关键词 TH17细胞 分化 调节

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免疫毒素去除T细胞在异基因造血干细胞移植中的应用 被引量：2

3

作者 赖悦云 郭乃榄 +7 位作者 黄晓军 许兰平 陈欢 汪素琴 郑海音 黎燕 沈倍奋 陆道培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期270-273,共4页

观察应用免疫毒素部分去除T细胞 (TCD)的方法进行人类白细胞抗原 混合淋巴细胞培养 (HLA MLC)不相合异基因造血干细胞移植的临床疗效。采用蓖麻免疫毒素部分去T细胞对 13例恶性血液病患者行HLA MLC配型不相合的造血干细胞移植 ,其中慢... 观察应用免疫毒素部分去除T细胞 (TCD)的方法进行人类白细胞抗原 混合淋巴细胞培养 (HLA MLC)不相合异基因造血干细胞移植的临床疗效。采用蓖麻免疫毒素部分去T细胞对 13例恶性血液病患者行HLA MLC配型不相合的造血干细胞移植 ,其中慢性髓性白血病 (CP1 ) 6例 ;急性淋巴细胞白血病CR1 1例 ,CR2 1例 ,复发 1例 ;急性髓性白血病CR1 2例 ,CR2 1例 ;骨髓增生异常综合征转化成急性髓性白血病M4 型 (CR1 ) 1例。结果表明 :13例患者中 8例成功植入 ,其中 2例发生II度急性移植物抗宿主病 (aGVHD) ,2例发生III -IV度aGVHD。随访 8- 90个月 ,2例发生III-IV度aGVHD患者早期死亡 ,另有 1例患者死于迟发感染 ,其余 5例均无病存活至今。 5例未植活的患者中 4例回输同一供者外周血造血干细胞后 3例未植入 ,1例植活 ,但死于移植相关合并症 ;1例再次行同基因造血干细胞移植成功并无病存活至今。结论 :采用蓖麻免疫毒素部分去T细胞的方法行HLA MLC配型不相合的异基因造血干细胞移植可减少重度aGVHD的发生 ,但移植早期排斥率 (HVG)较高 ,临床应用效果有待进一步评估。 展开更多

关键词 造血干细胞移植 异基因造血干细胞移植 免疫毒素去除T细胞 移植物抗宿主病 白血病

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原癌基因HER2转录调控的研究进展 被引量：3

4

作者 钱露 郭宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第3期225-228,共4页

原癌基因HER2在许多肿瘤中过表达,与肿瘤发生、发展密切相关。抑制HER2过表达已成为肿瘤治疗的新靶点。肿瘤细胞HER2过表达主要由其基因转录水平的异常增高引起,通过抑制HER2基因启动子活性实现肿瘤细胞HER2的低表达能够有效抑制肿瘤细... 原癌基因HER2在许多肿瘤中过表达,与肿瘤发生、发展密切相关。抑制HER2过表达已成为肿瘤治疗的新靶点。肿瘤细胞HER2过表达主要由其基因转录水平的异常增高引起,通过抑制HER2基因启动子活性实现肿瘤细胞HER2的低表达能够有效抑制肿瘤细胞的生长。因此深入阐明HER2转录调控机制,可能为靶向HER2的肿瘤治疗策略提供新思路。 展开更多

关键词 HER2 启动子 转录调控 肿瘤治疗

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CD4分子二聚化或寡聚化的研究进展 被引量：3

5

作者 肖鹤 黎燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期28-30,共3页

关键词 CD4 二聚化 寡聚化

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蛋白质组学研究的主要策略及其在肿瘤研究中的应用 被引量：2

6

作者 夏晴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第1期60-62,共3页

肿瘤的发生涉及一系列复杂的分子事件 ,蛋白质组学研究手段可以大规模地定量分析细胞内的蛋白质表达水平、翻译后修饰等性质以及定义信号网络中的蛋白质间相互作用 ,从而有希望发现控制肿瘤进程的关键分子 ,为肿瘤的诊断、分型、药物研... 肿瘤的发生涉及一系列复杂的分子事件 ,蛋白质组学研究手段可以大规模地定量分析细胞内的蛋白质表达水平、翻译后修饰等性质以及定义信号网络中的蛋白质间相互作用 ,从而有希望发现控制肿瘤进程的关键分子 ,为肿瘤的诊断、分型、药物研制带来新的思路和途径。蛋白质组学为肿瘤的研究提供了新的平台。 展开更多

关键词 蛋白质组学 肿瘤 信号转导

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可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果

7

作者 李晓军 董家新 +2 位作者 倪长源 黎燕 沈倍奋 《医学研究生学报》 CAS 1997年第2期119-122,共4页

目的 :构建可溶性白细胞介素 6受体 ( IL- 6R) β亚基 ( sgp130 )重组痘苗病毒 ,感染动物细胞使其表达 sgp130 ,用重组病毒免疫动物产生特异性抗 sgp130抗体。　 方法 :将 sgp130基因导入痘苗病毒载体 p JSA1175,用脂质体转染法将重组... 目的 :构建可溶性白细胞介素 6受体 ( IL- 6R) β亚基 ( sgp130 )重组痘苗病毒 ,感染动物细胞使其表达 sgp130 ,用重组病毒免疫动物产生特异性抗 sgp130抗体。　 方法 :将 sgp130基因导入痘苗病毒载体 p JSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在 TK-143细胞中发生同源重组 ,用 Bud R和 X- gal双重选择 ,得到带有人 sgp130的重组病毒 ( Vsgp130 )。　 结果 :采用 IDA和 Western Blotting法证实 ,感染 Vsgp130的 TK-143细胞上清中有较强的 sgp130表达 ,表达产物分子量为 10 0 0 0 0左右。用重组病毒免疫家兔和 Balb/c小鼠 ,可刺激抗体产生。　 结论 :sgp130在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗 sgp130多克隆抗体的产生为进一步研究 IL- 6等细胞因子信号传导机理及研制抗 展开更多

关键词 GP130 白介素6受体 痘苗病毒 基因表达

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两种抗T细胞免疫毒素对靶细胞杀伤效应的比较

8

作者 黎燕 赖春宁 +6 位作者 裴武红 贺永怀 孙英勋 沈倍奋 陈兴国 金荔 孔繁华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期205-210,共6页

免疫毒素杀伤靶细胞的关键取决于抗体对靶细胞的特异性识别和毒素对靶细胞的杀伤效率。本研究比较了我们所研制的两种抗T细胞免疫毒素 (CD5∶rRA和CD5∶Ricin)对靶细胞的特异性杀伤效应。实验结果证实 :①两种免疫毒素在 10 -9- 10 -11m... 免疫毒素杀伤靶细胞的关键取决于抗体对靶细胞的特异性识别和毒素对靶细胞的杀伤效率。本研究比较了我们所研制的两种抗T细胞免疫毒素 (CD5∶rRA和CD5∶Ricin)对靶细胞的特异性杀伤效应。实验结果证实 :①两种免疫毒素在 10 -9- 10 -11mol L浓度范围内均可有效地清除CD5 +T细胞群 ,并对CD2 5 +CD3+激活T细胞具有剂量依赖性抑制作用 ;②两种免疫毒素均对混合淋巴细胞增殖反应有明显抑制作用 ,与CD5∶Ricin比较 ,CD5∶rRA在 10 -10 - 10 -11mol L浓度范围内对T细胞增殖的抑制作用明显减弱 ;③ 10mmol L氯化铵与CD5∶rRA联合应用 ,可增强CD5∶rRA对T细胞的清除效率 ;④两种免疫毒素及氯化铵与CD5∶rRA联合应用在有效杀伤T细胞的浓度范围内 ,对骨髓粒 展开更多

关键词 抗T细胞免疫毒素 T淋巴细胞 靶细胞

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可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果

9

作者 李晓军 董家新 +2 位作者 倪长源 黎燕 沈倍奋 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第2期159-163,共5页

目的：构建可溶性白细胞介素６受体（ＩＬ－６Ｒ）β亚基（ｓｇｐ１３０）重组痘苗病毒，感染动物细胞使其表达ｓｇｐ１３０，用重组病毒免疫动物产生特异性抗ｓｇｐ１３０抗体。方法：将ｓｇｐ１３０基因导入痘苗病毒载体ｐＪＳＡ１１... 目的：构建可溶性白细胞介素６受体（ＩＬ－６Ｒ）β亚基（ｓｇｐ１３０）重组痘苗病毒，感染动物细胞使其表达ｓｇｐ１３０，用重组病毒免疫动物产生特异性抗ｓｇｐ１３０抗体。方法：将ｓｇｐ１３０基因导入痘苗病毒载体ｐＪＳＡ１１７５，用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在ＴＫ－１４３细胞中发生同源重组，用ＢｕｄＲ和Ｘ－ｇａｌ双重选择，得到带有人ｓｇｐ１３０的重组病毒（Ｖｓｇｐ１３０）。结果：采用ＩＤＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法证实，感染Ｖｓｇｐ１３０的ＴＫ－１４３细胞上清中有较强的ｓｇｐ１３０表达，表达产物分子量为１０００００左右。用重组病毒免疫家兔和Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，可刺激抗体产生。结论：ｓｇｐ１３０在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗ｓｇｐ１３０多克隆抗体的产生为进一步研究ＩＬ－６等细胞因子信号传导机理及研制抗ｓｇｐ１３０单克隆抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 痘苗病毒 基因表达 白细胞介素6 受体 Β亚基

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改进SDS-Phenol法快速提取细胞总RNA 被引量：16

10

作者 吴丽娟 黎燕 +1 位作者 胡美茹 沈倍奋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期57-59,共3页

目的：比较改进ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法与常用的ＡＧＰＣ法提取细胞之总ＲＮＡ优缺点。方法：同时采用两种方法对同批稳定培养的一株淋巴瘤细胞系进行总ＲＮＡ提取，以收获ＲＮＡ的产量和纯度为比较指标，并用甲醛变性电泳验证ＳＤＳ－... 目的：比较改进ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法与常用的ＡＧＰＣ法提取细胞之总ＲＮＡ优缺点。方法：同时采用两种方法对同批稳定培养的一株淋巴瘤细胞系进行总ＲＮＡ提取，以收获ＲＮＡ的产量和纯度为比较指标，并用甲醛变性电泳验证ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法提取ＲＮＡ的完整性。结果：改进ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法可从１×１０４细胞中提取（１．９３±０．２０）μｇ的总ＲＮＡ，是ＡＧＰＣ法的两倍以上。细胞数在１×１０５～１００×１０５范围内时其ＲＮＡ产量与细胞数量呈线性相关。５×１０５以上细胞所提取的ＲＮＡ，Ａ２６０／２８０在１．７８～１．８３之间，无蛋白质，纯度平均在９０％以上，甲醛变性电泳示ＲＮＡ完整无降解。５×１０６细胞可收获ＲＮＡ（５５．３４±３．０２）μｇ，变异系数５．４５％。结论：改进ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法优于ＡＧＰＣ法，有快速、简便和高效的特点，值得推广应用。 展开更多

关键词 RNA 提取 SDS-Phemol法

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抗CD28抗体协同刺激增强抗CD3抗体体外激活T淋巴细胞并降低TGF-β的表达 被引量：8

11

作者 骆群 吕明 +1 位作者 于鸣 黎燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期547-551,共5页

为了探讨体外激活T淋巴细胞的方法及活化后T淋巴细胞的免疫学特征,利用抗CD3、抗CD28抗体在体外刺激健康人外周血单个核细胞PBMNC,检测淋巴细胞转化,CD8+CD25+细胞比例和肿瘤生长因子β(TGF-β)表达等相关免疫学指标。结果表明,在抗CD2... 为了探讨体外激活T淋巴细胞的方法及活化后T淋巴细胞的免疫学特征,利用抗CD3、抗CD28抗体在体外刺激健康人外周血单个核细胞PBMNC,检测淋巴细胞转化,CD8+CD25+细胞比例和肿瘤生长因子β(TGF-β)表达等相关免疫学指标。结果表明,在抗CD28抗体的协同作用下,抗CD3抗体的刺激活性明显提高,CD8+CD25+细胞比例明显增加,TGF-β的表达下调。结论:抗CD28抗体协同刺激可以提供第二信号,使T淋巴细胞充分活化。 展开更多

关键词 抗CD3抗体 抗CD28抗体 TGF-Β T细胞

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细胞凋亡的检测技术与方法 被引量：38

12

作者 王嘉宁 郭宁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期466-470,共5页

细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来。本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DN... 细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键的角色。根据死亡细胞的形态学、生物化学和分子生物学特征,可以将凋亡细胞与坏死细胞区别开来。本文综述了常用的细胞凋亡检测技术与方法的基本原理,如形态学观察、荧光素染色、DNA阶梯、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶活性的检测等,并对各种方法的优点及局限性做一简要比较。用透射电镜进行超微结构观察仍是鉴定细胞凋亡的金标准。在选择细胞凋亡检测方法时,要充分了解各种方法的原理和应用范围,进行综合考虑。多种检测方法的联合应用常可获得准确的结果。 展开更多

关键词 细胞凋亡 线粒体膜电位 荧光染料 流式细胞术 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

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抗CD20嵌合抗体的构建与表达 被引量：6

13

作者 王玉刚 黄英 +5 位作者 谷欣 于鸣 冯健男 孙瑛勋 黎燕 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期363-367,共5页

目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-2... 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。 展开更多

关键词 杂交瘤 质谱分析 嵌合抗体

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以CD4为靶点的小分子化合物J2对异基因角膜移植小鼠淋巴细胞的影响 被引量：5

14

作者 王大江 黄一飞 +3 位作者 郭惠玲 陈国江 张晗 黎燕 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第8期750-754,共5页

目的探讨小分子化合物J2对异基因角膜移植小鼠淋巴细胞的影响。方法建立小鼠角膜移植模型,随机分为A、B、C、D4个组。A组为空白对照组3只BALB/c小鼠,B、C、D组各11只鼠,均取右眼行C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植术,自手术当日开始腹腔... 目的探讨小分子化合物J2对异基因角膜移植小鼠淋巴细胞的影响。方法建立小鼠角膜移植模型,随机分为A、B、C、D4个组。A组为空白对照组3只BALB/c小鼠,B、C、D组各11只鼠,均取右眼行C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植术,自手术当日开始腹腔注射给药,B组给予不含药物的安慰剂,C组给予环孢素A(CsA)10mg/kg,D组给予J215mg/kg,每日1次,连续给药12d。给药后7d,取大鼠脾细胞给予刀豆蛋白(ConA)刺激细胞增生,采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)及IL-4的含量,比较各组细胞增生指数及细胞因子含量。结果 B组角膜植片平均存活时间为(18.88±4.19)d,C组、D组发生排斥时间分别为(35.13±5.74)d、(33.62±6.80)d,明显延迟,与B组比较差异均有统计学意义(q=9.17,P<0.01;q=8.33,P=0.00),而C组与D组比较差异无统计学意义(q=0.85,P=0.60)。ConA刺激角膜移植后小鼠脾细胞增生,各组小鼠脾细胞的增生指数差异无统计学意义(F=3.729,P=0.061)。异基因小鼠角膜移植后3周左右小鼠脾细胞中IL-2和IL-4的含量无明显变化。应用ConA刺激后ELISA法检测结果表明,角膜移植小鼠脾细胞分泌IL-2明显增多,J2可抑制ConA诱导的IL-2分泌增加。结论 J2可能通过抑制CD4+T淋巴细胞而抑制角膜排斥反应的发生;J2能够明显抑制ConA刺激角膜移植后小鼠脾细胞的增生及Th1细胞因子的产生。 展开更多

关键词 角膜移植 小分子化合物 淋巴细胞 环孢素A 免疫排斥

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人IgE Cε3-Cε4蛋白的表达、复性、纯化及初步鉴定 被引量：2

15

作者 乔春霞 林周 +4 位作者 胡美茹 刘睿 秦卫松 冯健男 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期64-66,70,共4页

目的获得IgE Fc段的Cε3-Cε4重组蛋白(E34)。方法以RT-PCR技术扩增IgE Cε3-Cε4(E34)cDNA片段,构建原核表达载体。以其转化大肠杆菌BL-21,诱导表达主要以包涵体形式存在的目的蛋白。经复性、纯化后,用Wes-tern blot和ELISA法初步鉴定... 目的获得IgE Fc段的Cε3-Cε4重组蛋白(E34)。方法以RT-PCR技术扩增IgE Cε3-Cε4(E34)cDNA片段,构建原核表达载体。以其转化大肠杆菌BL-21,诱导表达主要以包涵体形式存在的目的蛋白。经复性、纯化后,用Wes-tern blot和ELISA法初步鉴定所获E34蛋白与抗人IgE mAb的结合能力。结果对克隆的E34基因片段测序表明,与已报道的序列相一致。获得的可溶性E34蛋白经SDS-PAGE鉴定显示,其相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致。Westernblot和ELISA法进一步证实,E34蛋白能够被鼠抗IgE mAb特异性识别。结论成功地构建了pET28a(+)-E34表达载体,并获得能被抗IgE mAb特异性识别的可溶性蛋白E34,为下一步的工作打下了基础。 展开更多

关键词 IGE Cε3-Cε4 表达 复性 纯化

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小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达 被引量：3

16

作者 宫玉波 黄一飞 +5 位作者 黎燕 韩根成 刘勇 王大江 杜改萍 余继锋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期721-724,共4页

目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC... 目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp3与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3。Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达。结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL。慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加。结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞。 展开更多

关键词 FOXP3 慢病毒 DC2.4

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CD20抗原及治疗性抗CD20抗体 被引量：10

17

作者 王玉刚 沈倍奋 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第1期76-79,共4页

CD20是人类B淋巴细胞表面特有的标识。它高表达于所有正常B细胞和多数恶性B细胞表面,不会发生明显的内化和脱落,是治疗非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma,NHL)理想的靶抗原。其胞外区由43个氨基酸残基组成,但组成的抗原表位却异常... CD20是人类B淋巴细胞表面特有的标识。它高表达于所有正常B细胞和多数恶性B细胞表面,不会发生明显的内化和脱落,是治疗非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma,NHL)理想的靶抗原。其胞外区由43个氨基酸残基组成,但组成的抗原表位却异常多样。目前,已经有多种针对CD20抗原的抗体被FDA批准上市,用于B细胞非霍奇金淋巴瘤的治疗,都显示出良好的效果。 展开更多

关键词 CD20 抗原表位 抗CD20单克隆抗体

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用RLM-RACE法克隆抗CD20单克隆抗体可变区基因及其信号肽基因 被引量：3

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作者 王玉刚 冯健男 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期466-469,共4页

目的:寻找一种可同时钓取抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因的方法。方法:使用Trizol提取杂交瘤细胞1-28的总RNA,分别采用传统的快速扩增5′cDNA末端(traditionalrapidamplificationof5′cDNAend,T5′RACE)和RNA连接酶介导的快速扩增5... 目的:寻找一种可同时钓取抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因的方法。方法:使用Trizol提取杂交瘤细胞1-28的总RNA,分别采用传统的快速扩增5′cDNA末端(traditionalrapidamplificationof5′cDNAend,T5′RACE)和RNA连接酶介导的快速扩增5′cDNA末端(RNAligasemediatedrapidamplificationof5′cDNAend,RLMRACE)的方法钓取目的基因。将其克隆到pGEMTEasy载体上,测序后,与Kabat数据库和GenBank中相应的序列进行比对。结果:采用RLMRACE法可同时钓取到抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因,而用T5′RACE法仅能获得VL基因及其信号肽基因。结论:RLMRACE法是钓取抗体V区基因和信号肽基因的好方法。 展开更多

关键词 RACE Ⅴ区基因 信号肽基因 单克隆抗体

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米哚妥林对P糖蛋白介导的多药耐药的逆转作用 被引量：2

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作者 魏寅祥 赵青 +5 位作者 任志广 贾砚寒 李新颖 黎燕 彭晖 马远方 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期77-83,共7页

目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性... 目的评价新型激酶抑制剂类抗癌药米哚妥林逆转P糖蛋白(P-gp)介导肿瘤细胞多药耐药的作用,并探讨其可能机制。方法米哚妥林0.5,1和5μmol·L-1分别加入P-gp高表达的K562/A02和K562细胞中培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测细胞毒性。米哚妥林0.125,0.25和0.5μmol·L-1在K562/A02和K562细胞中与无毒剂量的P-gp底物多柔比星、紫杉醇或长春新碱共培养72 h,MTS法测定细胞存活率以检测逆转耐药作用。米哚妥林0.5和10μmol·L-1与P-gp荧光底物罗丹明123在耐药和敏感细胞中共同孵育30 min后用流式细胞术分析底物积累的变化。米哚妥林0.5μmol·L-1与耐药和敏感细胞共同孵育72 h,Western印迹法检测耐药蛋白和信号分子的表达,定量PCR检测MDR1基因表达的变化。将米哚妥林与P-gp膜蛋白共孵育,化学发光法测定剩余ATP的量,检测米哚妥林对P-gp ATP酶活性的影响。结果米哚妥林对P-gp高表达的K562/A02和亲本敏感细胞K562的细胞毒性无明显的差异,其中米哚妥林0.5μmol·L-1时2种细胞的存活率均达80%以上。米哚妥林0.5μmol·L-1在细胞水平即可有效逆转K562/A02对多种底物的耐药,而对敏感细胞无显著作用;米哚妥林能显著抑制P-gp的外排作用,增加底物Rh-123在K562/A02细胞中的积累,且效果好于阴性对照维拉帕米0.5和10μmol·L-1;米哚妥林对P-gp基因和蛋白表达以及AKT和ERK的表达与磷酸化水平均无影响;米哚妥林对P-gp的ATP酶活性具有明显的抑制作用。结论米哚妥林可抑制P-gp介导的药物外排并逆转P-gp介导的肿瘤多药耐药。 展开更多

关键词 米哚妥林 多药耐药相关蛋白 糖蛋白类 蛋白激酶抑制剂

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凋亡相关蛋白(eIF-5A)——双向电泳分离、编码基因克隆和表达、多抗制备 被引量：1

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作者 胡美茹 靳宝峰 +2 位作者 何昆 张学敏 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期573-575,共3页

蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由... 蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在E.coli中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白. 展开更多

关键词 双向电泳 凋亡相关蛋白 EIF-5A 基因克隆

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