为建立鸡新城疫病毒La Sota株在LMH细胞上的全悬浮培养工艺,以获得高滴度的新城疫疫苗抗原,采用LMH贴壁细胞悬浮培养驯化方法,获得了形态良好、能稳定传代的LMH悬浮细胞株;以LMH悬浮细胞在摇瓶培养NDV La Sota株为基础,对接毒细胞密度...为建立鸡新城疫病毒La Sota株在LMH细胞上的全悬浮培养工艺,以获得高滴度的新城疫疫苗抗原,采用LMH贴壁细胞悬浮培养驯化方法,获得了形态良好、能稳定传代的LMH悬浮细胞株;以LMH悬浮细胞在摇瓶培养NDV La Sota株为基础,对接毒细胞密度、接毒剂量、胰酶添加浓度、收获时间等工艺参数进行了摸索和优化,并在14 L生物反应器中进一步进行3个批次的培养验证。结果显示:LMH悬浮细胞以初始密度1.5×10^(6)/mL左右接种,培养72 h可增殖到8.0×10^(6)~9.0×10^(6)/mL,细胞活率达97%以上。确定NDV La Sota株在LMH悬浮细胞株上的培养工艺:LMH细胞悬浮培养至不低于4.5×10^(6)/mL按照感染复数不低于0.2接种病毒,并添加终浓度为5μg/mL的胰酶,于37℃培养72 h左右,细胞活率在30%左右收获病毒液,NDV HA均可达1∶2048~1∶4096,病毒含量≥10^(7.63)EID50/0.1 mL。结果表明成功建立了LMH细胞全悬浮培养工艺,并能在生物反应器扩大培养,为ND相关疫苗研发提供了技术支撑。展开更多
猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时...猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时间,因此,疫苗免疫仍是猪场控制PCV2的重要手段。展开更多
旨在了解猪脾转移因子(TF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量(10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份)LaSota疫苗株单独(单独免疫组)、LaSota疫苗株与TF联合(联合免疫组)免疫SPF鸡,14 ...旨在了解猪脾转移因子(TF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量(10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份)LaSota疫苗株单独(单独免疫组)、LaSota疫苗株与TF联合(联合免疫组)免疫SPF鸡,14 d后以NDV F 48 E 9强毒攻毒,同时设立对照组(非免疫攻毒)和空白组(非免疫非攻毒),并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量(PD_(50))如下:单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.0008羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.0005羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^(-3)羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著(P<0.01);攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著(P<0.01)。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD_(50);在抵抗NDV F 48 E 9强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。展开更多
文摘猪圆环病毒病是一种可以给猪场造成严重经济损失的疾病,当前,猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)感染在很多猪场仍有很高的比例,给猪场管理带来了巨大压力。有效的疫苗免疫有利于猪抵抗病毒,减少病毒血症的发生和缩短带毒时间,因此,疫苗免疫仍是猪场控制PCV2的重要手段。
文摘旨在了解猪脾转移因子(TF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量(10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份)LaSota疫苗株单独(单独免疫组)、LaSota疫苗株与TF联合(联合免疫组)免疫SPF鸡,14 d后以NDV F 48 E 9强毒攻毒,同时设立对照组(非免疫攻毒)和空白组(非免疫非攻毒),并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量(PD_(50))如下:单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.0008羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.0005羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^(-3)羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著(P<0.01);攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著(P<0.01)。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD_(50);在抵抗NDV F 48 E 9强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。
