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靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
被引量：
1
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作者
张小鹰
吴风云
+3 位作者
何金花
廖晓莉
王威
蒋建伟
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期278-287,共10页
为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRN...
为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.
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关键词
RNA干扰
增殖细胞核抗原
真核细胞表达载体
HEPG2细胞
肝癌
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职称材料
题名
靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
被引量：
1
1
作者
张小鹰
吴风云
何金花
廖晓莉
王威
蒋建伟
机构
暨南大学医学
院
生化教研室
广东省
佛山市南海区妇幼保健院检验科
浙江省温州市平阳县人民医
院
广东省广州市番禺区中心医
院
检验
科
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期278-287,共10页
基金
广东省科技计划(2009B080701051)
广东省医学科研基金(A2007322)资助项目~~
文摘
为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增殖、诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞于G0/G1期.
关键词
RNA干扰
增殖细胞核抗原
真核细胞表达载体
HEPG2细胞
肝癌
Keywords
RNA interference
proliferating cell nuclear antigen
eukaryotic expression vector
HepG2 cell line
hepatocelluar carcinoma
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
R73-362 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
张小鹰
吴风云
何金花
廖晓莉
王威
蒋建伟
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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