银杏内酯B对谷氨酸诱导脑皮质神经元凋亡及Ca^(2+)超载的影响 被引量：18

1

作者 蔡卫斌 杨中汉 +4 位作者 李朝阳 宋志宏 周世豪 骆晓枫 高国全 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期652-656,共5页

目的:观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用,并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2 + 浓度改变的关系。方法:采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元,用噻唑兰(MTT)法检测神经元的存活情况;细胞凋亡采用形态学观察... 目的:观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用,并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2 + 浓度改变的关系。方法:采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元,用噻唑兰(MTT)法检测神经元的存活情况;细胞凋亡采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳法和Hoechst332. 5 8核染色方法进行分析;用Fura - 2 /AM荧光指示剂法测定细胞内Ca2 + 浓度。结果:谷氨酸(0 .8mmol/L)能诱导神经细胞凋亡和胞内Ca2 + 超载,银杏内酯B(10 - 2 5 0 μmol/L)能减轻谷氨酸所致的细胞损伤,表现为神经元存活率提高,细胞形态的恢复和DNA断裂减少。结论:银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能竞争PAF受体并降低神经细胞内[Ca2 + ]从而抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡有关。 展开更多

关键词 银杏内酯B 谷氨酸 脑皮质 神经元凋亡 CA^2+超载

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脂肪组织中IRS-1相关的PI3K活性在多囊巢综合征胰岛素抵抗中的作用 被引量：9

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作者 王竹晨 邱洁 +5 位作者 赖伟英 丘惠娜 胡钶 顾熊飞 杨冬梓 邝健全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期317-319,共3页

【目的】探讨多囊卵巢综合征(PCOS)脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(IRS-1-Associcrted-PI3K)的活性在PCOS发病中的作用。【方法】PCOS患者和对照者根据体质量指数(BMI)分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组、肥胖对照组和非肥... 【目的】探讨多囊卵巢综合征(PCOS)脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(IRS-1-Associcrted-PI3K)的活性在PCOS发病中的作用。【方法】PCOS患者和对照者根据体质量指数(BMI)分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组、肥胖对照组和非肥胖对照组,各12例,采用免疫沉淀、薄层层析、放射自显影半定量检测脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性。【结果】脂肪组织中IRS-1-Associated PI3K活性在PCOS肥胖组为55%±24%,较非肥胖对照组84%±16%明显降低(P<0.001);肥胖对照组为46%±22%,PCOS非肥胖组为71%±26%,均较非肥胖对照组明显降低(P<0.001和P<0.05),PCOS肥胖组和肥胖对照组之间以及PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组之间的差异均无显著性意义(P>0.05)。【结论】PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显减弱,可能抑制胰岛素受体后的信号传导,并与PCOS胰岛素抵抗的发生有关。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 脂肪组织 胰岛素受体底物Ⅰ相关的P13K活性

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广州市群体性食物中毒事件中诺如病毒分子流行病学分析 被引量：7

3

作者 吴新伟 杨霞 +6 位作者 蒋力云 沈纪川 谢华萍 李向忠 伍业健 刘于飞 高国全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期486-489,共4页

【目的】初步了解广州市社区食物中毒事件中诺如病毒的分子流行病学情况。【方法】在2003年10月至12月期间,从5个不同流行现场,采集急性期胃肠炎患者的粪便标本76份,用RT-PCR对标本中的诺如病毒核酸进行扩增,将阳性产物回收、纯化并测序... 【目的】初步了解广州市社区食物中毒事件中诺如病毒的分子流行病学情况。【方法】在2003年10月至12月期间,从5个不同流行现场,采集急性期胃肠炎患者的粪便标本76份,用RT-PCR对标本中的诺如病毒核酸进行扩增,将阳性产物回收、纯化并测序,与GenBank中的相关序列进行比较分析,绘制系统发生树。【结果】76份样品中共检出阳性36份,阳性率为47.37%。从5个流行现场获得5个代表株,分别为DX1106、PY1106、HM1121、PY1202和HD1219,其中DX1106与PY1202的序列完全一致,而其他毒株间的序列同源性在35%～85%之间。系统发生树分析发现5个代表株都属于GⅡ组诺如病毒,但分属于不同的基因型。其中DX1106与PY1202株属于GⅡ-3型,HM1121和HD1219株属于GⅡ-4型,PY1106株介于GⅡ-6、7、8型之间,尚不能确定型别。【结论】广州市存在诺如病毒引起的食物中毒,流行优势株为GⅡ组,但其基因型别存在多样性。 展开更多

关键词 诺如病毒 食物中毒 分子流行病学 系统发生树

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离心机训练后+Gz耐力相关基因的分离与鉴定 被引量：4

4

作者 梁雪清 罗超权 +4 位作者 刘丽 刘建斌 于立身 王烨 曹颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期245-249,共5页

为探讨离心机训练提高正向加速度 (forwardacceleration ,+Gz)耐力的分子机制 ,应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和斑点杂交技术筛选离心机训练 12d后测试高耐力组 (耐受 + 16Gz)与未训练对照组大鼠全脑... 为探讨离心机训练提高正向加速度 (forwardacceleration ,+Gz)耐力的分子机制 ,应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和斑点杂交技术筛选离心机训练 12d后测试高耐力组 (耐受 + 16Gz)与未训练对照组大鼠全脑的差异表达基因 .将获得的序列表达标签 (expressedsequencetag ,EST)进行特异性鉴定后 ,获得 7个上调EST ,其中 5个为已知基因的部分序列 ,2个为新EST ,它们的表达量均在训练 6d组最高 ,表明离心机训练可明显影响大鼠全脑特定基因的表达水平 ,这些基因表达水平的变化很可能与离心机训练提高机体 展开更多

关键词 正向加速度耐力 基因 分离 鉴定 离心机训练 抑制性消减杂交 斑点杂交技术 基因差异表达 分子机制 序列表达标签

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大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡 被引量：7

5

作者 马建芳 杨中汉 +5 位作者 宋志宏 郭颖 蔡卫斌 刘倩平 郭琳琅 高国全 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期435-438,共4页

目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染... 目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。 展开更多

关键词 视网膜病 糖尿病性 细胞凋亡 视网膜内皮细胞 高血糖症 流式细胞计数

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新生乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间质干细胞向视网膜神经样细胞分化 被引量：6

6

作者 余克明 葛坚 +3 位作者 庄菁 陈慧怡 王智崇 喻瓴 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期6-10,共5页

目的探讨体外培养的新生乳鼠视网膜细胞对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法取成年Wistar大鼠股骨全骨髓细胞体外培养,经多次传代后获得高纯度的骨髓间质干细胞。以新生乳鼠视网膜细胞作诱导条件,采用分层共培养的方法诱导骨髓间质干... 目的探讨体外培养的新生乳鼠视网膜细胞对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法取成年Wistar大鼠股骨全骨髓细胞体外培养,经多次传代后获得高纯度的骨髓间质干细胞。以新生乳鼠视网膜细胞作诱导条件,采用分层共培养的方法诱导骨髓间质干细胞。倒置相差显微镜观察骨髓间质干细胞与新生乳鼠视网膜细胞共培养后形态的改变;免疫组织化学法检测诱导后的细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微丝微管相关蛋白-2(Map-2)、Thy11、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等特异性标记物的表达;RT-PCR进一步分析诱导后细胞表达nestin、NF、NSE、Thy11及Ran等mRNA的情况。结果新生乳鼠视网膜细胞作诱导剂,诱导48h后可见部分细胞长出突起并向视网膜神经元特性样的细胞分化,最长可维持10d。结论骨髓间质干细胞在体外培养的新生乳鼠视网膜细胞的诱导作用下可以向视网膜神经元样细胞分化。 展开更多

关键词 骨髓间质干细胞 诱导分化 视网膜

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纤溶酶原Kringle5缺失突变体抑制血管内皮细胞增生的研究 被引量：6

7

作者 马建芳 杨中汉 +7 位作者 李朝阳 蔡卫斌 宋志宏 郭颖 郭琳琅 李民友 刘祖国 高国全 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第12期1245-1248,共4页

目的纤溶酶原蛋白水解片段Kringle 5(K5)具有治疗血管增生性疾病的潜在临床应用价值,但是K5已获得美国专利。本研究应用基因突变和基因重组技术获得缺失突变型(K5Mut1)并检测其体外活性。方法除去K5外环两端的N端和C端15个氨基酸残基以... 目的纤溶酶原蛋白水解片段Kringle 5(K5)具有治疗血管增生性疾病的潜在临床应用价值,但是K5已获得美国专利。本研究应用基因突变和基因重组技术获得缺失突变型(K5Mut1)并检测其体外活性。方法除去K5外环两端的N端和C端15个氨基酸残基以降低其相对分子质量,但同时保留K5分子中的所有3个二硫键以保留完整的外环结构域,并在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,获得突变型K5 Mut1 (Cys1-80);MTT法分析突变型K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞和周皮细胞的抑制作用。结果K5 Mut1以浓度依赖的方式抑制原代培养的视网膜内皮细胞,EC50(抑制50%细胞增生的药物浓度)约为35 nmol/L,是完整K5活性的2倍。在同样浓度范围内,K5 Mut1并不抑制同源的周皮细胞,表明K5 Mut1特异性抑制血管内皮细胞增生。结论K5 Mut1是一种比K5作用更强的血管增生抑制因子,在糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性和实体肿瘤等血管增生性疾病的治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 纤溶酶原缺失 血管内皮细胞增生 纤溶酶原蛋白水解片段 血管增生性疾病 突变型Kringle5

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纤溶酶原Kringle5的抑制血管增生作用 被引量：4

8

作者 蔡卫斌 刘倩平 高国全 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期159-162,共4页

纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域 ,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞 ,具有很强的抑制血管生成活性 ,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质... 纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域 ,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞 ,具有很强的抑制血管生成活性 ,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质稳定、毒副作用小、特异性高等优点 。 展开更多

关键词 纤溶酶原 KRINGLE5 血管增生 内皮细胞 细胞凋亡

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重组体pcDNA3.1(+)-tyr的构建及在小鼠NIH3T3细胞中的表达 被引量：2

9

作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 张海涛 李秀英 岳滔 李茜 马涧泉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期358-362,共5页

[目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质... [目的]克隆酪氨酸酶基因(tyr),构建pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并导入NIH3T3细胞表达。[方法]用RT-PCR法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆tyr全长cDNA片段,利用DNA重组技术将其定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)的T7启动子下游,并用脂质体法导入NIH3T3细胞,RT-PCR,酪氨酸酶活性测定及多巴染色法检测tyr的表达。[结果]成功克隆1.74kb的全长tyr cDNA片段,经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致,tyr准确克隆入pcDNA3.1(+)的多克隆位点,RT-PCR及酪氨酸酶活性测定等方法检测到转染了重组体的NIH3T3细胞中有tyr的表达。[结论]本实验成功构建了pcDNA3.1(+)-tyr真核表达重组体,并成功导入NIH3T3细胞中表达。 展开更多

关键词 黑色素瘤 酪氨酸酶基因 基因表达 pcDNA3.1(+)质粒 RT-PCR法

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色素上皮衍生因子PEDF全基因敲除诱导脂肪堆积的作用及机制 被引量：2

10

作者 杨艳芳 汪海平 +5 位作者 黄莉钧 张晟 高赛飞 李兴会 谭静 蔡卫斌 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期351-358,共8页

【目的】研究色素上皮衍生因子PEDF表达水平与脂代谢的关系,探讨PEDF参与血脂代谢的可能调控机制,为揭示PEDF参与多种代谢疾病提供重要依据。【方法】应用Crispr/Cas9基因修饰技术构建PEDF-/-小鼠,高脂饮食(HFD)诱导肥胖小鼠模型,检测... 【目的】研究色素上皮衍生因子PEDF表达水平与脂代谢的关系,探讨PEDF参与血脂代谢的可能调控机制,为揭示PEDF参与多种代谢疾病提供重要依据。【方法】应用Crispr/Cas9基因修饰技术构建PEDF-/-小鼠,高脂饮食(HFD)诱导肥胖小鼠模型,检测小鼠血脂水平(甘油三脂TG、总胆固醇TC、游离脂肪酸FFAs)的变化,实时定量RT-PCR检测脂肪组织中脂肪代谢关键基因(ATGL、PPAR-γ、FAS、HSL)的表达量。【结果】基因组水平鉴定和蛋白水平检测表明PEDF-/-小鼠构建成功;HFD诱导肥胖后,野生型(WT)小鼠体重增加百分比、内脏脂肪及血脂水平均比正常饮食组(CD)的高(P<0.05),差异均具有统计学意义,说明肥胖模型构建成功,而PEDF-/-组小鼠HFD后体重增加百比、内脏脂肪和血脂水平高于CD组(P<0.05),高于WT小鼠的HFD组(P<0.05);实时定量RT-PCR结果显示,WT小鼠HFD后ATGL、PPAR-γ和FAS转录水平都比CD组低(P<0.05),HSL m RNA水平无明显差别;而PEDF敲除后,ATGL、PPAR-γ和HSL转录水平较WT组的显著下调(P<0.01),而FAS水平CD组明显升高,HFD组显著下调;PEDF敲除后,HFD组ATGL m RNA水平高于CD组,PPAR-γ和HSL m RNA水平低于CD组。【结论】成功构建PEDF基因敲除小鼠;PEDF可能通过ATGL、PPAR-γ和HSL促进了脂肪分解,通过FAS抑制脂肪酸合成,从而参与了肥胖小鼠的血脂代谢及内脏脂肪沉积。 展开更多

关键词 基因敲除 PEDF 肥胖 脂肪代谢

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人纤溶酶原K5体内抑制Lewis肺癌肿瘤生长与转移 被引量：2

11

作者 蔡卫斌 程锐 +5 位作者 徐祖敏 杨霞 杨中汉 魏玲 杨军 高国全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期566-569,574,共5页

【目的】通过体内实验探讨人纤溶酶原Kringle 5(K5)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长与转移的抑制作用。【方法】采用腋下接种肿瘤细胞的方法建立Lewis肺癌细胞皮下种植瘤小鼠模型,分为PBS对照组和K5治疗组,观察各组肿瘤生长情况,测量肿瘤大小... 【目的】通过体内实验探讨人纤溶酶原Kringle 5(K5)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长与转移的抑制作用。【方法】采用腋下接种肿瘤细胞的方法建立Lewis肺癌细胞皮下种植瘤小鼠模型,分为PBS对照组和K5治疗组,观察各组肿瘤生长情况,测量肿瘤大小,制备小鼠体质量-时间曲线和肿瘤体积-时间曲线;采用皮下种植瘤剔除术建立Lewis肺癌自发性肺转移模型,术后分为PBS对照组和K5治疗组,观察各组小鼠肺组织转移瘤数量,取肺组织进行病理学分析。【结果】在皮下种植瘤模型中,与对照组相比,K5治疗组小鼠肿瘤体积-时间曲线变化平缓,肿块增长缓慢,肿瘤质量明显降低[分别为(4.57±0.79)g和(1.15±0.31)g,P=0.006];在Lewis肺癌转移瘤模型中,K5治疗组小鼠肺表面转移瘤结节数[分别为(15.75±9.79)个和(6.60±3.39)个,P=0.029]以及肺湿质量明显少于对照组,高倍镜下治疗组肺微转移灶数目亦较少。【结论】人纤溶酶原K5能显著抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长,并能明显抑制Lewis肺癌细胞转移。 展开更多

关键词 纤溶酶原K5 肺癌 肿瘤转移

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O_2·^-和H_2O_2表达上调对2型糖尿病患者血小板异常活化的影响 被引量：1

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作者 陈菲 罗创华 +5 位作者 卢汉平 周倜 杨中汉 杨霞 高国全 齐炜炜 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期56-62,共7页

【目的】探讨血小板O_2·^-和H_2O_2水平变化导致2型糖尿病患者血小板异常活化的分子机制。【方法】检测2型糖尿病患者和正常对照组的血小板4项临床参数;应用免疫荧光技术观察血小板形态结构的变化;应用流式细胞术测定两组血小板内... 【目的】探讨血小板O_2·^-和H_2O_2水平变化导致2型糖尿病患者血小板异常活化的分子机制。【方法】检测2型糖尿病患者和正常对照组的血小板4项临床参数;应用免疫荧光技术观察血小板形态结构的变化;应用流式细胞术测定两组血小板内线粒体O_2·^-、胞浆O_2·^-和H_2O_2水平;用NADH/PMS和H_2O_2分别处理正常对照组血小板,流式细胞术检测血小板的活化阳性百分率;应用Western Blot检测两组血小板内过氧化氢酶(Catalase)、超氧化物歧化酶2型(Mn-SOD)的表达差异。【结果】2型糖尿病组平均血小板体积(MPV)明显高于正常对照组(P<0.001),而血小板数量(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、血小板比积(PCT)差异均无统计学意义;免疫荧光显示2型糖尿病组血小板形态结构较正常对照组发生改变,流式细胞术检测血小板的线粒体O_2·^-、H_2O_2水平明显高于正常对照组(P<0.05),而胞浆O_2·^-水平差异无统计学意义。通过流式分析H_2O_2和NADH/PMS体系明显促进血小板的活化(P<0.01)。Western Blot结果显示2型糖尿病组血小板Catalase的表达下调,而Mn-SOD的表达及活性无差异。【结论】糖尿病血小板内Catalase表达下调可能是导致线粒体O_2·^-、H_2O_2水平升高的原因,从而调控糖尿病血小板的异常活化。 展开更多

关键词 2型糖尿病 血小板活化 平均血小板体积 O2·^- H2O2

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晕动病易感性SNP对肾上腺素α_(2A)受体基因表达调控的影响 被引量：1

13

作者 袁栎 付静宜 +5 位作者 刘建彬 于立身 王烨 曹颖 罗超权 刘丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1400-1403,共4页

目的 :研究人肾上腺素α2A受体基因 - 1 2 96位G/C多态性对DNA与蛋白质结合的影响。方法 :以重组质粒为模板 ,扩增 - 1 2 96位为G或C的 390bp片段 (- 1 4 1 4 - - 1 0 2 5)bp,分别与细胞核蛋白质结合 ,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,与... 目的 :研究人肾上腺素α2A受体基因 - 1 2 96位G/C多态性对DNA与蛋白质结合的影响。方法 :以重组质粒为模板 ,扩增 - 1 2 96位为G或C的 390bp片段 (- 1 4 1 4 - - 1 0 2 5)bp,分别与细胞核蛋白质结合 ,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,与地高辛 (Dig)标记的同源DNA片段杂交。另将Dig-dUTP标记的同一片段与经SDS -PAGE转印至膜上的细胞核蛋白质进行DNA -蛋白质结合反应 ,以抗Dig抗体检测结合反应信号。结果 :EMSA结果显示 ,- 1 2 96位为C的片段可与细胞核蛋白质结合 ,X光片上显示一条特异性结合带 ;为G时则无 ;人肾上腺素α2A受体基因 (- 1 4 1 4 - - 1 0 2 5)bp 390bpDNA片段与细胞核提取物杂交结果显示 ,在约 1 5kU位置可见一蛋白质条带。结论 :肾上腺素α2A受体基因 - 1 4 1 4 - - 1 0 2 5bp之间可能存在一转录因子结合位点 ,- 1 2 96位为C时 ,能与一特异性核蛋白结合 ,此蛋白质的相对分子量约为 1 5kU。 展开更多

关键词 晕动病 易感性 SNP 肾上腺素α2A受体 基因表达调控

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表达登革病毒prM基因小干扰RNA的Vero细胞系的建立 被引量：1

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作者 李磊 吴新伟 +3 位作者 伍业健 罗兰 蒋力云 杨霞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1073-1080,共8页

prM蛋白是登革病毒膜蛋白M的前体,膜蛋白M对病毒的组装与成熟有重要作用,针对prM基因设计的小干扰RNA(siRNA)可短期抑制登革病毒复制.为了达到长期抑制登革病毒的效果,本研究构建了插入prM siRNA序列的重组慢病毒,利用流式细胞术分选以... prM蛋白是登革病毒膜蛋白M的前体,膜蛋白M对病毒的组装与成熟有重要作用,针对prM基因设计的小干扰RNA(siRNA)可短期抑制登革病毒复制.为了达到长期抑制登革病毒的效果,本研究构建了插入prM siRNA序列的重组慢病毒,利用流式细胞术分选以及杀稻瘟霉素抗性,筛选出稳定表达prM siRNA的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)系.经逆转录PCR及测序验证siRNA序列表达正确.Vero细胞中prM siRNA的表达率约为97.6%.当受到登革病毒攻击时,表达prMsiRNA的Vero细胞能够明显抑制登革病毒prM基因的表达,并抑制登革病毒在Vero细胞中的复制.建立的Vero细胞系可用于RNA干扰防治登革病毒感染的进一步应用研究. 展开更多

关键词 慢病毒 登革病毒 膜蛋白M前体 RNA干扰 VERO细胞

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TNF-α诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡及其对小鼠B16细胞移植瘤生长的抑制作用 被引量：1

15

作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 王晓华 李秀英 李民友 冯哲玲 马涧泉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第22期1299-1301,共3页

目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率。... 目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率。动物实验观察TNF-α小量瘤体内注射对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用。结果:在1000、3000、5000及10000U/mLTNF-α作用下,B16细胞的凋亡指数均明显高于空白对照组(P<0.01),随着TNF-α浓度增加,B16凋亡细胞数呈增加趋势。动物实验结果显示,TNF-α治疗3周后,治疗组荷瘤小鼠MM移植瘤的体积和重量明显低于对照组(P<0.01)。结论:TNF-α能够诱导小鼠B16黑色素瘤细胞发生凋亡,且小剂量TNF-α瘤体内注射能显著抑制小鼠移植性MM的生长。 展开更多

关键词 TNF-Α 黑色素瘤细胞 细胞凋亡 恶性黑色素瘤

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尖吻蝮毒腺cDNA文库的构建、金属蛋白酶基因克隆和序列分析(英文) 被引量：1

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作者 刘清华 胡松年 +5 位作者 银巍 苏兴文 张晓伟 李晨吉 邱鹏新 颜光美 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期81-90,共10页

目的 构建非标准化尖吻蝮（五步蛇，Agkistrodon acutus）毒腺cDNA文库，随机挑取克隆测序，分析金属蛋白酶基因。方法 以Tnzd试剂提取新鲜尖吻蝮毒腺总RNA，以superscript Ⅱ反转录酶合成cDNA第一链并以DNA聚合酶Ⅰ连续合成第二链。双... 目的 构建非标准化尖吻蝮（五步蛇，Agkistrodon acutus）毒腺cDNA文库，随机挑取克隆测序，分析金属蛋白酶基因。方法 以Tnzd试剂提取新鲜尖吻蝮毒腺总RNA，以superscript Ⅱ反转录酶合成cDNA第一链并以DNA聚合酶Ⅰ连续合成第二链。双链DNA经过含EcoRⅠ酶切位点接头加接，末端磷酸化并以XhoⅠ内切酶酶切，按照〈0．25kb，0．25-0．5kb，0．5-1kb，1-2kb和〉2kb5个片段大小分别回收，随后与pBluescriptⅡSK（＋）载体相连转化E.coli DH10B，构建成尖吻蝮毒腺cDNA文库。随机挑取克隆5’端测序，共获得8696条高质量表达序列标签，经过序列拼接和聚类，这些序列在经过功能注释后最终被聚类成2855个基因聚类。其中，发现一个由74个克隆组成的基因聚类（Agkihagin）为新的金属蛋白酶基因。经反转录和巢式PCR扩增该基因并对其进行结构分析。结果 构建好的文库含有2．048×10^6个重组子，新的金属蛋白酶开框读码序列全长1827个核苷酸，编码608个氨基酸，属于PⅢ型金属蛋白酶。其Zn^2＋结合模序HEMGHNLGIDH和去整合素模序DECD在进化上高度保守。结论 该文库符合建库标准库容要求，为构建尖吻蝮毒腺基因表达谱和筛选新的目的基因提供了有效平台；克隆的金属蛋白酶基因与GenBank中其他蛇毒金属蛋白酶氨基酸序列同源性最高达87％，为研究蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系奠定了良好基础。 展开更多

关键词 基因文库 蝮蛇类 金属内肽酶类 序列分析

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野生型stathmin 1及其C末端突变体的功能研究 被引量：1

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作者 张彦 熊建军 +2 位作者 王嘉励 杨光 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2022-2026,共5页

目的:研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin1生物功能的影响。方法:构建stathmin1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究... 目的:研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin1生物功能的影响。方法:构建stathmin1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型stathmin1对于黑色素细胞生长以及细胞特异性功能的影响。结果:成功构建含有野生型stathmin1的克隆载体pAdTrack-stathmin1及其定点突变载体pAdTrack-stathmin 1-mut;MTT法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin 1都能有效抑制黑色素细胞生长、诱导细胞凋亡;分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin 1的转染而受到明显影响。结论:Stathmin 1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义,高表达可以抑制细胞生长以及细胞特异性功能,C末端模序结构的破坏并不能影响stathmin 1的生物学功能。 展开更多

关键词 STATHMIN 1 定点突变 黑素细胞

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人颗粒酶B真核表达载体的构建与表达分析 被引量：1

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作者 李秀英 夏良平 +6 位作者 谢金卫 赵肃清 曾宗渊 张海涛 吉琼梅 李民友 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2253-2256,共4页

目的构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB。方法用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点。脂质体介导... 目的构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB。方法用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点。脂质体介导转染Hep2细胞,用间接免疫荧光法观察目的蛋白在细胞中的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pVAX1的多克隆位点,未改变读码框架。转染Hep2细胞后,检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了VAX1-GrB,并在Hep2细胞中得到表达。 展开更多

关键词 颗粒酶B 淋巴细胞 Hep2细胞

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反义核酸抑制B16黑色素瘤细胞tyr基因的表达

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作者 吉琼梅 朱振宇 +4 位作者 王晓华 张东方 张海涛 李秀英 马涧泉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1321-1325,共5页

目的:用反义核酸技术抑制小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因(tyr)的表达。方法:构建tyr反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr,用脂质体法导入B16细胞,用酪氨酸酶活性及黑色素含量测定,多巴染色及透射电镜等检测由反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr转录产生... 目的:用反义核酸技术抑制小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因(tyr)的表达。方法:构建tyr反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr,用脂质体法导入B16细胞,用酪氨酸酶活性及黑色素含量测定,多巴染色及透射电镜等检测由反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr转录产生的tyr反义核酸对B16细胞tyr表达的抑制情况。结果:成功构建了反义重组体pcDNA3.1(-)-tyr,转染了反义重组体的B16细胞其酪氨酸酶活性为0.0498±0.0036,显著低于对未转染组B16细胞的0.0916±0.0132(P<0.01);转染空质粒pcDNA3.1(-)及真核表达重组体pcDNA3.1(+)-tyr组B16细胞的氨酸酶活性分别为0.1015±0.0166和0.0948±0.0096,两者同对照组相比均无显著差异(P>0.05)。多巴染色及电镜观察结果表明转染了反义重组体的B16细胞其黑色素颗粒的含量明显低于对照组。结论:反义核酸可以显著抑制B16黑色素瘤细胞tyr的表达。 展开更多

关键词 核苷酸 反义 黑色素瘤 一元酚单元酶 基因 tyr

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筛选大鼠心脏离心训练相关差异表达基因

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作者 梁雪清 罗超权 +4 位作者 刘丽 刘建斌 于立身 王烨 曹颖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1360-1364,共5页

目的 :本研究分析离心训练对大鼠心脏基因表达的影响 ,并探讨离心训练提高机体 +Gz耐力的分子机制。方法 :应用抑制性消减杂交 (SSH)和斑点杂交技术 ,筛选离心训练 1 2d后测试高耐力组 (耐受 +1 6Gz)与未训练对照组大鼠心脏的差异表达... 目的 :本研究分析离心训练对大鼠心脏基因表达的影响 ,并探讨离心训练提高机体 +Gz耐力的分子机制。方法 :应用抑制性消减杂交 (SSH)和斑点杂交技术 ,筛选离心训练 1 2d后测试高耐力组 (耐受 +1 6Gz)与未训练对照组大鼠心脏的差异表达基因。以获得的序列表达标签 (EST)为探针 ,分别与离心训练各组以及高耐力 (n =4)和低耐力大鼠 (耐受 +1 2Gz,n =4)的心脏RNA进行狭线杂交 ,将获得的阳性EST测序 ,并进行同源性比较。结果 :获得 3个未知下调EST ,它们的表达量均在训练过程中逐渐下降。结论 :离心训练可明显影响大鼠心脏某些基因的表达水平 ,这些基因表达水平的变化很可能与离心训练提高机体 展开更多

关键词 离心训练 抑制性消减杂交 基因差异表达 耐力 心脏 大鼠

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