目的:探讨生长分化因子11(GDF11)在体外诱导扩增具有干细胞特性的记忆性T细胞(memory stem T cells,Tscm)中的作用,从而进一步提高免疫过继治疗的疗效。方法:通过密度梯度离心的方法分离健康人的外周血单个核细胞,然后用磁珠分选获得CD8...目的:探讨生长分化因子11(GDF11)在体外诱导扩增具有干细胞特性的记忆性T细胞(memory stem T cells,Tscm)中的作用,从而进一步提高免疫过继治疗的疗效。方法:通过密度梯度离心的方法分离健康人的外周血单个核细胞,然后用磁珠分选获得CD8^+T细胞;随后将所得的细胞分为实验组和对照组,实验组中加入等体积、不同浓度的GDF11,对照组中加入等体积的PBS缓冲液,最后分别在不同时点通过流式细胞术检测2组细胞中Tscm的扩增情况。结果:在CD8^+T细胞的体外扩增实验中,GDF11可以显著扩增CD8^+T细胞;在CD8^+T细胞的体外培养实验中,GDF11可以显著提高Tscm在CD8^+T细胞中的比例。结论:GDF11可以有效地在体外扩增CD8^+Tscm,为提高免疫过继治疗的效率提供了新的方法。展开更多
RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和...RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linkingand tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础.展开更多
基金Introduction of Innovative R&D Team Program of Guangdong Province(2009010058 to CP)Chinese Ministry of Science&Technology,Hong Kong,Macao,Taiwan Collaborative Program(201200007673 to SJ)
文摘目的:探讨生长分化因子11(GDF11)在体外诱导扩增具有干细胞特性的记忆性T细胞(memory stem T cells,Tscm)中的作用,从而进一步提高免疫过继治疗的疗效。方法:通过密度梯度离心的方法分离健康人的外周血单个核细胞,然后用磁珠分选获得CD8^+T细胞;随后将所得的细胞分为实验组和对照组,实验组中加入等体积、不同浓度的GDF11,对照组中加入等体积的PBS缓冲液,最后分别在不同时点通过流式细胞术检测2组细胞中Tscm的扩增情况。结果:在CD8^+T细胞的体外扩增实验中,GDF11可以显著扩增CD8^+T细胞;在CD8^+T细胞的体外培养实验中,GDF11可以显著提高Tscm在CD8^+T细胞中的比例。结论:GDF11可以有效地在体外扩增CD8^+Tscm,为提高免疫过继治疗的效率提供了新的方法。
文摘RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linkingand tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础.
