纤维素酶E_5基因在E.coli中的克隆与表达 被引量：15

1

作者 沈雪亮 夏黎明 刘景晶 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期640-644,共5页

将含纤维素酶 E5基因的质粒 p D5 4 1用 Nco I和 Eco R I双酶切后 ,经电泳分离获取含 E5基因的小片段 ,将该片段定向插入表达质粒 p SE4 2 0的多克隆位点上 ,进一步将重组 DNA转入大肠杆菌宿主 .采用刚果红染色法检测出选择性平板上的... 将含纤维素酶 E5基因的质粒 p D5 4 1用 Nco I和 Eco R I双酶切后 ,经电泳分离获取含 E5基因的小片段 ,将该片段定向插入表达质粒 p SE4 2 0的多克隆位点上 ,进一步将重组 DNA转入大肠杆菌宿主 .采用刚果红染色法检测出选择性平板上的转化子具有羧甲基纤维素酶 (CMCase)活性 .摇瓶产酶试验进一步表明 ,基因重组后的大肠杆菌能高效表达 E5基因并将产物分泌出胞外 ,培养液中可检测到的CMCase活力达 31.6 U/ m L .该研究结果为进一步构建高效纤维素分解菌株打下了良好的基础 ,具有重要的学术意义和实际应用价值 . 展开更多

关键词 纤维素酶 E5基因 重组 表达 胞外分泌

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型融合基因hIFNα1-CB在大肠杆菌中表达 被引量：3

2

作者 邱定红 毛晓华 +3 位作者 高向东 李新荣 林碧蓉 徐蘅 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期521-525,共5页

目的　构建人干扰素 α1和抗菌肽 B的融合蛋白表达质粒 p HC,并初步研究融合蛋白的抗病毒活性。方法　重组质粒 p HC转化 E.coli JM83 ,温控诱导表达 ,SDS- PAGE制备蛋白质 ,病变抑制法测定其抗病毒比活性。结果　得到分子量约为 2 1ku... 目的　构建人干扰素 α1和抗菌肽 B的融合蛋白表达质粒 p HC,并初步研究融合蛋白的抗病毒活性。方法　重组质粒 p HC转化 E.coli JM83 ,温控诱导表达 ,SDS- PAGE制备蛋白质 ,病变抑制法测定其抗病毒比活性。结果　得到分子量约为 2 1ku的目的蛋白 ,抗病毒比活性为 2 .62× 10 6 IU/ m g。结论　成功构建了融合蛋白表达质粒 p HC,重组蛋白的构象及 C-端的 展开更多

关键词 大肠杆菌 表达 基因重组 人干扰素 抗菌肽B 抗病毒活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组人血管内皮生长因子165在Pichia酵母中的表达 被引量：2

3

作者 刘煜 吴国祥 +4 位作者 赵建阳 颜天华 奚涛 沈子龙 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期577-581,共5页

目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。... 目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。结论 :在Pichia酵母中成功表达人VEGF1 65。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子165 巴氏毕赤酵母 pPIC9K酵母表达载体 SDS-PAGE WESTERN-BLOT

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用转基因动物乳腺生物反应器生产溶栓药物的研究进展 被引量：2

4

作者 徐寒梅 成国祥 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期474-477,共4页

目前 ,溶栓试剂主要有七大类 ,其中 ,纤溶酶原激活剂 ( PA)及其突变体是急性心肌梗塞的常规用药 ,但是由于来源有限 ,价格昂贵 ,远远不能满足临床需要。利用转基因动物乳腺作为生物反应器来生产溶栓药物能够降低成本 ,是一种高效率的表... 目前 ,溶栓试剂主要有七大类 ,其中 ,纤溶酶原激活剂 ( PA)及其突变体是急性心肌梗塞的常规用药 ,但是由于来源有限 ,价格昂贵 ,远远不能满足临床需要。利用转基因动物乳腺作为生物反应器来生产溶栓药物能够降低成本 ,是一种高效率的表达系统 .转基因动物乳腺生物反应器是将目的基因构建于乳腺表达载体 ,通过显微注射等方法注入动物的受精卵中 ,使目的基因整合到动物的染色体中 ,最终在动物乳汁中获得目的蛋白的一种制药方法。到目前为止 ,转基因组织型纤溶酶原激活剂 ( t PA) ,尿激酶型纤溶酶原激活剂 ( u PA) ,长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)的转基因小鼠 ,及长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)的转基因羊都已产生 ,并且在从转基因羊乳汁中纯化长效组织型纤溶酶原激活剂 ( LAt PA)蛋白方面也取得了突破性的进展。可以预测 ,利用转基因动物乳腺生物反应器生产溶栓药物将会有广阔的前景。 展开更多

关键词 溶栓试剂 纤溶酶原激活剂 转基因动物 乳腺生物反应器 溶栓药物

在线阅读 下载PDF 职称材料

人肽脱甲酰基酶基因真核表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

5

作者 何睿 黄恺飞 +2 位作者 罗学刚 邢莹莹 奚涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期575-579,共5页

目的:构建人肽脱甲酰基酶(HsPDF)基因的真核表达载体并转染NIH3T3细胞,研究HsPDF基因在真核细胞中的表达及功能。方法:通过RT-PCR从人宫颈癌细胞系HeLa中扩增获得HsPDF基因,克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),利用阳离子脂质体转染NIH3T3细... 目的:构建人肽脱甲酰基酶(HsPDF)基因的真核表达载体并转染NIH3T3细胞,研究HsPDF基因在真核细胞中的表达及功能。方法:通过RT-PCR从人宫颈癌细胞系HeLa中扩增获得HsPDF基因,克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选建立稳定表达细胞系;RT-PCR检测转染后HsPDF基因的mRNA转录水平;MTT法测定转染后细胞增殖能力的变化;苏木精-伊红(HE)染色观察HsPDF对NIH3T3细胞形态的影响。结果:成功构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-HsPDF。该载体被转染入NIH3T3细胞后,外源HsPDF基因获得了有效的转录与稳定表达。HsPDF显著促进NIH3T3细胞的增殖,并使细胞呈现出一定的恶变特征。结论:HsPDF基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达并表现出明显的生物学功能,为深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人肽脱甲酰基酶 载体 构建 NIH3T3细胞 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

生物序列集成式分析平台的研制及其应用

6

作者 郑珩 王非 +2 位作者 吴梧桐 杨欣 张玉彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第5期33-37,共5页

应用生物信息学基础理论 ,以信息技术为手段 ,开发了方便高效的生物序列分析平台。该系统可进行核酸及蛋白质序列统计、性质分析、PCR引物设计、联配及同源性分析等。使用该系统设计PCR引物 ,克隆了灰葡萄孢霉菌 3-羟 - 3-甲基戊二酰辅... 应用生物信息学基础理论 ,以信息技术为手段 ,开发了方便高效的生物序列分析平台。该系统可进行核酸及蛋白质序列统计、性质分析、PCR引物设计、联配及同源性分析等。使用该系统设计PCR引物 ,克隆了灰葡萄孢霉菌 3-羟 - 3-甲基戊二酰辅酶A还原酶序列片段 ,并进行同源性分析 ,表明该系统操作简便、分析结果可靠。 展开更多

关键词 生物序列集成式分析平台 研制 应用 生物信息学 同源性分析 联配 引物设计

在线阅读 下载PDF 职称材料

发酵液中小组分环孢菌素D的HPLC测定法

7

作者 李国亮 苏旭霞 +2 位作者 王鲁燕 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期661-663,共3页

建立了一种采用高效液相测定发酵液中小组分环孢菌素D含量的方法。发酵液经甲醇提取 ,浓缩至干 ,乙醚转移 ,蒸干 ,甲醇定容 ,正已烷脱脂后进样。色谱条件为YWG C1 8柱 (5μm ,4 6mm× 2 50mm) ;乙腈—水 (78∶2 2 ,v/v)为流动相 ;... 建立了一种采用高效液相测定发酵液中小组分环孢菌素D含量的方法。发酵液经甲醇提取 ,浓缩至干 ,乙醚转移 ,蒸干 ,甲醇定容 ,正已烷脱脂后进样。色谱条件为YWG C1 8柱 (5μm ,4 6mm× 2 50mm) ;乙腈—水 (78∶2 2 ,v/v)为流动相 ;流速 1 0ml/min ;检测波长 2 2 0nm ,柱温 70℃。该方法的精密度、线性关系和回收率均良好 ,且操作方便 ,比较成功地解决了在杂质较多和含量较低情况下环孢菌素D的测定。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 环孢菌素D 发酵液 测定

在线阅读 下载PDF 职称材料

SOPC的合成及其在色氨酸酶活力测定中的应用

8

作者 韦平和 吴梧桐 +1 位作者 常江 余方兵 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第4期65-68,共4页

以邻硝基苯胺为起始原料，经邻硝基苯胺的重氮化、Ｌ－半胱氨酸与邻硝基苯重氮盐的取代反应等步骤制备ＳＯＰＣ，通过活性炭吸附、氨水洗脱和硅胶柱层析纯化，所得产品在熔点、晶形、紫外和红外吸收等方面与文献报道相一致．将合成的Ｓ... 以邻硝基苯胺为起始原料，经邻硝基苯胺的重氮化、Ｌ－半胱氨酸与邻硝基苯重氮盐的取代反应等步骤制备ＳＯＰＣ，通过活性炭吸附、氨水洗脱和硅胶柱层析纯化，所得产品在熔点、晶形、紫外和红外吸收等方面与文献报道相一致．将合成的ＳＯＰＣ应用于８ 株工程菌和１ 株宿主菌的色氨酸酶活力测定，结果表明工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高，其中ＷＷ－５３ 号比宿主菌高１５ 倍． 展开更多

关键词 SOPC 合成 色氨酸酶 测定 酶活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用 被引量：88

9

作者 叶龙彬 奚涛 +1 位作者 陈峰 王瑜 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期267-270,共4页

目的 :观察丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,以水溶性的丹参酮ⅡA纳米制剂灌胃给药 ,观测其对脑缺血大鼠的神经行为、脑梗塞范围和脑含水量以及脑组织SOD活力、MDA... 目的 :观察丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,以水溶性的丹参酮ⅡA纳米制剂灌胃给药 ,观测其对脑缺血大鼠的神经行为、脑梗塞范围和脑含水量以及脑组织SOD活力、MDA含量和NO水平的影响。结果 :丹参酮ⅡA(2 5mg/kg)能使脑缺血大鼠的神经行为明显改善 ,脑梗塞范围和脑含水量显著降低 ;丹参酮ⅡA亦能拮抗脑缺血再灌注引起的SOD活力的下降及MDA含量的升高 ,并使脑组织NO水平显著下降。结论 :丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA 纳米制剂 局灶性脑缺血 自由基 一氧化氮

在线阅读 下载PDF 职称材料

植物病原真菌灰葡萄孢A_(23)产生脱落酸的研究 被引量：13

10

作者 吴江 郑珩 +2 位作者 王鲁燕 顾觉奋 蔡勤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期313-316,共4页

从南京蔬菜研究所植物病株上分离到一株真菌，经过鉴定为灰葡萄孢（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）突变株，命名为Ａ２３。该菌在ＰＤＡ培养基上发酵培养，通过分离纯化，得到脱落酸（ＡＢＡ）结晶。通过在５种溶媒系统进行薄层层析... 从南京蔬菜研究所植物病株上分离到一株真菌，经过鉴定为灰葡萄孢（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）突变株，命名为Ａ２３。该菌在ＰＤＡ培养基上发酵培养，通过分离纯化，得到脱落酸（ＡＢＡ）结晶。通过在５种溶媒系统进行薄层层析，并经过特异性显色反应鉴定，该结晶为脱落酸。通过优化发酵条件，找到最适培养温度２８℃，并对Ａ２３菌进行各种波长光照培养试验，使ＡＢＡ产量大幅度提高，其产率达到３．９２ｍｇ／１００ｇＰＤＡ。 展开更多

关键词 灰葡萄孢 脱落酸 发酵 植物 病原真菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

聚乙二醇修饰干扰素α2b的体内药代动力学研究 被引量：14

11

作者 姚文兵 林碧蓉 +1 位作者 沈子龙 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期457-461,共5页

目的 :运用同位素示踪法 -1 2 5I标记和 SDS-PAGE研究聚乙二醇修饰干扰素 α2 b的药代动力学。方法 :以大鼠为研究对象 ,分别按 1 ,3,5μg/ kg的剂量股静脉注射给药 ,颈动脉采血。利用 SDS-PAGE测定血液中原形药物放射量与总放射量的百... 目的 :运用同位素示踪法 -1 2 5I标记和 SDS-PAGE研究聚乙二醇修饰干扰素 α2 b的药代动力学。方法 :以大鼠为研究对象 ,分别按 1 ,3,5μg/ kg的剂量股静脉注射给药 ,颈动脉采血。利用 SDS-PAGE测定血液中原形药物放射量与总放射量的百分比 ,以校正全血血药浓度。用小鼠测定1 2 5I-干扰素 α2 b和 1 2 5I-单修饰干扰素α2 b的组织分布和尿粪排泄 ,用大鼠测定其胆汁排泄。结果 :1 2 5I-干扰 α2 b和 1 2 5I-单修饰干扰素 α2 b静脉注射给药符合一级消除动力学的二房室模型。按低 ,中 ,高三个剂量组 ,1 2 5I-干扰素α2 b的消除半衰期 ( t1 / 2 β)分别为 1 .0 2 0 ,0 .91 4 ,0 .6 6 5 h,1 2 5I-单修饰干扰素α2 b的消除半衰期 ( t1 / 2 β)分别为 2 .72 ,3.1 7,2 .6 9h,1 2 5I-单修饰干扰素α2 b在肾中的分布明显减少 ,在肝中的分布明显增加。结论 :聚乙二醇修饰能够显著延长干扰素 α2 b的体内半衰期。 展开更多

关键词 干扰素Α2B 聚乙二醇修饰干扰素α2b 药代动力学 组织分布

在线阅读 下载PDF 职称材料

高纯度茄尼醇的现状与市场前景 被引量：20

12

作者 王非 郑珩 +1 位作者 余永柱 杨欣 《现代化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第8期63-64,66,共3页

高纯度的茄尼醇是生产辅酶Q10的关键原料。2004年国外辅酶Q10总产量约为900t,直接需要消耗高纯度茄尼醇近2000t,日本、美国、德国、韩国是高纯度茄尼醇需求量最大的4个国家。我国用于辅酶Q10和其他用途的高纯度茄尼醇年需求量近4000t,... 高纯度的茄尼醇是生产辅酶Q10的关键原料。2004年国外辅酶Q10总产量约为900t,直接需要消耗高纯度茄尼醇近2000t,日本、美国、德国、韩国是高纯度茄尼醇需求量最大的4个国家。我国用于辅酶Q10和其他用途的高纯度茄尼醇年需求量近4000t,由于国际上高纯茄尼醇的生产技术被日本等国垄断,我国高纯茄尼醇几乎全部依赖进口。我国具有生产高纯度茄尼醇的资源优势,如能解决技术难题,生产高纯度茄尼醇则是一项具有一定市场潜力的项目。 展开更多

关键词 茄尼醇 辅酶Q10 生产 市场

在线阅读 下载PDF 职称材料

聚乙二醇对干扰素α-2b的初步化学修饰研究 被引量：14

13

作者 田浤 姚文兵 +1 位作者 吴梧桐 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期74-77,共4页

以几种不同方法活化的聚乙二醇 5 0 0 0对干扰素进行化学修饰 ,并对修饰条件、修饰后干扰素生物活性进行了初步比较。相同反应条件下 ,单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (SC mPEG)的选择性较单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯 (SS mP... 以几种不同方法活化的聚乙二醇 5 0 0 0对干扰素进行化学修饰 ,并对修饰条件、修饰后干扰素生物活性进行了初步比较。相同反应条件下 ,单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (SC mPEG)的选择性较单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯 (SS mPEG)高 ,聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (BSC PEG)由于有两个活性基团 ,选择性与SS mPEG相近。以聚乙二醇活化的修饰剂会使干扰素分子见形成交联 ,修饰后生物活性损失较大 ,而单甲氧基聚乙二醇活化的修饰剂修饰干扰素 ,修饰率保持在 30 展开更多

关键词 聚乙二醇 干扰素 rhuIFNα-2b

在线阅读 下载PDF 职称材料

脱落酸产生菌液体发酵培养基的优化 被引量：7

14

作者 郑珩 盛海林 +2 位作者 吴江 赵辉 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期460-462,共3页

应用 Plackett- Burman设计和球面对称设计实验 ,对脱落酸产生菌液体培养条件进行优化 ,确定最佳培养基组成 ,其摇瓶产量可达 14 5.9μg/ml,比优化前产量提高 60

关键词 球面对称设计 脱 酸 液体发酵 培养基 P-B设计

在线阅读 下载PDF 职称材料

鲨肝活性肽的免疫调节和抗细胞凋亡作用 被引量：8

15

作者 吕正兵 李谦 +2 位作者 郭昱 叶波平 吴梧桐 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期433-438,共6页

目的　为了选择鲨肝活性肽 (SHAP)临床应用的适应症并了解其作用机制。方法　分离培养人外周血单核细胞 (PBMC) ,检测SHAP对其分泌IFN α和IFN γ的影响 ;用环磷酰胺 (Cy)建立免疫低下模型 ,检测SHAP对免疫低下小鼠血清溶血素的生成及血... 目的　为了选择鲨肝活性肽 (SHAP)临床应用的适应症并了解其作用机制。方法　分离培养人外周血单核细胞 (PBMC) ,检测SHAP对其分泌IFN α和IFN γ的影响 ;用环磷酰胺 (Cy)建立免疫低下模型 ,检测SHAP对免疫低下小鼠血清溶血素的生成及血清IL 2水平的影响 ;用流式细胞仪分析SHAP对对乙酰氨基酚 (AAP)诱导小鼠肝损伤模型中细胞凋亡的影响 :用Fas单克隆抗体诱导小鼠暴发性肝炎和抑制肝癌细胞株SMMC772 1的增殖 ,用SHAP处理后 ,分析小鼠血清谷丙转氨酶 (GPT)的水平及SMMC772 1增殖的变化情况。结果　SHAP能够有效诱导PBMC分泌IFN α和IFN γ ,促进免疫低下小鼠血清溶血素的生成和提高血清IL 2的水平 ,显著降低AAP诱导的肝细胞凋亡。 5 0mg·L- 1的SHAP可消除 5mg·L- 1Fas单克隆抗体对SMMC772 1增殖的抑制作用。 3mg·kg- 1的SHAP能显著降低Fas单克隆抗体诱导的暴发性肝炎小鼠的血清GPT水平。结论　SHAP具有免疫调节作用和抗细胞凋亡的作用 ,可能是SHAP防治肝炎的作用机制之一。 展开更多

关键词 鲨肝活性肽 免疫活性 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

硫氧还蛋白-(His)_ 6 融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测(英文) 被引量：5

16

作者 张新元 廖建民 +1 位作者 孙石静 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期374-378,共5页

目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表... 目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表达。采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后 ,使用Ni2 + 亲和层析柱 ,对包涵体复性液进行初步纯化。采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定。结果 :得到分子量约为 5 6kDa的融合蛋白 ,表达量达到总蛋白的 30 %以上。比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约 5 0 %。经过一步Ni2 + 亲和层析 ,融合蛋白纯度达到80 %以上。体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性。结论 :与非融合表达相比 ,融合表达的表达量明显提高。即使N端额外融合一段融合多肽 ,rPA仍然具有生物学活性。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白 (组氨酸)6标签 瑞替普酶 融合蛋白 表达 纯化 活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组乳酸乳球菌X-脯氨酰二-肽酰基-氨基肽酶的纯化及动力学特性(英文) 被引量：4

17

作者 唐松山 吴洁 +3 位作者 谢燕飞 明欣 胡卓逸 刘景晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期144-150,共7页

重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰 二肽酰基 氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ... 重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰 二肽酰基 氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ,纯化倍数为 14.37倍和总活性收率为5 5 .5 6% .通过SDS PAGE和凝胶柱层析法 ,测得该二肽酶有单肽链组成 ,分子量 89KD .在该酶的动力学研究中 ,针对特异性底物L 甘氨酰 L 脯氨酰 对 硝基苯胺 ,求得该酶的米氏方程式 1 V =0 0 4 8 [S]+ 0 2 5 66(r =0 994 ) .它的Km 值为 0 1871mmol L ,最大反应速度Vmax为 3 897μmol·L-1·min-1.该酶可被苯甲酰基磺酰氟 ,胰蛋白酶抑制剂和Mn2 +,Ba2 +,Cu2 +andZn2 +等金属离子抑制 ,但可被Mg2 +激活 .进一步试验显示 ,当Cu2 +和Zn2 +浓度增加到 3 72 6mmol L ,抑制作用明显增强 .低浓度的EDTA Na2 (≤ 0 62 12mmol L)不影响酶的活性 .因此 ,该X 脯氨酰 二肽酰基 展开更多

关键词 X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶 金属离子非依赖性 丝氨酸蛋白酶 动力学特性 纯化 重组乳酸乳球菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

极大螺旋藻多糖IPⅡA、IPⅡB的理化特性及抗肿瘤活性研究 被引量：11

18

作者 吴洁 张成武 刘义峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期751-755,共5页

极大螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｍａｘｉｍａ）经碱性热水抽提，酶解和Ｓｅｖａｇ法结合脱蛋白，醇沉淀得胞内多糖ＩＰⅠ．ＩＰⅠ经ＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析得到组分多糖ＩＰⅡＡ和ＩＰⅡＢ，糖含量分别... 极大螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｍａｘｉｍａ）经碱性热水抽提，酶解和Ｓｅｖａｇ法结合脱蛋白，醇沉淀得胞内多糖ＩＰⅠ．ＩＰⅠ经ＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析得到组分多糖ＩＰⅡＡ和ＩＰⅡＢ，糖含量分别为７４．９％和６８．４％，ＩＰⅡＡ分子量为１．３×１０６，ＩＰⅡＢ分子量为５．０×１０５．以完全酸水解、薄层层析、气相层析、红外光谱、核磁共振氢谱对二者进行化学结构分析，证明均为酸性杂多糖；ＩＰⅡＡ糖苷键为α型，ＩＰⅡＢ中同时存在α和β型糖苷键．离体条件下，ＩＰⅠ与血癌细胞ＨＬ６０和Ｕ９３７分别共同培养，半固体琼脂培养法检测，结果表明，ＩＰⅠ对二者的作用具有选择性，同时ＩＰⅠ的促进和抑制作用均表现出一般药物所具有的剂量效应． 展开更多

关键词 极大螺旋藻 多糖 理化特性 抗肿瘤 活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

Toll样受体及其信号转导 被引量：14

19

作者 王梁华 司宇红 焦炳华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期304-308,共5页

Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表... Toll样受体 (TLR)介导着绝大部分哺乳动物、昆虫及植物的宿主防御 .TLR4与配体结合涉及膜抗原CD14和分泌蛋白MD 2的调节并一起形成受体复合物 ,然后与接头分子MyD88结合 ,使IRAK磷酸化 ,再使TRAF6寡聚化 ,随后激活控制着各种效应基因表达的转录因子NF κB . 展开更多

关键词 病原识别 TOLL样受体 信号转导

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组人干扰素α-2b工程菌的培养与发酵条件的优化研究 被引量：4

20

作者 姚文兵 许敏 +1 位作者 吴梧桐 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期462-465,共4页

用均匀设计法对重组人干扰素α-2b基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化，确定摇瓶培养基组成为：每升含蛋白胨10 g、葡萄糖6 g、酵母粉5 g、Na2HPO4　6　g、KH2PO4　2　g、NH4Cl　0.8　g、NaCl　4　g、CaCl2　0.01　g、MgSO4　0.2　g，... 用均匀设计法对重组人干扰素α-2b基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化，确定摇瓶培养基组成为：每升含蛋白胨10 g、葡萄糖6 g、酵母粉5 g、Na2HPO4　6　g、KH2PO4　2　g、NH4Cl　0.8　g、NaCl　4　g、CaCl2　0.01　g、MgSO4　0.2　g，发酵表达条件为：pH　6.9，温度37℃，IPTG诱导后表达时间为5　h左右，装料量为20%。三批小试结果为：湿菌体平均产率18　g/L，生物活性3.93×108　IU/L。发酵罐三批中试放大试验，湿菌体平均产率为29　g/L，生物活性为6.68×108　IU/L发酵液。 展开更多

关键词 重组人干扰素Α-2B 基因表达 发酵条件 Q784

在线阅读 下载PDF 职称材料