真核生物蛋白质翻译的内部起始机制 被引量：1

1

作者 李彤 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第6期494-498,共5页

蛋白质翻译过程中，翻译的起始步骤是非常重要的．真核生物的翻译起始主要是通过依赖帽子结构的扫描机制进行的．近几年在翻译的研究工作中发现，在一些动物病毒中，蛋白质合成通过一种不同于扫描机制的内部起始机制起始翻译．用内部起... 蛋白质翻译过程中，翻译的起始步骤是非常重要的．真核生物的翻译起始主要是通过依赖帽子结构的扫描机制进行的．近几年在翻译的研究工作中发现，在一些动物病毒中，蛋白质合成通过一种不同于扫描机制的内部起始机制起始翻译．用内部起始机制翻译的ｍＲＮＡ的５′端非翻译区有一个相对保守的结构，它在内部起始过程中具有重要作用，一些特异的蛋白质因子能够促进在特定位点起始翻译． 展开更多

关键词 蛋白 真核生物 翻译 内部起始机制

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类胰岛素生长因子-Ⅰ和胰岛素表现其功能的结构和分子基础 被引量：12

2

作者 王萍 冯佑民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第6期525-528,共4页

综述了近年来关于ＩＧＦⅠ和胰岛素表现生理功能的结构基础和分子基础研究进展．ＩＧＦⅠ和胰岛素是胰岛素家族中的２ 个重要成员， 两者的分子结构高度同源， 两者的受体相似且属同一家族， 两者的生理功能可彼此交叉， 但各自具... 综述了近年来关于ＩＧＦⅠ和胰岛素表现生理功能的结构基础和分子基础研究进展．ＩＧＦⅠ和胰岛素是胰岛素家族中的２ 个重要成员， 两者的分子结构高度同源， 两者的受体相似且属同一家族， 两者的生理功能可彼此交叉， 但各自具有主要的生理功能．ＩＧＦⅠ的主要生理功能是促进细胞生长， 胰岛素的主要生理功能是促进葡萄糖的摄取和代谢． 生物大分子的功能及其表现的基础是分子结构及参与功能表现的诸多分子， 如受体、信号分子等等． 展开更多

关键词 胰岛素 受体 信号分子 信号转导 IGF-Ⅰ 生理功

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大肠杆菌tRNA^(Leu)的提取、纯化及性质研究 被引量：2

3

作者 涂华民 孟建新 +3 位作者 杨燕生 李勇 刘文 王恩多 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期697-703,共7页

采用高表达大肠杆菌ｔＲＮＡＬｅｕ菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸ｔＲＮＡＬｅｕ１和ｔＲＮＡＬｅｕ２．利用稳态动力学手段研究了ｔＲＮＡＬｅｕ１及脱镁ｔＲＮＡＬｅｕ１在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰－ｔＲＮＡ合成... 采用高表达大肠杆菌ｔＲＮＡＬｅｕ菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸ｔＲＮＡＬｅｕ１和ｔＲＮＡＬｅｕ２．利用稳态动力学手段研究了ｔＲＮＡＬｅｕ１及脱镁ｔＲＮＡＬｅｕ１在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的氨酰化作用．ｔＲＮＡＬｅｕ１与亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响，表观Ｋｍ值有较明显的变化．结果表明，亮氨酰－ｔＲＮＡ合成酶催化的ｔＲＮＡＬｅｕ１氨酰化反应所需Ｍｇ２＋能够被稀土离子取代，但亲合性能不同． 展开更多

关键词 氨酰化反应 稀土离子 TRNA aaRS 大肠杆菌

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编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆 被引量：3

4

作者 刘建华 王德宝 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第4期488-491,共4页

用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC... 用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。 展开更多

关键词 DNA克隆 酵母 丙氨酸 TRNA

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毛细管电泳技术分析水稻中的总核糖核酸 被引量：5

5

作者 樊兴君 江舸 +1 位作者 金由辛 王德宝 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-169,共3页

通过高温干烤和焦碳酸二乙酯 (DEPC)两种技术除去核糖核酸 (RNA)酶 ,在保证RNA的稳定性的情况下 ,在1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )筛分介质中 ,利用无胶筛分毛细管电泳技... 通过高温干烤和焦碳酸二乙酯 (DEPC)两种技术除去核糖核酸 (RNA)酶 ,在保证RNA的稳定性的情况下 ,在1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )筛分介质中 ,利用无胶筛分毛细管电泳技术对水稻中的总RNA进行了分析 ,整个分析过程在 15min内完成。利用 5 .0 %T ,0 %C线性聚丙烯酰胺筛分介质 ,对水稻中的转移RNA(tRNA)进行了较为详细的分析 ,在 30min内可将tRNA分为两组共 9个峰。该方法可用于植物中RNA的分析 ,具有快速、准确的特点。 展开更多

关键词 毛细管电泳 水稻 总RNA 转移RNA 分析 生物化学

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绿色荧光蛋白 被引量：27

6

作者 刘默芳 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期238-243,共6页

来源于水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一 .其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时 (λmax=395nm ,小峰在 4 79nm )可高效发... 来源于水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一 .其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时 (λmax=395nm ,小峰在 4 79nm )可高效发射清晰可见的绿光 .GFP的高分辨率晶体结构为了解和研究蛋白质结构和光谱学功能关系提供了一个极好的机会 .GFP已成为一个监测在完整细胞和组织内基因表达和蛋白质定位的理想标记 .通过突变和蛋白质工程构建的GFP嵌合蛋白在生理指示剂、生物传感器。 展开更多

关键词 水母 绿色荧光蛋白 生色团 变种 报告分子

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毛细管电泳技术分析PDGF-B基因启动子与蛋白质的复合物 被引量：2

7

作者 樊兴君 刘静 +1 位作者 金由辛 王德宝 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期170-172,共3页

利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因... 利用 1.0 %T ,0 %C的线性聚丙烯酰胺 (即丙烯酰胺和双丙烯酰胺的总质量分数是 1.0 % ,交联度为 0 % )作为筛分介质 ,对人体血小板长生因子 (PDGF) B基因启动子与核蛋白形成的复合物进行了分析。结果显示主要有两种核蛋白与PDGF B基因启动子具有较强的结合能力 ,能形成DNA蛋白质复合物。所得结论与传统凝胶电泳相似。该方法具有较高的分离度和良好的重现性 ,整个分析可在 5 0min内完成。该方法不失为一种基于PDGF为研究目标、用于PDGF与蛋白质复合物形成及抑制行为分析的快速、准确的实用方法。 展开更多

关键词 毛细管电泳 DNA结合蛋白 PDGF-B基因启动子 核蛋白 复合物 分析

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钕和镧离子对tRNA圆二色谱的影响 被引量：1

8

作者 涂华民 李勇 +2 位作者 杨燕生 糜竞芳 王恩多 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期179-184,共6页

采用圆二色谱方法对钕和镧离子与转移核糖核酸间的相互作用进行了研究，结果显示在１．５～６μｍｏｌ／ＬＮｄ３＋或Ｌａ３＋离子存在下，ｔＲＮＡ分子ＣＤ谱２６０ｎｍ（＋）峰蓝移２～３ｎｍ，２６０ｎｍ（＋）峰值分别增加６％和２... 采用圆二色谱方法对钕和镧离子与转移核糖核酸间的相互作用进行了研究，结果显示在１．５～６μｍｏｌ／ＬＮｄ３＋或Ｌａ３＋离子存在下，ｔＲＮＡ分子ＣＤ谱２６０ｎｍ（＋）峰蓝移２～３ｎｍ，２６０ｎｍ（＋）峰值分别增加６％和２０％左右；２１０ｎｍ（－）峰在不同摩尔比Ｎｄ３＋／ｔＲＮＡ作用下，谱峰蓝移或红移，峰值增加或降低５０％左右。结果说明结合在ｔＲＮＡ分子上的Ｎｄ３＋或Ｌａ３＋可能引起ｔＲＮＡ分子构象的变化。Ｅｕ３＋对大肠杆菌ＬｅｕＲＳ或ｔＲＮＡＬｅｕ－ＬｅｕＲＳ复合物的ＣＤ谱具有一定的影响。 展开更多

关键词 镧离子 合成酶 钕离子 TRNA 圆二色谱

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枯草杆菌TrpRS的固定化及亲和RNA筛选 被引量：1

9

作者 陈莉 刘全胜 +1 位作者 金由辛 王德宝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期504-509,共6页

为研究 t RNATrp与色氨酰 - t RNA合成酶 ( Trp RS)的相互识别及其结构与功能的关系 ,纯化了枯草杆菌 Trp RS,并用溴化氰活化的 Sepharose4B将 Trp RS固定化 ,固定化 Trp RS的蛋白回收率为 95.5% ,活力回收率为 31 .3% .研究了固定化 Tr... 为研究 t RNATrp与色氨酰 - t RNA合成酶 ( Trp RS)的相互识别及其结构与功能的关系 ,纯化了枯草杆菌 Trp RS,并用溴化氰活化的 Sepharose4B将 Trp RS固定化 ,固定化 Trp RS的蛋白回收率为 95.5% ,活力回收率为 31 .3% .研究了固定化 Trp RS的酶学性质 ,其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相 Trp RS有了较大的提高 ,最适温度、最适 p H均有一定程度的增大 ,工作稳定性良好 .以固定化 Trp RS为亲和层析介质 ,对含有 2 0个核苷酸随机序列 ,长度为 56个核苷酸的单链RNA随机库进行了三轮筛选 .实验结果表明 ,固定化 Trp RS可以作为 SELEX亲和层析介质 ,进行模拟 t RNATrp分子的 RNA随机库的 SELEX筛选 . 展开更多

关键词 固定化酶 色素酰-tRNA合成酶 SELEX 亲和层析

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头孢菌素酰化酶 被引量：2

10

作者 李勇 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期238-242,共5页

氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二... 氨基头孢烷酸（７ａｍｉｎｏｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒａｎｉｃａｃｉｄ，７ＡＣＡ）是医药工业合成大多数头孢菌素的重要原料．头孢菌素酰化酶（ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎａｃｙｌａｓｅ，ＣＡ）催化头孢菌素Ｃ（ＣＰＣ）和戊二酰７氨基头孢烷酸（ＧＬ７ＡＣＡ）的水解反应，生成７ＡＣＡ．根据ＣＡ催化底物的不同，可将其划分为两类：ＣＰＣ酰化酶和ＧＬ７ＡＣＡ酰化酶．由ＣＡ的同源性、分子质量大小和基因结构，可以把头孢菌素酰化酶划分为五种；讨论了酶的基本性质．通过ＣＡ与Ｎ端亲核水解酶（Ｎｔｎ水解酶）的比较，推测ＣＡ属于Ｎｔｎ水解酶，并由此可以进一步理解它们的生理功能． 展开更多

关键词 头孢菌素 酰化酶 7-氨基头孢烷酸

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大肠杆菌JM83精氨酰－tRNA合成酶基因的克隆、测序及表达 被引量：3

11

作者 王恩多 陆身楠 王应睐 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期141-145,共5页

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ... 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）以大肠杆菌ＪＭ８３基因组ＤＮＡ为模板，扩增了精氨酰－ｔＲＮＡ合成酶（ＡｒｇＲＳ）基因。将该基因重组到载体ｐＵＣ１８上转化到大肠杆菌ＴＧ１中，得到在转化子中ＡｒｇＲＳ的高表达。粗抽液中ＡｒｇＲＳ的氨酰化活力，ＴＧ１和ＴＧ１转化子分别为１．６５Ｕ／ｍｇ和２１０Ｕ／ｍｇ，后者为前者的１２７倍。ＤＮＡ顺序测定表明，与从大肠杆菌ＪＡ２００中克隆到的ＡｒｇＲＳ基因相比９１３位碱基为Ａ而不为Ｃ，这种变化使ＡｒｇＲＳ的３０５位氨基酸残基由Ｇｌｎ变为Ｌｙｓ，但这种改变不影响酶的活力。 展开更多

关键词 精氨酰-tRNA 合成酶 基因克隆 序列 表达

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高血脂兔髂-股动脉成形术后平滑肌细胞中c-myc和cdc2基因的表达

12

作者 关战军 张传森 金由辛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期401-403,共3页

目的 :探讨 c- myc和 cdc2基因在高血脂兔髂 -股动脉成形术后平滑肌细胞中的表达。方法 :2 4只新西兰白兔均饲以高脂饲料 ,于高脂饲喂 2周时用球囊导管扩张髂 -股动脉 ,造成动脉内膜损伤 ,6～ 8周行血管造影检查 ,对狭窄 >5 0 %的动... 目的 :探讨 c- myc和 cdc2基因在高血脂兔髂 -股动脉成形术后平滑肌细胞中的表达。方法 :2 4只新西兰白兔均饲以高脂饲料 ,于高脂饲喂 2周时用球囊导管扩张髂 -股动脉 ,造成动脉内膜损伤 ,6～ 8周行血管造影检查 ,对狭窄 >5 0 %的动脉段行球囊扩张术 ,术后 2 4 h和 2周分别用 RT- PCR和免疫金银法检测 c- myc、cdc2 m RNA和相应蛋白质的表达。结果 :c- myc和 cdc2 m RNA在球囊扩张术后 2 4 h表达增加 ,其相应蛋白质在扩张术后 2周时表达增加 ,阳性颗粒主要位于新内膜层平滑肌细胞的胞核 ,少量位于胞质。结论 :动脉损伤后可致 c- myc、cdc2 m RNA和相应蛋白质表达增加 ,提示 c- myc和 展开更多

关键词 高血脂 髂-动脉成形术 平滑肌细胞 C-MYC CDC2 基因 表达

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利用酵母Two-hybrid系统筛选编码产物与p53相作用的人类基因

13

作者 陈洁 周锐 敖世洲 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期135-138,共4页

用酵母ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ系统在人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中寻找编码产物与ｐ５３相互作用的基因。在１．５×１０６个转化子中筛选到６８个初级阳性克隆。通过测定转化子第二轮β－半乳糖苷酶活力发现，人胚胎脑组织ｃＤＮ... 用酵母ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ系统在人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中寻找编码产物与ｐ５３相互作用的基因。在１．５×１０６个转化子中筛选到６８个初级阳性克隆。通过测定转化子第二轮β－半乳糖苷酶活力发现，人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中有一个阳性克隆中的ｃＤＮＡ编码产物与ｐ５３反应结果为明显阳性，说明两个蛋白之间存在较强的相互作用。用热测序法测得这段ｃＤＮＡ的序列通过查询基因数据库发现，这段ｃＤＮＡ编码人的泛肽交联酶，可认为是泛肽交联酶参与ｐ５３在细胞内浓度的调节。 展开更多

关键词 P53 酵母双杂交系统 泛肽交联酶 人类 基因

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胰岛素蛋白质工程：高活性［B10Asp］人胰岛素

14

作者 唐月华 刘卫东 +2 位作者 刘滨 徐明华 冯佑民 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第5期511-515,共5页

用基因定位突变方法将胰岛素Ｂ链第１０位的Ｈｉｓ变为Ａｓｐ，获得高活力胰岛素──［Ｂ１０Ａｓｐ］人胰岛素。其受体结合能力和离体生物活力分别为猪胰岛素的２６２％和２３５％；体内生物活力也明显高于猪胰岛素；它的促细胞生长能... 用基因定位突变方法将胰岛素Ｂ链第１０位的Ｈｉｓ变为Ａｓｐ，获得高活力胰岛素──［Ｂ１０Ａｓｐ］人胰岛素。其受体结合能力和离体生物活力分别为猪胰岛素的２６２％和２３５％；体内生物活力也明显高于猪胰岛素；它的促细胞生长能力为猪胰岛素的１７４％。 展开更多

关键词 胰岛素 蛋白质工程 高活力胰岛素

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人脑源性神经营养因子cDNA克隆及在酵母中的表达 被引量：2

15

作者 刘志敏 蓝正道 +3 位作者 谢志伟 王笑辛 戚正武 朱诚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期215-218,共4页

目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２... 目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２个ｃＤＮＡ片段分别插入到大肠－酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５０００左右。将这２种部分纯化的ＢＤＮＦ样品经鼠胚背根神经节生物活性分析，表明具有明显的促进细胞存活和突起生长的作用。 展开更多

关键词 人脑源性 神经营养因子 酵母 CDNA

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无排卵综合征大鼠肝脏、卵巢和肾上腺胰岛素受体的鉴定 被引量：3

16

作者 李桂玲 归绥琪 +1 位作者 唐月华 冯佑民 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第1期51-53,共3页

目的探讨高胰岛素高雄激素无排卵综合征的发病机制。方法采用放射配体结合分析法首次对雄激素致高胰岛素高雄激素无排卵大鼠（ＡＳＲ）肝脏、卵巢和肾上腺的的胰岛素受体作了鉴定，并与正常对照大鼠进行比较。结果ＡＳＲ肝脏、卵巢和肾... 目的探讨高胰岛素高雄激素无排卵综合征的发病机制。方法采用放射配体结合分析法首次对雄激素致高胰岛素高雄激素无排卵大鼠（ＡＳＲ）肝脏、卵巢和肾上腺的的胰岛素受体作了鉴定，并与正常对照大鼠进行比较。结果ＡＳＲ肝脏、卵巢和肾上腺胰岛素受体的数目及亲和力均与正常大鼠相似。结论ＡＳＲ不存在受体水平的胰岛素拮抗。 展开更多

关键词 大鼠 胰岛素受体 无排卵综合征 不育症

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RNA和蛋白质的相互作用 被引量：1

17

作者 张庆硕 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期121-121,共1页

ＲＮＡ与蛋白质的相互作用是许多基本的细胞生理过程得以实现的决定性因素．近年来，随着技术的改进和新方法的建立，ＲＮＡ和蛋白质的相互作用研究取得了长足进步．目前科研人员已经鉴定了许多ＲＮＡ上的蛋白质结合位点，也发现了许多... ＲＮＡ与蛋白质的相互作用是许多基本的细胞生理过程得以实现的决定性因素．近年来，随着技术的改进和新方法的建立，ＲＮＡ和蛋白质的相互作用研究取得了长足进步．目前科研人员已经鉴定了许多ＲＮＡ上的蛋白质结合位点，也发现了许多蛋白质中的ＲＮＡ结合结构域，并对它们的结构特征进行了比较详细的研究．这些都为最终探明ＲＮＡ和蛋白质相互作用的分子机制，从而从本质上认识相关的细胞生理过程打下了坚实的基础． 展开更多

关键词 识别 结构域 RNA结合蛋白 细胞生理

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人血管内皮生长因子165的克隆和在大肠杆菌中的表达 被引量：1

18

作者 张志兵 徐丰 +1 位作者 陈惠黎 金由辛 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第3期184-186,共3页

克隆和在大肠杆菌中表达人血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）。方法利用ＰＣＲ的方法从胎脑ｃＤＮＡ库扩增得到人ＶＥＧＦ１６５的全长ｃＤＮＡ并测定其核酸序列。利用基因重组技术构建ＶＥＧＦ１６５的原核表达载体，并在大肠... 克隆和在大肠杆菌中表达人血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）。方法利用ＰＣＲ的方法从胎脑ｃＤＮＡ库扩增得到人ＶＥＧＦ１６５的全长ｃＤＮＡ并测定其核酸序列。利用基因重组技术构建ＶＥＧＦ１６５的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果经测序表明，克隆的ＶＥＧＦ１６５与文献报道相符，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明经用ＩＰＴＧ诱导后，ＶＥＧＦ１６５在大肠杆菌中表达出。结论克隆和表达出ＶＥＧＦ１６５。 展开更多

关键词 血管内皮 生长因子 克隆 VEGF165 大肠杆菌

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切割HPV-6bE1和HPV-11E1通用核酶Rz 1282的体外活性鉴定 被引量：1

19

作者 刘德忠 黄扬中 +2 位作者 金由辛 杨光彩 徐钤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第6期782-787,共6页

利用计算机分析 HPV- 6b E1和 HPV- 1 1 E1 m RNA的同源序列 ,设计出通用于两者的锤头状核酶—— Rz1 2 82 (HPV- 6b基因 1 2 82位 ) ,通过体外转录建立了体外大量制备 Rz1 2 82的方法 .体外的切割实验表明 ,Rz1 2 82可在体外准确和有... 利用计算机分析 HPV- 6b E1和 HPV- 1 1 E1 m RNA的同源序列 ,设计出通用于两者的锤头状核酶—— Rz1 2 82 (HPV- 6b基因 1 2 82位 ) ,通过体外转录建立了体外大量制备 Rz1 2 82的方法 .体外的切割实验表明 ,Rz1 2 82可在体外准确和有效地切割 HPV- 6b/1 1 E1靶 RNA,形成 2 68nt/52nt和 2 31 nt/52 nt大小的切割产物 .对于 HPV- 6b,Km和 kcat值分别为 1 3.8nmol/L和 0 .0 7min-1;对于 HPV- 1 1 ,Km 和 kcat值分别为 2 3.0 nmol/L和 0 .2 4 min-1.结果表明 ,体外制备的 Rz1 2 82具有较好的特异催化切割活性 ,并通用于 HPV- 6b及 HPV- 1 1 .它有望发展成为在细胞内有效抑制HPV- 6b/1 1 DNA复制的核酸药物 . 展开更多

关键词 核酶 人乳头瘤病毒 体外转录 活性鉴定 尖锐湿疣

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快速蛋白质液相色谱法分离鉴定脱氧寡核苷酸片段

20

作者 唐惠炜 金由辛 朱德煦 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期438-440,共3页

由机器合成的反义核酸药物需要有效的纯度鉴定方法。用 Ｍ Ｏ Ｎ Ｏ Ｑ 柱在 ｐ Ｈ １２ 时以 Ｎａ Ｃｌ的浓度梯度洗脱，可将 １９ 至 ２１ Ｎｔｓ 的小片段寡核苷酸很好分开。

关键词 寡聚脱氧核苷酸 反义核酸药物 寡核苷酸 LC 测定

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