BALB/c和C_(57)BL/6小鼠在基因功能检测中行为学的比较研究 被引量：9

1

作者 金玫蕾 刘留 +5 位作者 郭宁 莫韫 谢青莲 李葆明 赵国屏 景乃禾 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第1期3-9,共7页

目的　探索BALB c和C57BL 6两个品系在有关实验中的不同作用。方法　选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成的神经系统表达的一些基因的反义核酸 (anti sense)中的 2个 ,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB c和C57BL 6... 目的　探索BALB c和C57BL 6两个品系在有关实验中的不同作用。方法　选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成的神经系统表达的一些基因的反义核酸 (anti sense)中的 2个 ,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB c和C57BL 6小鼠的侧脑室 ,并分别设注射生理盐水和随机序列核酸 (Scramble)的对照组。每一反义核酸实验组和对照组各注射 1 0只小鼠 ,之后观察实验组与对照组在不同行为学实验中的差异。小鼠的行为学检测模型为 :考察日常代谢能力的摄食量 ,考察Locomotionactivity(移动 )的旷场行为 ,考察疼痛阈值的甩尾试验和考察记忆能力的步下法实验。结果　注射No 1基因的反义核酸后 ,两品系的实验组均在测试记忆力的步下法 (Step -downTest)试验中表现出记忆力减弱 ,且与对照组差异明显 ,说明No 1基因的功能确与记忆相关。注射No 2基因的反义核酸后 ,在测试移动能力的旷场行为 (OpenFieldBehavior)试验中 ,BALB c实验组跨格、直立行为均比对照组明显减少 ,说明受此反义核酸影响显著 ,而C57BL 6实验组则与对照组无大的差异。此外 ,在生理盐水对照组和随机序列核酸对照组的实验中以及其他行为学模型的实验中 ,两品系也存在着一定的差异。结论　用遗传背景不同的多品系进行相关实验 。 展开更多

关键词 对照组 反义核酸 注射 行为学 实验 C57BL/6小鼠 基因 品系 摄食量 试验

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细胞色素P450酶系的异源表达研究 被引量：4

2

作者 程婕 龚毅 杨凌 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第3期331-336,共6页

传统的药物代谢主要以实验动物为对象进行药物早期及临床研究,近几年来,结合生物化学与分子生物学的发展,药物早期代谢研究进入到药物体外代谢的研究阶段,主要围绕人肝内参与代谢的细胞色素P450家族展开.本文就近年来对此家族酶的异源... 传统的药物代谢主要以实验动物为对象进行药物早期及临床研究,近几年来,结合生物化学与分子生物学的发展,药物早期代谢研究进入到药物体外代谢的研究阶段,主要围绕人肝内参与代谢的细胞色素P450家族展开.本文就近年来对此家族酶的异源表达及其在药物代谢中的应用进行了综述. 展开更多

关键词 药物体外代谢 细胞色素P450s(CYPs) 异源表达 药物筛选

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实验小鼠H-2抗原单克隆抗体的效价研究 被引量：2

3

作者 谭萍萍 谢青莲 +4 位作者 岳作军 翁忠辉 成志恒 白琴华 金玫蕾 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第2期74-76,共3页

目的　研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法　制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 ... 目的　研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法　制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 )的细胞株保存在 - 196℃的液氮中 ,数月后将复苏后的部分细胞株培养 4 8h后 ,取其上清液用微量细胞毒试验法测定抗体的效价 ,并与其原有效价进行比较。结果　单抗初建时效价达到 16 0倍以上的细胞株占总株数的 37%～ 5 3% ,H 2K抗体复苏后效价持平的细胞株占 13% ,效价下降的为 74 % ,效价上升的是 13% ;H 2D抗体效价持平的细胞株占 5 3% ,下降的为 31% ,上升的是 16 %。复苏后的抗体效价大部分与原效价持平或略有下降 ,个别的会有所提高。结论　单克隆抗体的效价略低于同种单价特异性抗血清 ;能否使冻存后的抗体保持原有的效价是抗体能否大量生产并推广的关键 ;要长期保存和生产H 2抗原单抗 ,应加强克隆和检测工作 ,建立稳定的制备、保存和检测系统 。 展开更多

关键词 实验小鼠 H-2抗原 单克隆抗体 效价 遗传 监测

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四个与小鼠摄食、摄水量及蛋白质代谢相关基因的功能研究 被引量：1

4

作者 敖红 丁澄 +7 位作者 李晨 谢青莲 乔伟伟 景乃禾 赵国屏 杨萍 许兰文 金玫蕾 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第1期10-15,共6页

目的　通过对小鼠摄食、摄水量及蛋白质代谢相关基因的功能研究 ,为今后的营养学和营养疾病学的分子生物学水平研究提供一定的依据。方法　利用反义核酸技术与动物行为学实验方法相结合 ,从动物整体水平上研究与动物膳食和营养代谢相关... 目的　通过对小鼠摄食、摄水量及蛋白质代谢相关基因的功能研究 ,为今后的营养学和营养疾病学的分子生物学水平研究提供一定的依据。方法　利用反义核酸技术与动物行为学实验方法相结合 ,从动物整体水平上研究与动物膳食和营养代谢相关的基因功能。从课题组以往研究得到的摄食量与对照组有显著差异的基因中选出 4个 ,用BALB c小鼠进行实验。结果　实验结果表明 :D1、Pe和Tr实验组小鼠的摄食量、摄水量与对照组有明显的差异 ,D1和Tr实验组的蛋白质代谢与对照组有明显的差异。D1实验组小鼠的摄食量和摄水量明显高于对照组并呈下降趋势 ,但其表观消化率小于对照组 ,说明其蛋白质代谢功能有所下降 ;Tr实验组小鼠的摄食量和摄水量也明显高于对照组但呈上升趋势 ,其表观消化率大于对照组 ,说明其蛋白质代谢功能有所上升。结论　预测D1基因可能与促进营养代谢功能有关 ,Tr基因可能与抑制营养代谢功能有关。D1、Pe和Tr与移动、痛觉、记忆等其他行为学有相关性 ,P3与其他行为学无相关性。 展开更多

关键词 RNA 摄食量 摄水量 蛋白质代谢 基因功能 小鼠

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香樟树种子中两种Ⅱ型核糖体失活蛋白凝集素活性的研究 被引量：2

5

作者 杨海燕 李荣秀 刘望夷 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期650-654,共5页

从香樟树成熟的种子分离到两种新的Ⅱ型核糖体失活蛋白 :新丰毒蛋白和辛纳毒蛋白 .两者A链的分子质量虽然相差近一倍 ,但B链的分子质量相同 .Ⅱ型核糖体失活蛋白的A链是RNAN 糖苷酶 ,B链是凝集素 ,A链进入细胞表现毒性在很大程度上依赖... 从香樟树成熟的种子分离到两种新的Ⅱ型核糖体失活蛋白 :新丰毒蛋白和辛纳毒蛋白 .两者A链的分子质量虽然相差近一倍 ,但B链的分子质量相同 .Ⅱ型核糖体失活蛋白的A链是RNAN 糖苷酶 ,B链是凝集素 ,A链进入细胞表现毒性在很大程度上依赖于B链的糖结合活性和特异性 .对辛纳毒蛋白和新丰毒蛋白B链的凝集素活性进行了测定和比较 .红细胞凝集实验显示辛纳毒蛋白和新丰毒蛋白具有相同的细胞凝集活性 ,半抗原抑制实验发现它们都属于半乳糖型核糖体失活蛋白 ,荧光光谱法显示它们的糖结合常数也相同 . 展开更多

关键词 新丰毒蛋白 辛纳毒蛋白 凝集素 荧光光谱法

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分子伴侣过量表达对蛋白质分泌及可溶性的影响 被引量：10

6

作者 杨运桂 童芹 +4 位作者 郑卫东 钱友存 杨胜利 龚毅 mail.srcb.ac.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期382-387,共6页

通过过量表达大肠杆菌分子伴侣 Sec B和 Gro EL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响 .在过量表达 Sec B的宿主菌中 ,周质空间分泌蛋白总量较对照组提高了约 71 % ,GL- 7- ACA酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 1 .5倍 ,碱... 通过过量表达大肠杆菌分子伴侣 Sec B和 Gro EL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响 .在过量表达 Sec B的宿主菌中 ,周质空间分泌蛋白总量较对照组提高了约 71 % ,GL- 7- ACA酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 1 .5倍 ,碱性磷酸酯酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 54% ;在过量表达 Gro EL的宿主菌中 ,周质分泌蛋白总量较对照组提高了约 52 % ,青霉素 G酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 76% ,鲑鱼降钙素六聚体的可溶性组分的比例由原来的 45%增加到约 90 % ,而 MS2 -人白介素 - 3融合蛋白的包涵体有约 1 5%转变为可溶性组份 .上述结果表明 ,分子伴侣 Sec B和 Gro EL的过量表达促进了靶蛋白的分泌 ,Gro 展开更多

关键词 分子伴侣 分泌 可溶性表达 蛋白质 过量表达

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PCR及其衍生技术在基因突变检测中的应用 被引量：11

7

作者 颜志强 杨胜利 龚毅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期198-200,共3页

许多人类遗传性疾病及某些抗艾滋病药物的抗性乃至细菌对某些抗生素的抗药性通常源于基因突变。本文对近年来在基因突变检测中应用日益广泛的各种PCR衍生技术作一综述;重点介绍了错配PCR技术,以及我们实验室近期报道的一种快速检测喹诺... 许多人类遗传性疾病及某些抗艾滋病药物的抗性乃至细菌对某些抗生素的抗药性通常源于基因突变。本文对近年来在基因突变检测中应用日益广泛的各种PCR衍生技术作一综述;重点介绍了错配PCR技术,以及我们实验室近期报道的一种快速检测喹诺酮类药物耐药大肠杆菌的错配PCR方案。 展开更多

关键词 遗传性疾病 抗药性 基因突变 错配PCR 突变检测

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利用rDNA和ITS序列对1株裸甲藻的初步鉴定 被引量：8

8

作者 苟万里 刘东艳 +3 位作者 甄毓 辛泽毓 李荣秀 于志刚 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-83,共9页

测定了 1株分离自青岛胶州湾海水样品、从形态上初步确定为裸甲藻属 (Gymnodiniumsp,编号为 GYN- 1 5)的核糖体基因 (r DNA)和转录单元内间隔区 (Internal Transcribed Spacer,ITS)序列 ,并利用该序列对该藻进行了初步鉴定。测定的序列... 测定了 1株分离自青岛胶州湾海水样品、从形态上初步确定为裸甲藻属 (Gymnodiniumsp,编号为 GYN- 1 5)的核糖体基因 (r DNA)和转录单元内间隔区 (Internal Transcribed Spacer,ITS)序列 ,并利用该序列对该藻进行了初步鉴定。测定的序列长 2 658bp,涵盖了小亚基 (smallsubunit,SSU) r DNA基因 3'端 1 747bp,ITS1 - 5.8S r DNA- ITS2全长和大亚基 (large subunit,LSU) r DNA基因 5'端 337bp。同源性分析该序列发现 GYN- 1 5与共生甲藻属 (Symbiodinium)中的 2个种 (Symbiodinium californium和 Gymnodinium varians)的对应序列具有很高的相似性 ;3株藻的各段 r DNA和 ITS序列的相似性均为 99%以上 ;以 SSU r DNA序列中的 3个可变区 (V1 +V2 +V3)和邻接法构建的系统树表明 ,GYN- 1 5与 S.californium和 G.varians构成 1个独立的新的子类群 ,该子类群属于共生甲藻属 ,而与各种裸甲藻的亲缘关系较远。根据这些结果可将GYN- 1 5初步鉴定为属于共生甲藻属。鉴于 GYN- 1 5和其它 2个种所构成的分支明显与 5个已知的子类群 (A,B,C,D,E)不同 ,因此将该分支命名为子类群 F。 展开更多

关键词 RDNA ITS序列 裸甲藻 序列相似性 系统树 共生甲藻 浮游植物

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人细胞色素P450氧化还原酶的克隆表达和抗体的制备

9

作者 程婕 龚毅 +1 位作者 陈悦 杨凌 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期70-76,共7页

细胞色素P450还原酶(CPR)是人细胞色素P450酶系的电子供给者,对后者活性的发挥起到重要作用.本研究将从人胚胎cDNA文库中得到的人CPR的编码基因,连接入pT7450表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化.每升发酵液可得到纯化蛋白4... 细胞色素P450还原酶(CPR)是人细胞色素P450酶系的电子供给者,对后者活性的发挥起到重要作用.本研究将从人胚胎cDNA文库中得到的人CPR的编码基因,连接入pT7450表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化.每升发酵液可得到纯化蛋白49 mg,占总蛋白含量的10%,以细胞色素C为底物检测酶活性,比活为65 u/mg.利用纯化的CPR作为抗原,常规免疫纯系大耳家兔,获得高效价、高特异性的抗血清,抗体滴度为1∶200 000(ELISA法),纯化后抗体应用于不同组织中CPR含量的评价,证明重组CPR及其抗体可用于细胞色素P450的体外药物代谢及细胞色素P450与CPR作用机理的研究. 展开更多

关键词 人细胞色素P450还原酶 克隆 表达 抗体 药物代谢

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蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析

10

作者 钱友存 胡太山 +4 位作者 范春阳 杨运桂 杨胜利 龚毅 srcb.ac.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期340-345,共6页

选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 ... 选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血清进行 Western blotting.结果显示 ,大多数神经毒素类似物之间没有免疫交叉反应 ,表明这些神经毒素类似物的抗原性差别较大 。 展开更多

关键词 神经毒素类似物 蛋白印迹杂交 免疫学分析

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大鼠小脑特异基因Zic的克隆、序列分析和初步表达 被引量：1

11

作者 蔡莹芸 康建胜 +2 位作者 刘海兰 刘建华 李荣秀 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第7期1071-1075,共5页

EST(AW0 55732 )片段是 SD大鼠脑内一特异表达基因 c DNA的 3′-端片段 ,与小鼠和人的Zic基因同源 .基于小鼠及人的 Zic基因的同源序列 ,设计引物用 PCR方法从 SD大鼠脑中克隆得到该基因的编码区序列 (r Zic) .该基因编码一锌指蛋白 ,... EST(AW0 55732 )片段是 SD大鼠脑内一特异表达基因 c DNA的 3′-端片段 ,与小鼠和人的Zic基因同源 .基于小鼠及人的 Zic基因的同源序列 ,设计引物用 PCR方法从 SD大鼠脑中克隆得到该基因的编码区序列 (r Zic) .该基因编码一锌指蛋白 ,其锌指结构域与线虫的 tra- 1基因 ,果蝇的ci D基因 ,人的 Gli癌基因和果蝇的 opa基因的锌指结构域高度同源 .用 RT- PCR方法分析了 r Zic基因在大鼠脑区分布状况 .结果表明 ,r Zic基因在小脑中高表达 .将该 r Zic基因克隆至带有 6个组氨酸的表达载体 p ET- 32 a(+)中 ,用 IPTG诱导 r Zic融合蛋白在大肠杆菌 BL2 1菌株中表达 ,诱导后重组蛋白质占菌体总蛋白的 2 0 .8% . 展开更多

关键词 Zic基因 锌指结构 小脑 SD大鼠 基因克隆 序列分析 锌指蛋白

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免疫学方法在有害赤潮藻细胞检测中的应用

12

作者 亓海刚 米铁柱 +3 位作者 甄毓 辛泽毓 李荣秀 于志刚 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期92-96,共5页

关键词 赤潮藻 免疫学方法 细胞检测 海水养殖业 种类鉴定 应用 赤潮监测 分类技术

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